Справочник химика 21. Высокоаффинные антитела


Антитела высокоаффиниые - Справочник химика 21

    Аффинность связывания антител с антигеном представляет не только теоретический интерес. От нее, как и от авидности, зависят физиологические и патологические эффекты антител. Высокоаффинные антитела гораздо активнее низкоаффинных в ряде биологических реакций рис. 9.14). В экспериментах на животных иммунные комплексы, содержащие низкоаффинные антитела, длительно персистируют в циркуляции и [c.155]     Начало интоксикации связано со способностью токсинов взаимодействовать с соответствующими рецепторами на поверхности клеток-мишеней. Этому процессу противодействуют высокоаффинные, нейтрализующие антитела, относящиеся к IgG- и IgA-изотипам. Первые нейтрализуют токсин во внеклеточном пространстве внутренних тканей организма, вторые — на слизистых поверхностях, имеющих контакт с внешней средой. [c.256]

    Другие перемещаются в первичный фолликул, где пролиферируют, образуя центры размножения, и подвергаются отбору на аффинность. После дифференцировки до плазмоцитов начинается активный синтез высокоаффинных антител заданной специфичности. [c.336]

    На практике часто условно подразумевают, что если константа равновесия процесса комплексообразования больше, чем 10 л/моль, то антитела являются высокоаффинными. [c.36]

    В частности, например, описаны распределения, сильно смещенные в сторону антител с низкой аффинностью.. Вследствие этого представление всей популяции антител как популяции, взаимодействующей с одной средней аффинностью (Ко) или даже как бимодальной Ко высокоаффинная и Ко —низкоаффинная), не всегда точно отражает распределение антител по аффинности. [c.40]

    Взаимодействие двух субпопуляций антител с моновалентным антигеном. Одним из простых приближений при описании реальных систем взаимодействия моновалентного антигена (гаптена) с антителами может быть модель, согласно которой набор популяций антител заменяется двумя —высокоаффинной и низкоаффинной, каждая из которых характеризуется собственной константой комплексообразования — Kt и Кг. Задача определения констант и концентраций каждой из фракций антител перед экспериментаторами возникает ч асто. Знание численных значений этих параметров весьма важно для разработки конкретных наборов для иммуноферментного анализа и выбора схемы проведения имму- [c.47]

    Несмотря на универсальность методик введения ферментных меток в молекулы антител, многообразие антигенов затрудняет получение меченых специфических антител в количествах, обеспечивающих потребности массовых анализов. Кроме того, на ряд антигенов трудно получить высокоаффинные антитела, а дополнительная их модификация при связывании с ферментом может приводить к дальнейшему снижению способности взаимодействовать с антигеном. [c.101]

    Отбор высокоактивных иммунных антисывороток, определение конечного и рабочего титра Оценка аффинности и концентрации фракции высокоаффинных антител [c.158]

    Из рассмотрения изотермы связывания меченого антигена с антителами следует, что условия В популяция антител гетерогенна по аффинности к антигену, то концентрацию меченого антигена следует выбирать такой, чтобы условие В [c.230]

    Если значения концентраций и констант связывания двух функций антител значительно отличаются, то возрастание [Аг ]о может приводить к возрастанию фонового сигнала, что проявляется в сдвиге правой части калибровочного графика вверх по ординате. Это объясняется тем, что при достижении полного заполнения высокоаффинных центров связывания дальнейшее возрастание [Аг ]о ведет к увеличению связывания конъюгата только с низкоаффинной фракцией, дающей вклад в калибровочную кривую в виде практически не меняющегося в необходимом диапазоне концентраций [Аг]о сигнала. Расчетные кривые приведены на рис. 42. Для получения теоретической иллюстрации этого эффекта в модель были введены соответствующие усложнения, позволяющие считать популяцию антител состоящей из двух фракций с различным сродством к антигену. [c.243]

    При использовании аффинной хроматографии для выделения антигена из раствора используют антитела, иммобилизованные на нерастворимом носителе. При этом ключевым параметром иммуносорбции становится аффинность моновалентного взаимодействия [17]. Благодаря высокой концентрации МКА, присоединенных к гелю, связывание антигена, как правило, происходит достаточно быстро, и лишь в исключительных случаях кинетические параметры иммуносорбции требуют скорости потока меньшей, чем обычно используемая — один объем колонки в час. Выявление МКА обычно основано на поливалентном связывании с антигеном (см. рнс. 5.1), в котором участвуют как низко-, так и высокоаффинные антитела. Однако для аффинной хроматографии требуются антитела, обеспечивающие моновалентное связывание. Поэтому среди имеющихся МКА необходимо провести дополнительный отбор препаратов, обладающих нужной аффинностью. Это можно сделать, например, по способности МКА вызывать иммунопреципитацию антигена или по торможению растворимым (одновалентным) антигеном связывания с поливалентным антигеном, иммобилизованным на поверхности клеток или пластиковых панелей [17]. На рис. 5.2 схематично изображены взаимодействия, возможные при реакции торможения. Очевидно, торможение происходит лишь в том случае, если время диссоциации 50% моновалентных связей примерно равно или превышает время проведения самого анализа. Антитела, у которых 1./, составляет более 10 мин. [c.171]

    Размеры зон гемолиза зависят и от количества, и от качества выделяющихся антител при одина Говом числе молекул высокоаффинные антитела образуют меньшие зоны, чем низкоаффинные. [c.53]

    Несмотря на простоту идей, лежащих в основе получения рекомбинантных антител с использованием фагового дисплея, его реализация на практике (как впрочем и любой другой искусственной генетической системы) требует учета массы весьма существенных деталей. В частности, антигены, применяемые в такой системе, должны быть высокоочищенными полученные с помощью фагового дисплея антитела часто не взаимодействуют с нативными белками эффекты авидности могут затруднять отбор высокоаффинных клонов разные клоны с одинаковой аффинностью трудно дифференцировать друг от друга и т.д. [270-272]. [c.426]

    Описанные выше представления позволяют легко объяснить, почему при вторичном ответе продуцируются высокоаффинные антитела. При первой иммунизации происходит селекция клеток с наибольшим сродством к антигену. Они получают преимущество в [c.94]

    Аффинность антитела к антигену - это результирующая возникающих между ними сил притяжения и отталкивания. Высокоаффинные антитела точно комплементарны по конформации антигену, а низкоаффинные, напротив, неточно. [c.152]

    Высокоаффинные антитела часто эффективнее низкоаффинных [c.155]

    Преимущества высокоаффинных антител выявляются в следующих реакциях [c.156]

    Биологические реакции, в которых высокоаффинные антитела эффективнее низкоаффинных. [c.156]

    Средняя аффинность IgM- и IgG-антител, образующихся после первичного и вторичного введения Т-зависимого антигена. Аффинность IgM на протяжении всего ответа остается постоянной. Созревание аффинности при IgG-ответе зависит от дозы повторно введенного антигена. При использовании низких доз антигена продуцируются более аффинные антитела, чем при введении высоких доз, поскольку высокоаффинные клоны более успешно конкурируют за антиген при его ограниченном количестве. [c.213]

    В реакцию распознавания антигена (АГ) вступают В-клетки нескольких клонов, имеющих близкие, но т м не менее несколько отличающиеся по специфичности антигенраспознающие рецепторы. В силу этого на самых ранних этапах развития иммунного ответа пул специфических антител будет наибапее гетерогенным. Клон, имеющих антигенраспознающие рецепторы с наибольшим сродством к антигену, будет обладать селективны.м преимуществом в размножении, что обеспечит ускоренное накопление высокоаффинных антител, именно в этом клоне, количественно большим друнгих клонов, вступят в работу с батьшей эффективностью механизмы переключения синтеза IgM на IgG и формирования клеток памяти. Схема объясняет как большую аффинность IgG по сравнению с таковой IgM, так и преимущественный синтез высокоаффинных IgG антител при вторичном ответе [c.250]

    Гистологическая картина образования активных антителопродуцентов. Одной из характерных черт организации лимфоидной ткани является наличие так называемых центров размножения, которые представляют собой место пролиферации, трансформации и селекции В-клеточных клонов (рис. 9.21). В-Лимфоциты, активированные хелперными Т-клетками в тимусзависимой зоне лимфоидной ткани либо сразу дифференцируются в плазматические клетки, продуцирующие ранние, суммарно низкоаффинные антитела, либо перемещаются в первичные фолликулы и образуют там центры размножения. Здесь они, во-первых, подвергаются селекции на наличие высокоаффинных антигенраспознающих иммуноглобулиновых рецепторов и, во-вторых, завершают дифференцировку в плазмоциты, продуцирующие высокоаффинные антитела. Часть В-клеток с высокоаффинными рецепторами трансформируется в клетки памяти. [c.251]

    При вторичном ответе принципиальные события, очевидно, те же, что и при первичном ответе. Однако в реакцию на антиген вс1упают уже подготовленные клетки с высокоаффинными антигенраспознающими рецепторами. Возможно, при вторичном ответе идет дополнительное повышение аффинности рецепторов, что определяет еще большее сродство антител к антигену. Это предположение строится на экспериментальных данных по последовательному повышению аффинности антител после первичной, вторичной и третичной иммунизации. [c.337]

    У амфибий, как и у рыб, воспроизводится феномен гаптен— носитель, в котором именно Т-клетки с хелперной активностью распознают носитель. Анализ взаимодействия Т- и В-клеток у амфибий обогащен данными о роли антигенов гистосовместимости в клеточной кооперации. Феномен гаптен—носитель был проанализирован, в частности, у лягушки Xenopus laevis в опытах с разделенными на нейлоновой вате Т-клетками, примированными к носителю, и В-клетками, примированными к гаптену. Антитела изотипа IgY, которые являются высокотимусзависимыми, и высокоаффинные IgM-антитела обнаруживались в Т-В-клеточной культуре только в условиях идентичности гаплотипов взаимодействующих клеток. [c.430]

    Гкбридома — гибридная клеточная линия, полученная в результате слияния антителопродуцирующей клетки с миеломной, активно пролиферирующей клеткой, у которой отсутствует собственный синтез иммуноглобулинов гибридома образует высокоаффинные антитела узкой специфичности. [c.460]

    Концентрация фракции антител с высоким эффективным значением константы связывания, как правило, значительно ниже, чем с низким. Для разработки суперчувствительных систем детекции бывает необходимо выделять наиболее высокоаффинную фракцию и использовать в анализе только ее. Это может достигаться путем адсорбции антител на иммобилизованном антигене и последующей их элюцией линейным или ступенчатым градиентом pH, что [c.220]

    Выражение (9.21) иллюстрирует логически понятное положение о необходимости использования для детекции низких концентраций антигена высокоаффинных антител. Из этого же выражения следует, что для снижения абсолютного значения [Аг]мпя (т. е. для повышения чувствительности) необходимо снижать концентрацию [Ат]о до примерно равной орратной константе связывания 1//С. Дальнейшее снижение [Ат]о нецелесообразно, так как в пределе может привести только к двукратному уменьшению [Аг]мии. что в большинстве случаев непринципиально. Б то же время возможность уменьшения [Ат]о лимитируется чувствительностью детекции Метки, концентрация которой в комплексе с антителами, очевидно, [c.239]

    Аг ]о для кривых (о) и (б) соответственно равны 1 н 10 нМ популяция антител с общей концентрацией [Ат]о=0,3 иМ считается состоящей иа 30% из высокоаффинных связывающих центров (А1 - 1 =5 10 М- -с- А 1=А 1 = 10- с- ) и иа 70% из низкоаффриных ( 1= = 1 =10 М- -с- А 1-А 1 = 10- с- ) время =10 мин [c.243]

    Возможна также и ситуация, в которой уменьшение [Аг ]о также может привести к искажению калибровочной кривой. Допустим, что в анализе используются высокоаффинные антитела (/С 1ДАт]о). Тогда при низких значениях Аг ]о меченый антиген может практически полностью связаться с антителами даже при условии, что концентрация свободных центров связывания существенно меньше [Ат]о. Это приведет к тому, что рост концентрации свободных центров связывания не будет сопровождаться увеличением связывания меченого антигена, следствием чего будет появ-аение плато в начальной части калибровочной кривой, т. е. ниж-яий предел обнаружения антигена повысится. Улучшить чувствительность в такой ситуации можно увеличением [Аг ]о до значений, равных или превосходящих [Ат]о (рис. 43). [c.244]

    Авидин и стрептавидин в качестве меченых зондов. Принципиальная схша этого метода представлена на рис. 5.3. Исследуемый образец инкубировали с высокоаффинными моноклональными антителами, ковалентно связанными с полистирольными шариками диаметром 6,5 мм [19 ]. Затем в систему вводили биоти-нилированные антитела к другим эпитопам антигена. По завершении иммунологической реакции добавляли авидин, меченный ферментом, или содержащий хемилюминесцентную метку стрептавидин. В зависимости от используемого маркера измерение осуществляли спектрофотометрически или по интенсивности люминесценции. [c.68]

    Преципитация (агрегация) антигена антителами происходит не всегда, даже если сам факт высокоаффинного связывания имеет место. Агрегация требует соблюдения нескольких условий. Во-первых, и антитело, и антиген должны быть, как минимум, бивалентными (т. е. каждая молекула антигена должна иметь не менее двух идентичных детерминант, а каждая молекула антитела не менее двух активных центров, специфичных к этим детерминантам). На рис. 28 легко увидеть, что моновалентность любого из двух партнеров запрещает образование мультимолекулярных комплексов. [c.72]

    Аффинность антител к большинству Т-зави-симых антигенов нарастает в ходе иммунного ответа. Ее увеличения можно достичь также особыми способами иммунизации. Например, субпопуляция высокоаффинных антител в сыворотке увеличится, если антиген вводить вместе с ИФу (рис. 9.15). Ряд иммуноадъювантов стимулирует образование антител, но лишь некоторые способны повысить их аффинность. Поскольку от этого свойства зависит эффективность антител, ИФу вполне пригоден для использования в качестве адъюванта в составе вакцин. [c.156]

    Приведенные выще данные о взаимодействии Т-и В-клеток указывают на то, что единственно возможный его результат — активация В-лимфоцитов. Однако в действительности это не так. Как было отмечено выще, кооперация АПК с Т-клетками способна давать диаметрально противоположные результаты, а именно вызыватьлибо активацию, либо инактивацию (клональную анергию) клеток. То же самое имеет место и в случае В-лимфоцитов, которые часто переходят в состояние анергии. Этот процесс очень важен в связи с тем, что созревание аффинности антител в ходе иммунного ответа — результат гипермутирования генов, кодирующих вариабельные области антител, - может легко приводить к образованию высокоаффинных аутоантител. Клональная анергия и другие формы периферической толерантности необходимы для того, чтобы такие потенциально опасные клоны молчали . Одна- [c.202]

    Процесс созревания В-клеточной аффинности протекает в центрах размножения (рис. .25). Они образуются в селезенке или лимфатических узлах спустя несколько суток после антигенной стимуляции. В-лимфоциты, активированные Т-клетками посредством связывания D40 с его лигандом, мигрируют в первичные фолликулы, где имеется густая сеть фолликулярных дендритных клеток. В этом окружении происходит быстрое деление В-клеток, сопровождающееся соматическим мутированием lg-генов. В-клетки с высокоаффинными рецепторами проходят отбор по выживаемости, основанный на взаимодействии их мембраносвязанных поверхностных антител и комплекса В-клетка-корецептор с антигеном и комплементом на поверхности фолликулярных дендритных клеток. При прохождении через центр размножения В-лимфоциты экспрессируют ген клеточной выживаемости , bd-2. Клетки с высокоаффинными IgG за счет связывания продукта bd-2 избегают апоптоза клетки же с низкоаффинными рецепторами таким свойством не обладают и погибают в результате апоптоза. [c.214]

    При активации антигеном (с помощью Т-клеток) В-клетки либо созревают в АОК, а затем, достигая окончательной сталии дифференцировки, в плазматические клетки, либо превращаются в клетки памяти. Получены убедительные доказательства того, что важную роль в качестве места формирования В-клеток памяти играют центры размножения в различных периферических лимфоидных тканях (см. гл. 3 и 11). Здесь в В-клетках происходит активное гипермутирование генов вариабельной области антител, в результате которого одни клетки погибают (апоптоз), а другие выживают. Презентация антигена фолликулярными дендритными клетками внутри центров размножения обеспечивает выживание клеток, обладающих высокоаффинными рецепторами к чужеродному антигену. [c.234]

chem21.info

Аффинность и авидность антител - Справочник химика 21

    Аффинность и авидность антител [c.20]

    Для получения поликлональных антисывороток, используемых в повседневных иммунологических методах исследования, особенно в реакциях преципитации, применяют более крупных животных, в частности лабораторных кроликов. Кроликов можно содержать в клетках, они хорошо размножаются в неволе, выносливы и долго живут. Уход, иммунизация и взятие Крови у этих животных не представляют труда. Полученные от кроликов антисыворотки обладают хорошими преципитиру-ющими свойствами и стабильны при хранении, иммуноглобулиновая фракция легко поддается очистке. Кроме того, такие антисыворотки, обладая высокой авидностью/аффинностью пригодны для использования в чувствительных иммунологических тестах. В течение нескольких месяцев в период максимального ответа можно получить не менее 100 мл антисыворотки и еще 150 мл при аутопсии. Аутбредные кролики отвечают на иммуноген по-разному, поэтому следует использовать для иммунизации несколько животных, протитровать их сыворотки по отдельности, затем смешать отобранные пробы, если требуется максимальное разнообразие антител. Кролики достаточно хорошо отвечают на широкий спектр ммуногенов в сочетании с адъювантом Фрейнда образованием IgG. [c.41]

    Отбор моноклональных антител, связывающихся с различными эпитопами на антигене. Для высокоспецифического выявления ряда антигенов наиболее удобной является сэндвич -модификация твердофазного иммуноферментного анализа. Использование в таком типе анализа двух моноклональных антител, взаимодействующих с разными эпитопами, позволяет сократить время анализа. Кроме того, такие пары моноклональных антител в ряде случаев обладают большей авидностью по сравнению с аффинностью каждого отдельного антитела. Для выявления антител, связывающихся с различными центрами на антигене, обычно используют три метода. [c.173]

    Несмотря на простоту идей, лежащих в основе получения рекомбинантных антител с использованием фагового дисплея, его реализация на практике (как впрочем и любой другой искусственной генетической системы) требует учета массы весьма существенных деталей. В частности, антигены, применяемые в такой системе, должны быть высокоочищенными полученные с помощью фагового дисплея антитела часто не взаимодействуют с нативными белками эффекты авидности могут затруднять отбор высокоаффинных клонов разные клоны с одинаковой аффинностью трудно дифференцировать друг от друга и т.д. [270-272]. [c.426]

    Аффинность связывания антител с антигеном представляет не только теоретический интерес. От нее, как и от авидности, зависят физиологические и патологические эффекты антител. Высокоаффинные антитела гораздо активнее низкоаффинных в ряде биологических реакций рис. 9.14). В экспериментах на животных иммунные комплексы, содержащие низкоаффинные антитела, длительно персистируют в циркуляции и [c.155]

    Б. Влияние аффинности и авидности антител [c.232]

    Подробности в табл. 3.1. Каждый антигенсвязывающий центр имеет невысокую аффинность, но связывание во многих центрах увеличивает среднюю авидность антитела (см. рис. 3.7). [c.78]

    Увеличение средней авидности и аффинности антител. [c.37]

    Высокая специфичность и малый размер dAb делают их особенно удобными для получения путем отбора из комбинаторных клонотек последовательностей, а также для осуществления аффинного созревания и наработки в большом количестве с помощью генно-инженерных методов. Кроме того, небольшие молекулы легче доставляются к мишеням внутри организма при терапевтических воздействиях. В то же время короткие полипептиды значительно менее стабильны в биологических жидкостях по сравнению с полноразмерными антителами, что ограничивает их клиническое применение. Для преодоления этого затруднения проводятся работы по созданию конъюгатов dAb с полиэтиленгликолем, сывороточным альбумином, а также Рс-фрагментами или целыми константными частями молекул антител. По предварительным данным каждый из таких методов существенно улучшает свойства dAb как потенциальных лекарственных препаратов. Так же, как и в случае s Pv-фрагментов антител, dAb удобно димеризовать для повышения авидности и создания миниантител двойной специфичности. Альтернативно, гетеродимеризацию можно проводить, используя дисульфид-ную связь между доменами Сн1 и l, которая приводит к обра- [c.421]

    Сушествует ряд методов определения аффинности антител и авидности антисывороток. Проце- [c.156]

    Авидность. Мера прочности связывания антител с антигеном, определяемая как аффинностью взаимодействия между эпитопами и паратопами, так и валентностью антител и антигена. [c.556]

    Антисыворотки, полученные даже от одного животного, значительно различаются по своей способности связывать антиген. Для сравнительной характеристики и оценки качества антисывороток проводят их тестирование, которое позволяет решить следуюш,ие две важные задачи во-первых, произвести отбор цменно тех сывороток, которые по своим свойствам (специфичности, аффинности, авидности и концентрации присут-ствуюш,их в них специфических антител) удовлетворяют требованиям иммунохимического. анализа во-вторых, осуш,ествить стандартизацию антисывороток при их промышленном. производстве для иммуноферментных наборов. [c.157]

    Если судить по величине константы равновесия, поливалентное связывание антител с антигеном (функциональная аффинность, или авидность) значительно прочнее простого моновалентного связывания (собственно аффинности, константа которой принята в данном случае произвольно за 10 л моль ). Раньше этот феномен называли усиливающим эффектом поливалентности благодаря такому эффекту энергия связывания увеличивается, например, в случае IgG в 10 раз при участии в нем обоих антигенсвязывающих центров молекулы и в случае IgM в 10 раз. [c.153]

    Введенный мышам, эндотоксин увеличивает сосудистую проницаемость и повреждает клетки, приводя к высвобождению ДНК, которая затем откладывается (1) на коллагене базальной мембраны клубочкового капилляра (БМКК). Эндотоксин может вызывать также поликлональную активацию В-клеток, часть которых продуцирует аутоантитела, такие как анти-ДНК и анти-IgG (последние известны как ревматоидные факторы, РФ). Антитела анти-ДНК связываются с отложениями ДНК, образуя местные иммунные комплексы (2). РФ обладают низкой аффинностью к мономерному IgG, но с высокой авидностью связываются с уже образовавшимся комплексом ДНК/анти-ДНК (3). Таким образом, in situ происходит дальнейшее формирование иммунного комплекса. [c.467]

    Важная аксиома биологии гласит, что эффективность биохимической реакции зависит от степени связывания или слипания разных молекул. Взаимодействие между отдельным центром связывания антитела с комплементарным ему антигеном можно оценить количественно. Для этого в пробирке смешивают антиген и антитело в разных концентрациях и определяют, какая часть смеси находится в связанной форме (комплекс антиген-антитело), а какая — в несвязанной (рис. 3.6). Этот метод дает возможность оценить аффинность (сродство) антигенсвязывающего центра. Когда связывается больше одного центра, как у IgG или мономера IgM, имеющих по два центра, или у пентамера IgM с десятью центрами, в действие вступает новый фактор. Если чужеродный агент имеет на поверхности множество идентичных структур (как у бактериальных или вирусных частиц), то, как только происходит одно взаимодействие антиген-антитело, вероятность второго возрастает, и так далее (рис. 3.7). Таким образом, пентамер IgM может прилипать к поверхности бактерии, даже если аффинность отдельного антигенсвязывающего центра низка (из-за относительно плохого соответствия антигену). Сила такого множественного связывания антигена с антителом называется авидностью. Итак, высокая авидность IgM обеспечивает организму селективные преимущества, так как он образуется в первые часы и дни инфекции и способен связывать бактерии в крови и вызывать их элиминацию. [c.83]

chem21.info

Антитела низкоаффинные - Справочник химика 21

    Взаимодействие двух субпопуляций антител с моновалентным антигеном. Одним из простых приближений при описании реальных систем взаимодействия моновалентного антигена (гаптена) с антителами может быть модель, согласно которой набор популяций антител заменяется двумя —высокоаффинной и низкоаффинной, каждая из которых характеризуется собственной константой комплексообразования — Kt и Кг. Задача определения констант и концентраций каждой из фракций антител перед экспериментаторами возникает ч асто. Знание численных значений этих параметров весьма важно для разработки конкретных наборов для иммуноферментного анализа и выбора схемы проведения имму- [c.47]     В частности, например, описаны распределения, сильно смещенные в сторону антител с низкой аффинностью.. Вследствие этого представление всей популяции антител как популяции, взаимодействующей с одной средней аффинностью (Ко) или даже как бимодальной Ко высокоаффинная и Ко —низкоаффинная), не всегда точно отражает распределение антител по аффинности. [c.40]

    Если значения концентраций и констант связывания двух функций антител значительно отличаются, то возрастание [Аг ]о может приводить к возрастанию фонового сигнала, что проявляется в сдвиге правой части калибровочного графика вверх по ординате. Это объясняется тем, что при достижении полного заполнения высокоаффинных центров связывания дальнейшее возрастание [Аг ]о ведет к увеличению связывания конъюгата только с низкоаффинной фракцией, дающей вклад в калибровочную кривую в виде практически не меняющегося в необходимом диапазоне концентраций [Аг]о сигнала. Расчетные кривые приведены на рис. 42. Для получения теоретической иллюстрации этого эффекта в модель были введены соответствующие усложнения, позволяющие считать популяцию антител состоящей из двух фракций с различным сродством к антигену. [c.243]

    Из выражения (3.19) следует, что [Аг] о = 1/ С при условии 1/ >[Ат]о (т. е. либо антитела являются низкоаффинными либо их концентрация мала). При обратном соотношении (1/7С С[Ат]о) данный метод определения К неприемлем. [c.45]

    Аффинность связывания антител с антигеном представляет не только теоретический интерес. От нее, как и от авидности, зависят физиологические и патологические эффекты антител. Высокоаффинные антитела гораздо активнее низкоаффинных в ряде биологических реакций рис. 9.14). В экспериментах на животных иммунные комплексы, содержащие низкоаффинные антитела, длительно персистируют в циркуляции и [c.155]

    Анализ данной модели позволяет оценивать влияние добавки в систему низкоаффинной фракции антител на результаты определения антигена (рис. 37). Из решения системы уравнений (9.15—9.18) на ЭВМ следует, что вклад низкоаффинных антител в основном проявляется в сдвиге калибровочного графика вверх по оси ординат и увеличению фонового сигнала. [c.236]

    Последняя проблема, которую необходимо решить, — это проблема скрининга. Важно иметь надежную методику для простого и точного скрининга культуральных жидкостей отдельных клонов на содержание антител нужной специфичности. Избранный метод (например, РИА, ELISA и т. д.) должен быть чувствительным и должен давать по возможности количественную информацию. Анализ, основанный на связывании флуоресцент-номеченных антител (иммунофлуоресцентный метод, ИФМ), требует наличия 0,2—1 мкг МА в 25 мкл культуральной жидкости. При этом с его помощью можно определять большинство типов детерминант клеточных поверхностей. Этот метод дает также количественную информацию о среднем числе молекул, экспрессируемых на одной клетке, что является немаловажным преимуществом в случае низкоаффинных МА. Поскольку [c.178]

    Аналогичный эффект наблюдается и при наличии процесса неспецифического взаимодействия, который обусловлен связыванием меченого антигена избытком центров, обладающих меньшей константой связывания, чем антитела. Для подавления роста вклада неспецифического связывания (или влияния низкоаффинных антител) можно рекомендовать использовать в анализе концентрацию меченого антигена, при которой связывающие центры антител заполняются не более чем на 60—70% или, в линейном приближении, [Аг ]о 1/( 1 Т) (при выбранном оптимальном времени Т). [c.244]

    Биологические реакции, в которых высокоаффинные антитела эффективнее низкоаффинных. [c.156]

    Размеры зон гемолиза зависят и от количества, и от качества выделяющихся антител при одина Говом числе молекул высокоаффинные антитела образуют меньшие зоны, чем низкоаффинные. [c.53]

    I Для первичного иммунного ответа на Т-зависимые антигены характерно образование низкоаффинных IgM-антител. При вторичном иммунном ответе продуцируется большее количество антител и происходит переключение изотипов с образованием IgG, IgA и IgE. Одновременно с этим возрастает аффинность антител. [c.194]

    Аффинность антитела к антигену - это результирующая возникающих между ними сил притяжения и отталкивания. Высокоаффинные антитела точно комплементарны по конформации антигену, а низкоаффинные, напротив, неточно. [c.152]

    Высокоаффинные антитела часто эффективнее низкоаффинных [c.155]

    Гистологическая картина образования активных антителопродуцентов. Одной из характерных черт организации лимфоидной ткани является наличие так называемых центров размножения, которые представляют собой место пролиферации, трансформации и селекции В-клеточных клонов (рис. 9.21). В-Лимфоциты, активированные хелперными Т-клетками в тимусзависимой зоне лимфоидной ткани либо сразу дифференцируются в плазматические клетки, продуцирующие ранние, суммарно низкоаффинные антитела, либо перемещаются в первичные фолликулы и образуют там центры размножения. Здесь они, во-первых, подвергаются селекции на наличие высокоаффинных антигенраспознающих иммуноглобулиновых рецепторов и, во-вторых, завершают дифференцировку в плазмоциты, продуцирующие высокоаффинные антитела. Часть В-клеток с высокоаффинными рецепторами трансформируется в клетки памяти. [c.251]

    Процесс созревания В-клеточной аффинности протекает в центрах размножения (рис. .25). Они образуются в селезенке или лимфатических узлах спустя несколько суток после антигенной стимуляции. В-лимфоциты, активированные Т-клетками посредством связывания D40 с его лигандом, мигрируют в первичные фолликулы, где имеется густая сеть фолликулярных дендритных клеток. В этом окружении происходит быстрое деление В-клеток, сопровождающееся соматическим мутированием lg-генов. В-клетки с высокоаффинными рецепторами проходят отбор по выживаемости, основанный на взаимодействии их мембраносвязанных поверхностных антител и комплекса В-клетка-корецептор с антигеном и комплементом на поверхности фолликулярных дендритных клеток. При прохождении через центр размножения В-лимфоциты экспрессируют ген клеточной выживаемости , bd-2. Клетки с высокоаффинными IgG за счет связывания продукта bd-2 избегают апоптоза клетки же с низкоаффинными рецепторами таким свойством не обладают и погибают в результате апоптоза. [c.214]

    Особая область в лимфатических узлах или селезенке, где активированные антигеном В-клетки интенсивно делятся каждые 5-7 ч (для большинства других соматических клеток время между делениями составляет около 20 ч). В типичном центре размножения находится примерно 20 тыс. В-клеток, происходяших от одной-трех клеток-основателей. В центрах размножения активируется процесс соматического гипермутирования В-клеток. Клетки, несущие на поверхности мутантные антитела высокой аффинности, отбираются антигеном, выживают и образуют В-клетки памяти. Клетки, несущие нефункциональные или низкоаффинные антитела, не отбираются антигеном и погибают (в результате апоптоза). Центры размножения, следовательно, можно рассматривать как места интенсивного дарвиновского выживания наиболее приспособленных продуцирующих антитела клеток. [c.208]

    Величина этого параметра определяет возможность применения тех или других антител. Иммуноанализ и гистохимические методы требуют антител с высоким сродством (/Ссв=Ю-э—чтобы комплексы антигена с антителами были очень прочными С другой стороны, имму-ноаффинная очистка лучше осуществляется с низкоаффинными антителами Ксв=10- —10- ), поскольку в этих условиях адсорбция и освобождение антитела проходят при относительно мягких условиях без повреждения антигена и антител и колонка может использоваться повторно. Анализ взаимодействия антител с антигеном проводят по методу Скэтчарда (см. с. 343) с использованием радиоиммунного анализа. [c.324]

chem21.info


Смотрите также