Расшифровка анализа на иммуноглобулин Е. Высокая концентрация антител


Анализ на иммуноглобулин Е: норма, повышен, понижен

Что означает и показывает иммуноглобулин е

Общий иммуноглобулин Е (lg E) – важный анализ, используемый для диагностики воспалений и аллергических реакций, который изменяется практически мгновенно после воздействии раздражителя. С помощью теста на иммуноглобулины класса Е можно определить аллергены или выявить наличие некоторых заболеваний, таких, как крапивница, бронхиальная астма и т.д. Подробнее о том, что это такое – общий иммуноглобулин Е и зачем его назначают, расскажем ниже.

к оглавлению ↑

Что такое иммуноглобулин Е?

Можно сказать, что иммуноглобулины – это главные стражники нашего иммунитета. Количество их разновидностей равно количеству возможных инфекций. Иммуноглобулин Е отвечает за защиту внешних слоев тканей, которые контактируют с окружающей средой. Это кожа, слизистая ЖКТ, органов дыхания, миндалины и т.д. В крови здорового человека иммуноглобулин класса Е находится в небольшом количестве.

В отличие от других иммуноглобулинов, тип Е является специфическим показателем аллергии. Аллерген, проникающий или контактирующий с тканями вступает во взаимодействие с lgE, в результате которого он связывается в комплекс, а в месте воздействия возникает аллергическая реакция:

Насморк, заложенность носа, частые чихания и увеличение чувствительности слизистой носа.

Изменение цвета или формы кожных покровов.

Кашель, вызванный воспалением бронхов.

Присутствие хрипов, затруднения дыхания, одышки, вызванные уменьшением просвета бронхов, носит хронический характер.

  • Анафилактический шок.

Немедленная аллергическая реакция на раздражитель, характеризуемая высокой чувствительностью и в некоторых случаях имеющая летальный исход.

У человека начинает синтезироваться это защитное вещество уже на 11-ю неделю внутриутробной жизни. Если наблюдается повышенный иммуноглобулин Е в пуповинной крови, вероятность аллергических реакций у ребенка очень высока.

к оглавлению ↑

Зачем назначают анализ на иммуноглобулин Е?

Норма этого вещества, а точнее отклонение от нормы указывает на протекание различных атопических аллергий, но не достаточно установление самого факта аллергии. Часто бывает необходимым выяснить фактор-раздражитель, то есть аллерген.

Симптомы, являющиеся поводом для анализа:

  • Высыпания на коже;
  • Зуд;

Эти симптомы чаще всего сопряжены с рядом заболеваний. При подозрении на какое-либо из них рекомендуется сдать анализ и выяснить, что показывает кровь на иммуноглобулин Е. К таким заболеваниям относятся:

  • Бронхиальная астма;
  • Отек Квинке;

Обширная крапивница, вызванная аллергией антиген-антитело, которая чаще всего проявляется у молодых женщин.

  • Бронхит;
  • Аллергический дерматит;
  • Поллиноз;

Аллергическая реакция, проявляющаяся в определенный сезон на пыльцу растений.

  • Сенная лихорадка;

То же самое, что аллергический ринит.

  • Синдром Лайелла;

Тяжелое, зачастую летальное заболевание, которое поражает все кожные покровы и слизистые пострадавшего, имеет аллергическую природу и требует неотложной медицинской помощи.

  • Заражение паразитами;
  • Лимфогранулематоз;

Опухоль лимфатической системы, которая начинается с увеличения лимфатических узлов и затем влияет на все органы.

Если по результатам биохимического анализа иммуноглобулин Е повышен, то это значит, что диагноз с высокой вероятностью подтверждается.

к оглавлению ↑

Как сдавать анализ?

Сдавать кровь на иммуноглобулин следует, придерживаясь тех же правил, что характерны для любого другого биохимического анализа крови. А именно:

  • Кровь сдается утром;
  • Натощак – после крайнего приема пищи должно пройти минимум 10 часов;
  • Перед сдачей крови избегайте физических нагрузок и сильных эмоций;
  • Количество потребляемой воды не ограничивается;
  • Накануне сдачи крови не употреблять жирную пищу, алкоголь;
  • За день перед походом в лабораторию не желательно проводить УЗИ, флюорографию, рентгенографию.

Стоит добавить, что может быть иммуноглобулин Е повышен неоправданно из-за ошибок лаборатории, которые нельзя никогда исключать. Для уточнения результата можете сдать кровь повторно или обратиться в другое медицинское учреждение.

к оглавлению ↑

Норма иммуноглобулина Е

В отличие от других классов антител, иммуноглобулин Е в кровотоке практически не встречается. Его формирование происходит тогда, когда есть необходимость защищать организм от инфекционного поражения или же при возникновении острых аллергических реакций. Высокий иммуноглобулин Е у ребенка, как в принципе и у взрослого, чаще говорит о склонности организма к аллергическим проявлениям и атопиям, т.е. к развитию ответа IgE на воздействие внешних аллергенов.

Референтные значения показателя в крови отличаются в зависимости от возрастной категории пациента. До подросткового возраста кол-во антител может постепенно увеличиваться. Снижение концентрации защитных клеток снижается в пожилом возрасте.

Итак, норма иммуноглобулина Е у детей по возрастам:

  • 0-2 мес.- 0-2 кЕ/л;
  • 3-6 мес.- 3-10 кЕ/л;
  • 1 год жизни- 8-20 кЕ/л
  • 2-5 лет- 10-50 кЕ/л;
  • 5-15 лет- 15-60 кЕ/л;
  • 15-18 лет- 20-100 кЕ/л.

Норма иммуноглобулина е у взрослых считается в пределах:

  • От 20 до 100 кЕ/л.

Также следует отметить, что наиболее высокая концентрация антител отмечается в весенний период, особенно в мае, когда у большинства растений происходит активное цветение. Поэтому, норма общего иммуноглобулина Е у взрослых может колебаться в пределах от 30 до 250 кЕ/л. Самый низкий уровень показателя отмечается в декабре.

Отклонение общего иммуноглобулина Е от нормы у детей и более взрослых пациентов, часто свидетельствует о развитии патологических процессов в организме.

Для расшифровки анализов, нужно обязательно обращаться к специалисту, так как некоторые лаборатории оставляют за собой право устанавливать свои собственные нормы общего иммуноглобулина Е, исходя из используемых методов для исследования и особых реактивов.

к оглавлению ↑

Что показывает общий иммуноглобулин Е у детей?

Надо отметить, что анализ на иммуноглобулин для детей более чувствителен и точен, чем для взрослых. Так, например, только у половины взрослых с аллергическим бронхитом результат анализа покажет отклонение от нормы, при этом то, что повышен иммуноглобулин Е у ребенка, не останется незамеченным для лаборанта.

Высокие показатели иммуноглобулина Е в детском возрасте могут быть связаны с одной из следующих причин:

  • Непереносимость определенной пищи;
  • Глисты;
  • Дерматит;
  • Сииндром Вискотта-Олдрича;

Генетическое заболевание, характерное для новорожденных, при котором проявляется экзема, наблюдается кровавый кал, вторичные инфекции кожи, воспаление легких, отит, поражение глаз. Для лечения необходимо переливание тромбоцитарных масс.

  • Сенная лихорадка;
  • Бронхиальная астма;
  • Синдром Ди-Джорджи;

Иммунодефицит новорожденного, который передался от родителей. Проявляется отсутствием или уменьшением тимуса, в результате чего иммунная система не развивается и не работает, как следует. Лечение требует использования комплексной терапии. Осложнениями являются отставание в развитии, опухоли в раннем возрасте и т.д.

  • Аллергия на медикаменты;
  • Миелома (Раковая опухоль плазмалитических клеток).

Особенно следует обратить внимание на слишком высокий показатель иммуноглобулина в крови у детей. Это может быть следствием генетической патологии – гипер-lgE-синдрома. Этот синдром, проявляет себя через некоторые признаки:

  1. Общий иммуноглобулин Е повышен у ребенка;
  2. Частые риниты и синуситы;
  3. Аутоиммунные заболевания (например, красная системная волчанка), при которых иммунная система начинает разрушать сама себя.
  4. Воспаление легких;
  5. Сколиоз;
  6. Частые переломы костей;
  7. Абсцессы слизистых и кожных поверхностей.

Отклонение от нормы у детей иммуноглобулина Е в меньшую сторону также не является здоровым явлением. Оно может быть связано с:

  • Синдромом Луи-Барра;
  • Появлением опухолей;
  • Наследственными отклонениями (гипогаммаглобулинемией).
к оглавлению ↑

Общий иммуноглобулин Е повышен у взрослого

Причины этого явления у людей, старше 18 лет, практически ничем не отличаются от выше описанных. Единственное, что даже сильная аллергия на какой-то один раздражитель не может вызвать у взрослого человека значительное повышение иммуноглобулина Е. Как мы уже сказали, взрослая иммунная система менее чувствительна, чем детская.

Общий иммуноглобулин е повышен у взрослого, если помимо аллергии на целый список раздражителей у него имеется бронхиальная астма.

Помимо раздражителей аллергической природы, защитный ответ функции иммунитета может быть вызван присутствием в организме паразитов, например, гельминтов (или глистов). Они разрушают слизистую, что сразу же отражается в повышении защитных клеток в крови.

Отклонение от нормы иммуноглобулина Е у взрослых также провоцируется следующими болезнями:

  • Иммунодефицит;
  • lgE-миелома;
  • бронхопульмональный аспергиллез;
  • гипер-lgE-синдром.

Некоторые из этих заболеваний являются очень опасными, так что пренебрегать завышенным результатом ни в коем случае нельзя.

к оглавлению ↑

Понижение показателя

Существенное снижение концентрация рассматриваемого компонента, встречается в медицинской практике крайне редко, и обычно иммуноглобулин е понижен у взрослого при следующих патологиях:

  • Врожденный (или приобретенный) иммунодефицит;
  • При IgE- миеломе;
  • Атаксии вследствие телеангиоэктазии и повреждения Т-клеток.

Отсутствие специфического иммуноглобулина в сыворотке крови, не исключает возможности развитие аллергического ринита. Для более точного диагностирования необходимо проводить анализ антител, относящихся у другим классам.

к оглавлению ↑

Как понизить иммуноглобулин Е?

Если в лабораторных условиях было выяснено, что в вашей крови находится содержание иммуноглобулина Е выше нормы, врач должен с вашего согласия назначить дополнительные обследования, чтобы выяснить, какой аллерген виноват в отклонении от нормы.

Обычно больному по очереди проводят пробы с типовыми аллергенами:

  • На пыльцу;
  • На пищу;
  • На бытовую пыль и клещей;
  • На грибков;
  • На шерсть животных.

Проводить алергопробы нельзя тем, кто имеет в настоящий момент хроническое заболевание в острой форме, острую инфекцию или проходит лечение гормональными медикаментами.

Повышенный иммуноглобулин Е у ребенка можно устранять таким же способом, что и для взрослых, если ребенок достиг полугодовалого возраста. До 6 месяцев проводить пробы на аллергены не рекомендуется, так как иммунная система развита еще слишком слабо.

Если удалось выявить раздражитель, производится ряд процедур, которые позволяют снизить к нему чувствительность. В периоды обострения назначают антигистаминные препараты в виде таблеток или мазей. При атопическом дерматите нанесение на раздраженную кожу смягчающих составов обязательно.

Комплексный подход к лечению аллергии позволяет достаточно быстро побороть повышенный иммуноглобулин Е у взрослых и детей.

Оставляйте комментарии, если у вас остались вопросы на вышеизложенную тему, а также если имеются дополнения к материалу.

Будьте здоровы!

vseproanalizy.ru

Методы выражения концентрации антител

Главная / Отдел / Методические рекомендации и обзоры / Принципы трердофазного иммунферментного анализа / Методы выражения концентрации антител

Количественное измерение концентрации антител в твердофазном ИФА невозможно. Это связано с тем, что количество антител в специфическом комплексе зависит не только от концентрации антител в исследуемой пробе, но и от их аффинности, при этом имеет место конкуренция между низко- и высокоаффинными антителами за антигенные детерминанты иммуносорбента. Поэтому положение и наклон доза-ответной кривой будет отличаться как для сывороток, содержащих разное соотношение иммуноглобулинов различных классов, так и для сывороток с одинаковым соотношением иммуноглобулинов, но с различной аффинностью. Кроме того, концентрация антител в исходных сыворотках может меняться в широком интервале, достигающем 6 lg. Это приводит к тому, что вместо абсолютной концентрации антител проводят оценку их антительной активности.

Положительно - отрицательный метод

Сущность этого метода заключается в том, что рассчитывают средние значения величин сигналов от 100 - 120 заведомо отрицательных, по данным клиницистов, сывороток и вычисляют величину стандартного отклонения. Тогда превышение величины сигнала для исследуемой сыворотки, взятой в том же измерении, на 2 - 3 СО по сравнению со средним значением сигнала отрицательного пула позволяет считать эту сыворотку положительной ( + ). Процент положительных сывороток называется выявляемостью и не имеет отношения к чувствительности анализа.

Метод титрования (Т)

В этом методе измеряют сигналы серийных разведений каждой сыворотки. Разведение, при котором сигнал равен сигналу контроля плюс 2 - 3 СО, называется титром (Т).

Метод эффективной дозы (ЭД)

Этот метод является разновидностью метода титрования. После титрования референсной и исследуемых сывороток продолжают линейные участки кривых до пересечения с осью абсцисс и рассчитывают разность в IgТ.

Метод зоны

Принцип метода заключается в вычислении площади между кривыми титрования парных сывороток. Критерием положительной зоны, свидетельствующей о нарастании специфических антител, является превышение вычисляемой площади над определенным числом. Это число рассчитывается как средняя зона доза-ответных кривых, получаемых из многократного анализа низкоположительных и высокоположительных сывороток плюс удвоенные средние квадратичные отклонения от ширины кривых, а также площадь зоны, измеренной для парных сывороток с достоверным нарастанием титров антител в 4 и более раз по данным серологических методов.

Метод величины сигнала (ВС)

Метод заключается в измерении величины сигнала для одного и того же разведения исследуемых сывороток и референсного пула. По ВС больные могут быть разбиты на группы с различными особенностями протекания инфекционного процесса.

Метод отношения (П/О)

В этом методе рассчитывают отношение ВС исследуемых и пула отрицательных сывороток, взятых в одинаковом разведении. При П/О больше, чем 2 - 3,сыворотку считают положительной.

Метод многократной нормальной активности (МНА)

Он представляет собой попытку улучшить корреляцию получаемых результатов с титром, используя, тем не менее, одно разведение используемой сыворотки. После титрования положительного референсного пула сывороток строится доза-ответная кривая и ее завершающая часть аппроксимируется параболой. Для мест пересечения параболы с сигмо-идной кривой (точки А и В) рассчитывают значение величин сигнала и lg Ti. На основании этих величин рассчитывается константа (я) сигмо-идной кривой по формуле:

где lgTB, lgTA - логарифмы разведения положительного референсного пула в точках А и В, lgBCB, lgBCA - логарифмы интенсивностей сигналов в этих же точках.

Затем измеряют величины сигналов для исследуемых сывороток (Bd) и положительного референсного пула (BCn), взятых в одинаковом разведении, которое лежит в интервале lgTB - lgTА. Величина МНА для каждой исследуемой сыворотки рассчитывается по формуле:

Метод стандартной кривой (СК)

Сущность метода заключается в том, что для большого набора сывороток (от отрицательных до сильноположительных) получают доза-ответные кривые. На основании полученных кривых строится "средняя" кривая. Тогда, зная значения величин сигнала для исследуемых сывороток при одинаковом разведении, можно рассчитать по "средней" кривой величины их титров.

Сравнительный анализ некоторых из перечисленных методов с методом титрования показал, что только методы эффективной дозы стандартной кривой позволяют получить результаты, пропорциональные титру. Удовлетворительные результаты дает также метод многократной нормальной активности. Результаты остальных методов слабо коррелируют с титром исследуемых сывороток (табл.4).

Таблица 4. Методы оценки активности антител в ИФА.

Назад

www.dntpasteur.ru

Обоснование выбора и концентрации антител для включения их в состав конъюгата с наночастицами золота

В иммунодиагностике используются как моноклональные антитела, так и поликлональные. Моноклональные антитела обладают рядом преимуществ: полная стабилизация препарата антител, высокая специфичность, свободный выбор антигенных детерминант, к которым образуются антитела [54].

Наиболее важными характеристиками для выбора антител, входящих в состав конъюгата, являются: изотип, молекулярная масса, концентрация антител в буфере, вид буфера, в котором они находятся.

По данным литературы оптимальная концентрация для нанесения антител на рабочую нитроцеллюлозную мембрану в тестовую зону находится в диапазоне 0,5-3 мг×см-3 [55]. Антивидовые антитела для формирования контрольной зоны наносят, как правило, в концентрации 1 мг×см-3 [56, 57]. Внесение избыточного количества реагента приведет к увеличению несорбированных на поверхности молекул и к снижению аналитических характеристик производимой системы. Снижение же количества антител ниже указанного уровня в большинстве случаев недостаточно для эффективного специфического взаимодействия и формирования аналитической и контрольной зон высокой интенсивности, что снижает чувствительность иммунохроматографической системы [55].

Наилучшие результаты по чувствительности разрабатываемых тест-систем обеспечивает сукцинатно-боратный, либо трисовый буфер, однако наиболее длительное хранение антител обеспечивает фосфатный буфер. По-видимому, это объясняет, что большинство коммерческих антител выпускаются в фосфатном буфере. При приготовлении конъюгата и нанесении антител на нитроцеллюлозную мембрану для обеспечения более высокой чувствительности, по данным литературы, проводят предварительный диализ антител, находящихся в фосфатном буфере против сукцинатно-боратного, либо трисового буфера [18].

На аналитические свойства, разрабатываемой тест-системы влияет, как уже было сказано выше, изотип иммуноглобулинов. Наилучшими адсорбционными способностями для посадки на молекулу коллоидного золота и нитроцеллюлозную мембрану, а также по обеспечению специфического взаимодействия между антителами, находящимися в конъюгате с коллоидным золотом, и антителами в тестовой зоне, обеспечивают молекулы иммуноглобулинов класса G, являющиеся по своей структуре мономерами.

Проведя анализ имеющихся на рынке антител к H. pylori, с учетом ограниченных финансовых возможностей, для работы были отобраны антитела, представленные в таблице 4.

Таблица 4 – Перечень антител, используемых для получения конъюгата с наночастицами КЗ

Наименование Изотип Концентрация, мг×мл-1 Характеристика буфера Производитель
Мышиные моноклональные антитела к белку CagA Helicobacter pylori. Клон HP-1811 IgG 4,5 фосфатно-солевой буфер, рН 7,4, 0,1 % азид натрия «Биалекса», Россия
Мышиные моноклональные антитела к белку CagA Helicobacter pylori. Клон HP-387 IgG 8,0 фосфатно-солевой буфер, рН 7,4, 0,1 % азид натрия «Биалекса», Россия  
Антитела поликлональные кроличьи IgG pab Rabbit anti Helicobacter pylori IgG 5,0 0,01 М фосфатно-солевой буфер, рН 7,2 0,1% азид натрия НПО "БиоТест Системы", Россия (кат. № 18-511-245040)  

 

При выборе учитывали необходимые для разработки иммунохроматографических тест-систем характеристики антител, о чем было сказано выше: достаточную для экспериментального маневра концентрацию антител, нахождение антител в растворе фосфатного буфера для обеспечения возможности увеличения периода работы с ними, отношение моноклональных антител к классу иммуноглобулинов G, возможность комбинации моноклонов в конъюгате с поликлонами в тестовой зоне. Для уменьшения риска получения отрицательного результата при разработке иммунохроматографической тест-системы для выявления возбудителя хеликобактериоза была отобрана пара моноклональных антител, получаемых фирмой «Биалекса» (Россия) и рекомендованных для разработки соответствующей иммуноферментной тест-системы.

Учитывая, что конъюгат антител с наночастицами коллоидного золота является одним из наиболее важных составляющих компонентов иммунохроматографической тест-системы, в отношении отобранной пары моноклональных антител при выполнении экспериментальной части работы целесообразно провести определение концентрации наиболее оптимальной для посадки на коллоидное золото, а также параллельно оценить адсорбционные способности полученных серий золота и выбрать наиболее перспективные варианты препарата для дальнейшего использования при приготовлении конъюгата.

С этой целью определяют «золотое число». «Золотое число» – это минимальное защитное количество гидрофильного полимера, достаточное для предотвращения коагуляции 10 мл золя золота при добавлении к нему 1 мл 10% раствора NaCl. Данный метод впервые был предложен Жигмонди. «Золотое число» является общей мерой защитного действия, поскольку эмпирически найдено, что сильное защитное действие, предотвращающее коагуляцию золя золота, обычно проявляется в такой же степени и в отношении других подобных ему золей [13].

Определение золотого числа. Для определения золотого числа, по данным литературы, используют различные по составу буферные растворы: фосфатно-солевой (ФСБ), карбонатно-бикарбонатный (КББ), сукцинатно-боратный (СББ) и др. Наиболее часто с этой целью применяют 0,005 М карбанатно-бикарбонатный буфер [18].

Оценку устойчивости золя проводят в зависимости от различных концентраций добавленного стабилизатора (биоспецифического зонда) с использованием агглютинационных титровальных планшетов с объемом лунок 250 мкл. При этом двойные разведения зонда (начальная концентрация 1 мг/мл) в количестве 20 мкл смешивают с 200 мкл золя золота с оптимальным значением рН, затем в каждую лунку добавляют 20 мкл 10% раствора NaCl.

Последняя лунка в ряду разведений конъюгата, не изменившая своего цвета после добавления солевого раствора, содержит минимальное количество полимера (антитела, антигена), необходимое для защиты раствора КЗ от его солевой агрегации – «золотое число» [58].

Оценку результата реакции проводят визуально и/или фотометрически. Практика свидетельствует о достаточной эффективности визуального контроля эффекта агрегации, выражающегося в заметном изменении цвета суспензии с розового на голубой. Рекомендуют построить изотерму адсорбции, фотометрически измеряя оптическую плотность золя (λ=580) после добавления убывающих концентраций зонда и раствора NaCl до конечной концентрации 1% (рис. 15)

 

Рис. 15 – Спектры поглощения исходного золя золота (1), золя, стабилизированного антителами (2) и после добавления NaCl (3) [56].

Из данных, представленных на рисунке 15, видно, как при стабилизации золя наблюдается увеличение и уширение пика кривой поглощения. Так, максимум пика поглощения нестабилизированного золя составляет 521 нм, оптическая плотность – 0,349; при конъюгации с антителами в концентрации 10 мкг×см-3 максимум пика поглощения составляет 525-530 нм, оптическая плотность – 0,366. Добавление к биоконьюгату раствора NaCl до конечной концентрации 1% не приводит к изменению спектра поглощения в области 600-700 нм при концентрации антител 10 мкг×см-3, что означает отсутствие агрегации частиц при высокой ионной силе раствора [56].

Для определения концентрации антител, оптимальной для получения стабильных, неагрегирующих конъюгатов с КЗ, проводят спектрофотометрический контроль раствора, содержащего антитела с наночастицами коллоидного золота в присутствии 10%-ного NaCl процесса, при длине волны D580 (рис. 16).

Рис. 16 – Определение концентрации специфических антител, используемой для конъюгации с КЗ диаметром 30 нм [59].

Увеличение количества антител стабилизирует частицы КЗ, при этом D580 возрастает, доходит до максимума и начинает снижаться, выходя на плато. Для обеспечения максимальной стабильности конъюгатов рекомендуют выбирать концентрации антител, на 10-15% превосходящие точки выхода D580 на плато. На рисунке 16 выбранная концентрация антител (10 мкг×см-3) отмечена стрелкой, нулевой уровень D580 соответствует КЗ, не нагруженному антителами без добавления 10%-ного NaCl [59].

Определение «золотого числа» позволяет не только определить концентрацию антител для последующей конъюгации с наночастицами коллоидного золота, но и косвенно судить о качестве приготовленных препаратов коллоидного золота. Низкая адсорбционная способность (ниже 4 мкг×см-3) коллоидного золота может свидетельствовать о непригодности серии препарата для последующего использования с целью приготовления конъюгата с антителами, невозможности разработки с использованием данной серии иммунохроматографической тест-системы с высокими аналитическими свойствами [60].

Таким образом, для получения одного из наиболее важных иммунохимических компонентов иммунохроматографической тест-системы (конъюгата КЗ с антителами), предназначенной для выявления Helicobacter pylori, целесообразно провести ряд последовательных экспериментальных исследований по отработке условий синтеза сферических, однородных частиц коллоидного золота размером 30 нм, наиболее оптимальных по данным литературы для приготовления конъюгата с антителами. Путем постановки «золотого числа» определить оптимальную концентрацию выбранных моноклональных антител для последующей конъюгации с экспериментально обоснованными кондиционными сериями препаратов коллоидного золота, которые были получены по разработанной в дипломной работе методике.

megaobuchalka.ru

Антитела концентрация li эффективность - Справочник химика 21

    НО актуальна при определении гормонов. Кроме того, обычно сыворотка содержит антитела к контаминирующим молекулам, находящимся в инъецируемой смеси, которые могут присутствовать в исследуемых образцах. Аффинная очистка на колонке с антигеном может в ряде случаев оказаться полезной (увеличить концентрацию, эффективность мечения антител, снизить фон), но не оказать влияния на специфичность по изложенным выше причинам. Данный метод не позволит  [c.93]     Эту константу сродства, иначе называемую константой ассоциации (К ), можно определить, измерив концентрацию свободного Аг, необходимую для заполнения половины антиген-связывающих участков антитела. Когда половина участков заполнена, [АгАт] = [Ат] и X = 1/[Аг]. Таким образом, константа сродства антитела к антигену равна величине, обратной концентрации антигена, дающей половину максимального связывания. Обычные значения К варьируют в широких пределах-от 5 10 до 10 л/моль. Константа сродства, при которой молекулу иммуноглобулина перестают рассматривать как антитело к данному антигену, несколько произвольна, однако маловероятно, что антитело с К ниже 10 будет биологически эффективным. [c.27]

    Таким образом, для практического осуществления описанного метода необходимо, прежде всего, установить наличие линейной зависимости между концентрацией определяемых непрямым методом ИФА антител и регистрируемым значением оптической плотности. Для этого готовят серии разведений исследуемой иммунной сыворотки и изучают их связывание в непрямом методе ИФА. Обычно эти зависимости имеют, вид кривых с насыщением. Для проведения эксперимента выбираются разведения антисыворотки, лежащие в линейном диапазоне кривой. Для установления равновесной константы диссоциации комплекса Аг-Ат концентрацию антигена варьируют в диапазоне от 10 до 10 М. На рис. 20 приведен график для определения Кд комплекса ПХ-Ат. Однако вычисленные этим методом значения констант диссоциации комплекса Ат- Аг являются эффективными, поскольку при выборе уравнения не учитывается влияние взаимодействия антител с антигеном, сорбированным на твердой фазе, на равновесие в растворе. [c.162]

    Быстрое разделение компонентов возможно в одной из модификаций данной схемы с использованием меченых специфических антител, что устраняет необходимость второй стадии и приводит к значительному сокращению длительности анализа в целом. Однако следует иметь в виду, что эффективное увеличение концентрации антигена на твердой фазе возможно не во всех случаях. [c.253]

    Являясь аналогом лиганда, М—Л может эффективно конкурировать с ним за ограниченное число антител к Л. Однако при связывании с антителами М—Л утрачивает модулирующую активность. В условиях анализа соотношение между связанным с антителами и свободным, несвязанным конъюгатом М—Л зависит от концентрации Л. Свободный М—Л функционален, т. е. способен модулировать активность индикаторного фермента, тогда как связанный М—Л не функционален, т. е. не может модулировать ферментативную активность (Ngo, 1983). [c.57]

    Несмотря на огромный молярный избыток антител, меченных пероксидазой хрена (ПХ), по сравнению с антигеном (кратный примерно 10 при самой высокой. концентрации антигена) фоновый сигнал, вызываемый несвязанной ПХ, невелик. Это объясняется тем, что фоновую реакцию эффективно подавляет каталаза. Как видно из рис. 8-14, с ростом концентрации каталазы фон уменьшается, тогда как сигнал, характерный для антигена, существенно не изменяется. [c.120]

    Большинству иммунологических методов анализа, которые, как правило, являются гетерофазными методами, присущи ограничения, связанные с диффузией. Антиген должен достичь иммобилизованных на твердой фазе антител и вместе с тем связаться с ферментным конъюгатом. При этом антиген и конъюгат должны мигрировать через реакционную среду. При наличии большого избытка антител, иммобилизованных на носителе, адсорбция антигена даже из растворов с очень низкой концентрацией будет проходить весьма эффективно. В роли фактора, направляющего процесс, в этом случае выступает высокая концентрация иммобилизованных антител. Реакции в жидкой фазе также определяются концентрацией антител. В то же время присутствие реагентов в высокой концентрации сводит к минимуму проблемы, связанные с диффузией. Ввиду высокой концентрации антител фактически отпадает необходимость в миграции молекул на значительные расстояния. Благодаря этим эффектам анализ обладает высокой чувствительностью и проводится очень быстро. [c.387]

    Вы хотите измерить концентрацию инсулина (молекулярш масса 11 466) в образце, пользуясь инсулином, меченным радиоа тивным йодом (период полураспада 7 сут). Предположим, чт мечение производится из расчета один атом радиоактивного йод на молекулу инсулина, что йод не влияет на связывание инсулин антителами, что эффективность счета (вероятность зарегистриро вать каждый радиоактивный распад как импульс ) составляв 50%, а минимальное общее количество радиоактивности (связав ная + свободная) для данного метода должно быть не менее 1 ОН импульсов в минуту (имп/мин). [c.218]

    Цель задачи — исследовать эффективность очистки антител из антисыворотки на иммуносорбентах, полученных при иммобилизации глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы на препаратах сефарозы, активированных при разной концентрации Br N. [c.304]

    Лекарственные вещества, связанные с моноклональными антителами Лекарственные вещества, проявляющие высокую активность при тестировании in vitro (обычно в культуре клеток), зачастую оказываются значительно менее эффективными in vivo. Кажущееся снижение их активности объясняется тем, что они не достигают органа или клетки-мишени в нужной концентрации. Увеличение дозы принимаемого препарата не решает проблему, поскольку при этом часто возникают побочные эффекты. Более того, чтобы избежать таких эффектов, многие терапевтические средства заведомо вводят в дозах, не достигающих оптимальных, что дополнительно снижает их эффективность. Для облегчения доставки лекарственного вещества к месту его действия используют несколько приемов. 1. Заключают его в особые частицы - липосомы, липидная обо- [c.212]

    Метод, разработанный Коном и Эдсоллом, включает фракционное осаждение спиртом при низкой температуре и подходящей вариации значений pH и имеет то преимущество, что в этих условиях на растворимость белков заметно влияет ничтожно малое изменение концентрации солей. Этим методом были получены пять основных фракций, которые не были гомогенными, но оказались пригодными для клинических целей и дальнейшего фракционирования на индивидуальные компоненты. Одна фракция состоит в основном из альбумина и особенно эффективна как противошоковое средство. Другая фракция содержит у-глобулин, который захватывает большое количество антител. Эти белки образуются в живом организме ш ответ на проникновение чужеродных тел (антигенов), например белков различных патогенных организмов. Эта фракция находит клиническое применение для предохранительной временной пассивной иммунизации к различным болезням. Примерно десять глобулинов, принадлежащих к этим трем типам, были получены в индивидуальном, состоянии. Два, из них являются липопротеннами или, может быть, различными формами одного и того же липопротеина. Липопротеины крови состоят из белка, фосфолипи- [c.656]

    Гомогенность и специфичность центров связывания моноклональных антител делают их особенно удобными для использования в иммуноаффинной хроматографии. В табл. 6.15 мы приводим высокоэффективный метод получения иммуносорбентов для колонок и их применения, а также различные варианты условий элюции, которые позволили нам очень эффективно с сохранением их биохимической активности очистить макромолекулы, обладающие высокой чувствительностью к воздействию оазличпых агентов и находящиеся в низкой концентрации. [c.196]

    Так как молекулы антител обладают, по крайней мере, двумя центрами связывания, то при взаимодействии с поливалентным антигеном возможно образование так называемых комплексных связей, когда после взаимодействия одного активного центра молекулы антитела с одним из эпитопов второй активный центр взаимодействует с расположенным поблизости вторым эпитопом той же молекулы антигена. Общая эффективность взаимодействия в этом случае существенно возрастает в частности, эффективная константа комплексообразования для молекулы IgG может в 10 раз и более превышать Ко одиночных связей. Частота образования таких связей зависит от концентрации реагентов и мо ет колебаться от нуля до максимальной, соответствующей общему количеству молекул IgG в Системе. [c.47]

    При выборе твердофазных схем определения следует учитывать, что скорость достижения равновесия в системе иммобилизованный реагент — анализируемое соединение зависит не только от концентрации компонентов, но может снижаться за счет микро-диффузионных эффектов. На анализ в таких системах, как правило, затрачивается время не менее нескольких часов. Переход к гомогенно-гетерогенным методам, в которых реакция образования первичного специфического иммунокомплекса протекает в растворе, значительно снижает время достижения равновесия на первой стадии. При этом сокращается и время анализа в целом, так как для разделения компонентов используется избыток иммобилизованных вторичных антител. Осуществление стадии узнавания в гомогенной фазе повышает также и точность анализа, которая определяется точностью дозирования компонентов. В тех случаях, когда анализируемая среда содержит эндогенный фермент, кофактор или эффектор, твердофазные неконкурентные методы являются наиболее эффективными. [c.102]

    Применение в ИФА антигенов и антител, иммобилизованных на нерастворимых носителях, дает возможность эффективно разделять компоненты аналитической системы перед стадией определения концентрации ферментной метки. Такой подход универсален и может применяться для широкого круга соединений — от гаптенов до микробных клеток. Однако нерастворимые иммуносорбенты имеют и некоторые отрицательные стороны, а именно 1) возможность неспецифического связывания компонентов с носителем 2) значительное время анализа (до нескольких часов) из-за длительности реакции антиген — антитело, определяемое низкой концентрацией иммобилизованного агента- (например, при использовании непористых сорбентов — полистирольных плат или пробирок) или диффузионными затруднениями при использовании пористых сорбентов (сефароза, пористое стекло, силохром и т. д.) 3) методические сложности, связаниью с трудностями точного дозирования и промывок иммуносорбентов па основе пористых носителей 4) существенное влияние неоднородности сорбциоииых свойств полимерных носителей (микроплаты и пробирки из полистирола, поливинилхлорида, полиметилметакрилата и т. д.) на точность и воспроизводимость результатов анализа. [c.111]

    Количественной мерой в данном методе является коэффициент разделения компонентов, равный отношению концентраций меченого соединения в верхней и нижней фазах. В ряде случаев эффективность разделения может быть существенно увеличена при использовании связыва/оы его агента (антитело, лектин, белок А стафилококка), предварительно модифицированного монометоксипо-лиэтиленгликолем. Метод может быть применен для анализа гаптенов, макромолекулярных антигенов и целых клеток. [c.113]

    Таким образом, в данной системе конъюгат выстзшает в роли как аналога антигена, способного эффективно конкурировать за цеПтры связывания антител, так и субстрата фермента. Очевидно, что концентрация определяемого этим способом антигена должна быть сравнима с концентрацией конъюгата в растворе, поэтому чувствительность анализа в данном случае невелика и лежит в микромолярной области концентраций. Метод был использован для определения ряда лекарственных соединений, иммуноглобулинов О и М человека. [c.121]

    Иммуноферментные наборы, основанные на принципе EMIT, в настоящее время являются наиболее эффективным средством для быстрого определения наркотиков и лекарственных соединений. Если ранее широкое применение гомогенного ИФА сдерживалось возможностью определения только низкомолекулярных антигенов, то разработанные в последние годы подходы позволяют проводить быстрый количественный анализ макромолекулярных белковых антигенов и антител. К ограничениям применения гомогенных методов следует отнести меньшую чувствительность, чем в гетерогенном ИФА (исключением являются системы с биолюминесцентной детекцией), и сложность анализа биологических сред, содержащих в значительной концентрации эффекторы или кофакторы фермента. [c.123]

    Определение титра аитисыворотки. Титр — это эффективная величина, характеризуюи ая связывающую способность антител, зависящая от их концентрации и аффинности. Абсолютное значение титра также зависит от метода и условий проведения эксперимента (температуры, времени, pH и т. д.) и от начальной концентрации свободного антигена. [c.157]

    Концентрация фракции антител с высоким эффективным значением константы связывания, как правило, значительно ниже, чем с низким. Для разработки суперчувствительных систем детекции бывает необходимо выделять наиболее высокоаффинную фракцию и использовать в анализе только ее. Это может достигаться путем адсорбции антител на иммобилизованном антигене и последующей их элюцией линейным или ступенчатым градиентом pH, что [c.220]

    Описан также электрод, селективный к дигоксину калий-се-лективная мембрана этого электрода состоит из ковалентно связанного с дигоксином бензо-15-крауна-5 и поливинилхлорида [8 ]. Принцип иммуноанализа состоит в конкурентном связывании ди-, гоксина в мембране и в пробе с ограниченным количеством антител. В ходе анализа некоторое количество конъюгата ионофора связывается антителами на внешней поверхности мембраны, что снижает способность мембраны к транспорту ионов. Количество связанного конъюгата обратно пропорционально концентрации дигоксина в растворе. При данной кс нцентрации иона калия на электродный потешщал влияет эффективность удаления различного количества ионофора из мембраны. Калибровочная кривая постро-ога в диапазоне концентраций дигоксина 1-100 нмоль/л. [c.212]

    II. Пневмокок,ки типа III, антитела к углеводному компоненту S3. Очищенный компонент пневмококка S3 обладает чрезвычайно низкой иммуногенностью (или не обладает совсем) для кролика. Однако введенный в/в вместе с мембранными белками убитых нагреванием микроорганизмов, он вызывает эффективное образование IgG, отличающихся высокой типовой и антигенной специфичностью. С помощью повторных курсов получают не менее 5 мг/мл специфических антител, и у многих животных можно повысить концентрацию IgG в сыворотке до 20 мг/мл и более. Данный ответ не зависит от влияния белковых иммуногенов на синтез антител. В одном из наших экспериментов [38] кролики получали не менее двух курсов по девять в/в инъекций в течение 19 дней начальная доза составляла 10 микроорганизмов, с шестой инъекции — 4- 10 , а в конце дозу доводили до 10 ° микроорганизмов. Кровь забирали через 3—4 дня после последней инъекции. [c.84]

    К опытам с конкурентным равновесием приступают обычно уже тогда, когда определены равновесные параметры хотя бы одного из конкурентов. Предварительный опыт имеет лишь одну задачу — определить эффективную область, концентраций ингибитора. Это значит, что при равновесном диализе следует начинать с такой исходной концентрации гаптена, которая обеспечит измеримое количество свободного гаптена в отделенном компарт-менте после 95%-ного связывания. Исходные концентрации ингибитора, в 10, 100 и 1000 раз большие, обычно перекрывают область, в которой доля измеряемого свободного гаптена возрастает от 5 до 50%. Этот диапазон и следует использовать в основном эксперименте. При равновесной фильтрации и седиментации стартовая концентрация антител должна выражаться титром 1000, а исходная концентрация исследуемого антигена должна уменьшать этот титр в 20—50 раз, т. е. связывать в отсутствие конкуренции 95—98% антител. Область концентраций тормозящего антигена должна быть такой, чтобы титр антител уменьшался вместо этого в 5—20 раз. [c.51]

    Как видно из рис. 2, препаративное ИЭФ — это метод, позволяющий эффективно разделять очень близкие клонотипы антител, получая от трех до пяти полос в тех случаях, когда другие методы выявляют лишь одну полосу. Таким образом, метод позволяет изучать молекулярные основы гетерогенности гомологичных антител. Кроме того, с помощью препаративного ИЭФ можно избирательно сконцентрировать белки одного клонотипа, находящиеся в иммунной сыворотке в очень низкой концентрации и не определяемые обычными методами. [c.141]

    МЛ Ю7о-ной суспензии на мышь. Наряду с опытной группой животных, получивших фактор, антиген и В-клетки, необходимо ввести две контрольные группы, из которых одна получала бы В-клетки и антиген, а другая (в качестве контроля на антигенную специфичность) — фактор, В-клетки и контрольный антиген, не дающий перекрестных реакций с испытуемым. Для сравнения в опыт следует также включить группы животных, получающих либо только Т-клетки, либо только В-клетки, либо один лишь испытуемый антиген. Через 8—14 дней после переноса (в зависимости от природы антигена и линии мышей) у животных берут кровь и извлекают селезенку. Целесообразно и титровать сывороточные антитела, и определять число антителообразующих клеток (АОК) в селезенке. Для этого используют общепринятые методы, применяя в качестве индикаторных клеток эритроциты, сенсибилизированные испытуемым антигеном. Синтетические полипептиды обычно присоединяют к БЭ с помощью хлорида хрома (III). Условия оптимального присоединения варьируют в зависимости от природы эритроцитов и антигена, и их следует определять заранее. Обычно смешивают в указанной последовательности равные объемы осадка эритроцитов, антигена (в концентрации от 1 до 10 мг/мл) и СгС1з (1—10 мг/мл). Все ингредиенты реакции готовят на физиологическом растворе без фосфатов. Смесь инкубируют 5 мин при комнатной температуре, затем добавляют избыток физиологического раствора, забуференного фосфатами, и клетки тщательно отмывают. Если при этом наблюдается выраженный гемолиз, содержание СгС1з следует уменьшить. Эффективность сенсибилизации эритроцитов проверяют непосредственно после присоединения антигена в реакции агглютинации со стандартной антисывороткой. В большинстве случаев к эритроцитам присоединяют антиген, использованный для иммунизации. Однако в случае, если антигеном служит (Т, 0)-А-Ь, для определения АОК в качестве индикаторных клеток обычно используют эритроциты, сенсибилизированные (Т, 0)-Рго-Ь, которые, как правило, дают более легко учитываемые зоны гемолиза. [c.331]

    Берд и Вонг (Burd, Wong, 1977, 1979) разработали иммуноферментный анализ без разделения компонентов, основанный на использовании связанных с лигандом флуорогенных субстратов. В этом методе (рис. 2-4) производное лиганда ковалентно соединяют с флуорогенным субстратом фермента, получая прочный конъюгат [субстрат — лиганд (С—Л)], который конкурирует с определяемым веществом за имеющиеся в ограниченной концентрации антитела к Л. В результате по реакциям I и II образуются Л Ат и С—Л Ат. Когда в растворе нет определяемого вещества Л, конъюгат С—Л связывается с антителами против Л при этом индикаторная реакция III не идет, так как связанный с антителами конъюгат С—Л Ат в отличие от свободного С—Л не является субстратом фермента. Однако при увеличении концентрации Л количество свободного С—Л, чувствительного к ферменту, будет возрастать и, следовательно, по реакции III будет образовываться большее количество продуктов. Таким образом, конъюгат [флуорогенный субстрат — лиганд (С—Л)] играет двойную роль а) как аналог лиганда С—Л успешно конкурирует за связывание с антителами к лиганду б) как эффективный аналог субстрата С—Л участвует в индикаторной реакции III с образованием продуктов. [c.17]

    Для решения этой проблемы можно использовать следующие приемы а) увеличивать концентрацию иммобилизованного антигена, б) удалять из смеси конкурирующие антитела, присутствующие в высокой концентрации, например IgG, или в) использовать альтернативную схему анализа сначала связывать иммуноглобулины данного класса, например IgE, и затем тестировать их антиген-связывающую активность. Последний прием был успешно использован в работе Цейса и др. (Zeiss et al., 1973), мы же остановились на втором. Первый из названных приемов, вероятно, является наименее эффективным, поскольку, как было показано выше, возникающие при его применении пространственные затруднения могут существенно снижать эффективность детектирования еще до насыщения антигена. [c.232]

    Преимущества, присущие моноклональным антителам, обусловлены их гомогенностью. При работе в условиях избытка реагентов преимущества метода меченых антител достаточно очевидны. Во-первых, при использовании иммобилизованных на носителе антител, эффективно осуществляющих первичный захват тестируемого антигена, значительно ослабляется, а в некоторых случаях и полностью подавляется эффект насыщения, называемый эффектом загиба в области высоких концентраций (Ryall et al,, 1982), С проблемой насыщения приходится сталкиваться практически в любой системе прямого тестирования. В связи с этим создание системы анализа, в которой эта проблема исключается, имеет особо важное значение. Использование моноклональных антител позволяет одновременно легко получить сорбенты с очень высокой емкостью и вводить в систему меченые антитела в высокой концентрации. Для систем, работающих в режиме избытка антител, характерны не только быстрое выполнение анализа и высокая чувствительность определения, но и возможность использования тестируемого антигена в чрезвычайно широком диапазоне концентраций. Концентрационный диапазон, охватываемый в системах анализа, основанных на применении меченых антител, обычно в 3—10 раз шире диапазона, доступного для конкурентного анализа с применением меченого антигена. [c.388]

    Располагая системой ИФА, в которой видимая глазом окраска развивается при содержании в образце антигена в концентрации, соответствующей некоторому положительному диагнозу, можно разработать простой метод эффективного скрининга многочисленных пациентов. Так, с использованием двухцентрового ферментативного иммунометрического анализа на базе моноклональных антител была разработана методика определения беременности, основанная на обнаружении в крови хориогонадотропина. [c.394]

    Помимо наследственных, бывают патологии окислительного фосфорилирования, обусловленные интоксикациями. Так, хроническое потребление этанола бабуином вызывает двукратное снижение концентрации цитохромоксидазы и ее активности, а также некоторое уменьшение содержания фосфолипидов (прежде всего фосфатидил-холина и кардиолипина) благодаря активации фосфолипазы Аг. Отмечено также, что у крыс, получавших этанол, ослабляется связь фактора с митохондриальной мембраной и снижается эффективность окислительного фосфорилирования. В крови пациентов, страдающих первичным желчным циррозом, обнаружены аутоиммунные антитела к АТФ/АДФ-антипортеру. Резкое торможение окисления пирувата, а-кетоглутарата и пальмитоилкарнитина наблюдается в митохондриях бегунов на длинные дистанции. [c.241]

    Важная аксиома биологии гласит, что эффективность биохимической реакции зависит от степени связывания или слипания разных молекул. Взаимодействие между отдельным центром связывания антитела с комплементарным ему антигеном можно оценить количественно. Для этого в пробирке смешивают антиген и антитело в разных концентрациях и определяют, какая часть смеси находится в связанной форме (комплекс антиген-антитело), а какая — в несвязанной (рис. 3.6). Этот метод дает возможность оценить аффинность (сродство) антигенсвязывающего центра. Когда связывается больше одного центра, как у IgG или мономера IgM, имеющих по два центра, или у пентамера IgM с десятью центрами, в действие вступает новый фактор. Если чужеродный агент имеет на поверхности множество идентичных структур (как у бактериальных или вирусных частиц), то, как только происходит одно взаимодействие антиген-антитело, вероятность второго возрастает, и так далее (рис. 3.7). Таким образом, пентамер IgM может прилипать к поверхности бактерии, даже если аффинность отдельного антигенсвязывающего центра низка (из-за относительно плохого соответствия антигену). Сила такого множественного связывания антигена с антителом называется авидностью. Итак, высокая авидность IgM обеспечивает организму селективные преимущества, так как он образуется в первые часы и дни инфекции и способен связывать бактерии в крови и вызывать их элиминацию. [c.83]

chem21.info


Смотрите также