Нормальный обмен веществ. Титр антител к дифтерии


Теоретическая справка Возбудитель дифтерии Культуральные свойства

Наиболее характерные колонии на среде Клауберга II с добавлением теллурита калия или натрия (элективная среда для выращивания С. diphtheriae). Они вырастают в виде почти черных колоний, выделяющихся на красном фоне среды. Цвет колоний обусловлен способностью С. diphtheriae в процессе роста восстанавливать теллуристый калий до элементарного теллура.

Микробы дифтерии не являются однородными по своим культурально- биохимическим свойствам и подразделяются на биовары gravis, mitis и intermedius. На среде Клауберга II через 48 часов бактерии биовара gravis вырастают в виде круглых (d 1,5- 2 мм) колоний с неровными краями, часто имеют приподнятый центр и радиальная исчерченность. Колонии серовато- черного цвета, напоминают маргаритки. Вариант mitis дает круглые выпуклые колонии черного цвета (d 1- 1,5 мм) с ровными краями. Вариант intermedius занимает промежуточное положение. Дает черные выпуклые с блестящей поверхностью колонии.

Серодиагностика

Антитела к С. diphtheriae определяют в крови больных, начиная с первых дней болезни и повторно через 10-14 дней. Обязательным условием является определение специфических антител в динамике болезни в парных сыворотках. Диагностическое значение имеют результаты серологических исследований при нарастании титра антител не менее чем в 3-4 раза.

Для определения уровня дифтерийного антитоксина в сыворотке человека применяют несколько реакций:

1. Рпга

РПГА - двухкомпонентная реакция, предполагающая взаимодействие диагностикума эритроцитарного дифтерийного антигенного (представляет собой эритроциты с адсорбированным на них дифтерийным анатоксином) и антитоксических противодифтерийных антител, находящихся в сы­воротке крови обследуемых. При наличии в исследуемой сыворотке антитоксина образуется специфический комплекс: антитоксин + сенсибилизированные анатоксином эритроциты. В результате формируется осадок в виде агглютината эритроцитов.

В нашей стране РПГА рекомендована в качестве основного метода для определения напряженности антитоксического иммунитета к С. diphtheriae, а также для оценки вакцинального иммунитета.

Оценка состояния коллективного иммунитета требует более детальной характеристики, чем только установление процента серонегативных. Для этого следует давать развернутые по каждому титру данные в РНГА т.е. с учетом степени напряженности. Отсутствие антител является безусловным показателем незащищенности; титры 1:10 и 1:20 можно считать индикатором пограничного иммунитета, не обеспечивающего безусловной защиты; однако заболевание при этом, как правило, протекает в легкой форме без летального исхода. Титры 1:80 и выше являются показателем защищенности группы.

Таким образом, процентное распределение показателей титров в каждом разведении дает качественную характеристику состояния иммунитета к дифтерии в обследованной группе. Например, выявление у 50% обследованных показателей пограничного иммунитета (титры 1:10, 1:20) свидетельствует о слабой защищенности группы, в которой с годами будет увеличиваться число лиц, не защищенных от дифтерии.

В настоящее время приняты следующие количественные критерии, характеризующие степень восприимчивости к дифтерии в зависимости от уровней антитоксических антител.

Содержание антитокси­ческих антител

Интерпретация результатов

< 0,01 МЕ/мл

обследуемый восприимчив к дифтерии

0,01 МЕ/мл

минимальный уровень циркулирующих антител, обеспечивающий некоторую степень защиты

0,01-0,09 МЕ/мл

уровни циркулирующих антитоксических анти­тел, обеспечивающие некоторую степень защиты

0,1 МЕ/мл

защитный уровень циркулирующих антител

> 1,0 МЕ/мл

уровень антитоксина, обеспечивающий стойкую длительную невосприимчивость к дифтерии

2. ИФА

ИФА предназначен для количественного определения антибактериальных и антитоксических иммуноглобулинов А, М, G человека в сыворотке крови больных дифтерией, бактерионосителей и здоровых людей. Принцип ИФА основан на образовании специфического комплекса антиген-антитело, выявляемого с помощью второго антитела, меченного пероксидазой хрена. При последующем добавлении субстратной смеси развивается ферментативная реакция, регистрируемая по появлению окрашенного продукта. Интенсивность реакции учитывается с помощью иммуноферментного анализатора или визуально.

3. Определение титра антител к дифтерийному токсину в сыворотке крови человека в реакции нейтрализации (РН) на культуре клеток.

Метод основан на том, что метаболическая активность и рост клеток культуры ингибируется дифтерийным токсином, который, в свою очередь, может быть нейтрализован антитоксином, содержащимся в сыворотке крови. Последовательное разведение сыворотки крови человека добавляют в лунки микропланшета, в которые затем вносят дифтерийный токсин в рабочей дозе и культуру клеток. Обнаружение по окончании инкубации (t 37оС 5-6 суток) живых клеток культуры в лунках, содержащих определенные разведения сывороток, будет указывать на соответствующий титр антител к дифтерийному токсину в тестируемых сыворотках + проба на токсигенность.

studfiles.net

Дифтерия. Диагностика дифтерии. Какие анализы сдавать

Дифтерию вызывают токсигенные штаммы Corynebacterium diphtheriae или палочки Леффлера, не токсигенные штаммы заболевания не вызывают. Дифтерийный токсин по своим свойствам относится к сильнодействующим ядам, уступая лишь ботулитическому и столбнячному. Под воздействием токсина нарушается синтез белков во внутренних органах больного, что приводит к структурным и функциональным нарушениям, демиелинизация нервных волокон – к параличам и парезам. Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы C.diphtheriae, инфицированные бактериофагом (р-фаг), несущим ген tox, кодирующий структуру токсина дифтерии. Передача бактериофагом гена tox нетоксигенным штаммам C.diphtheriae, обитающим в носоглотке и накопление их в популяции, может сопровождаться развитием вспышки дифтерии.

Наиболее таксономически близкими к виду C.diphtheriae являются C.ulcerans и C.рseudotuberculosis, природные патогены крупного и мелкого рогатого скота, лошадей. Кроме того, на слизистой ротоглотки и носа часто встречается палочка Гофмана (C.pseudodiphtheriticum), не обладающая патогенностью и токсигенностью для человека. Поэтому основной задачей лабораторной диагностики дифтерии является выявление токсигенных штаммов дифтерии и дифференцировка возбудителя дифтерии от других коринебактерий, нормальных обитателей носо- и ротоглотки. Все микроорганизмы рода Corynebacterium – грамположительные полиморфные палочки, не образующие спор, хорошо растущие в аэробных условиях при 37°С. При окраске метиленовым синим в клетках C.diphtheriae отмечается внутриклеточная исчерченность, что объясняется наличием зерен волютина. Окраска по Граму не используется из-за вариабельности окрашивания клеток. По форме колоний и некоторым биохимическим свойствам C.diphtheriae подразделяются на культурально-биохимические варианты – gravis, mitis, intermedius, однако все они обладают способностью вырабатывать дифтерийный токсин. Тяжесть течения заболевания не связана с биохимическим вариантом C.diphtheriae. Токсигенные штаммы дифтерии более чувствительны к антибиотикам, чем не токсигенные.

Показания к обследованию

  • Профилактическое обследование – выявление источников инфекции, группы населения с повышенным риском заболевания; наблюдение за циркуляцией токсигенных штаммов в популяции; лица, поступающие в детские дома, школы интернаты, специализированные учреждения для детей и взрослых;
  • обследования по эпидемическим показаниям – лица с подтвержденным контактом с больным дифтерией или при эпидемии дифтерии в данной местности;
  • диагностические исследования – при подозрении на заболевание дифтерией (тонзиллит, назофарингит или ларингит который протекает с налетами псевдомембранозного характера).

Дифференциальная диагностика. Заболевания, сопровождающиеся тонзиллитом (инфекционный мононуклеоз, ангины стрептококковой, стафилококковой этиологии и др.).

При культуральных исследованиях возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis.

Материал для исследований

  • Мазок из ротоглотки и носа, при подозрении на дифтерию редких локализаций (глаз, рана, ухо и т.д.) – материал с пораженных участков, а также с миндалин и носа – культуральные исследования, обнаружение специфического фрагмента гена tox;
  • сыворотка крови – выявление АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает посев клинического материала с изучением токсигенных свойств на среде для определения токсигенности и биохимической идентификацией возбудителя, обнаружение АГ (дифтерийного токсина), выявление специфических АТ к дифтерийному токсину, обнаружение специфического фрагмента гена tox.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики и особенности интерпретации их результатов. Микроскопические исследования выполняют только для идентификации выделенной культуры. Микроскопия биологического материала не проводится.

Для посева используют материал соответствующих локализаций. Изучение токсигенных свойств на среде для определения токсигенности выполняют при использовании метода встречной иммунодиффузии токсина и антитоксических АТ в плотной питательной среде. При отсутствии линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч инкубации культура признается не токсигенной. Для биохимической идентификации используется тест с цистиназой (среда Пизу), определение уреазной и сахаролитической (сахароза, глюкоза, крахмал) активности.

Выдача ответа:

  • при обнаружении специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 24–48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к культурально-биохимическому варианту gravis, mitis;
  • при отсутствии специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении не токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к соответствующему культурально-биохимическому варианту;
  • при наличии линий преципитации на среде для определения токсигенности, идентичных линиям контрольного штамма дифтерии, положительных проб на цистиназу, уреазу, ферментации глюкозы и крахмала, отсутствие ферментации сахарозы, отсутствие редукции нитратов в нитриты, культуру относят к виду C.ulcerans, токсигенный вариант;
  • при выделении дифтероидов ответ выдается отрицательный.

При посеве возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis. Для выявления дифтерийного токсина используют методы РНГА или ИФА. Это исследование не является обязательным в практических бактериологических лабораториях, однако может использоваться как дополнительное для выдачи предварительного ответа. Метод также позволяет определить относительное (условное) количественное содержание токсина в исследуемой пробе.

Для выявления специфических АТ используют методы РПГА и РНГА. Метод РПГА используется для изучения напряженности противодифтерийного иммунитета. Условно-защитным титром АТ принят титр 1:20.

У больных определение титра АТ к АГ дифтерийной палочки в сыворотке крови методом РНГА проводится в двух пробах крови, собранных в начале заболевания и через 7–10 дней. Нарастание титра АТ в 3–4 раза во второй сыворотке относительно первой свидетельствует о перенесенной инфекции. Исследование используется преимущественно для ретроспективной диагностики дифтерии.

Обнаружение гена токсигенности (tox) методом ПЦР – наиболее быстрый и надежный метод лабораторной диагностики, однако он не дает информацию о способности микроорганизма к экспрессии дифтерийного токсина. Описаны случаи нетоксигенных штаммов дифтерии, несущих в себе

www.cmd-online.ru

ЗАЩИТНЫЙ УРОВЕНЬ АНТИТОКСИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ТОКСИНУ CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE КОТОРЫЙ ОБЕСПЕЧИВАЕТ СТОЙКУЮ ДЛИТЕЛЬНУЮ НЕВОСПРИИМЧИВОСТЬ К ДИФТЕРИИ СОСТАВЛЯЕТ: Дифтерия: антитела к дифтерийному токсину в крови

В эти лунки вносят испытуемые пробы, и если в пробе есть токсин, он прочно связывается с антителами на поверхности планшета. Возбудитель дифтерии был открыт в 1883-1884 pp. Е. Klebs и F. Loffler, последний выделил чистую культуру бактерий. У больных токсическим дифтерией II-III степени он развивается в 80-100% случаев и становится едва ли не единственной причиной смерти.

Возбудитель дифтерии Corynebacterium diphtheriae, был выделен в чистом виде Лёффлером в 1884 г. Corynebacterium diphtheriae отличается полиморфизмом. В последние годы отмечают резкий рост заболеваемости дифтерией.

Осложнения дифтерии

Возбудитель дифтерии можно выделить через 8-12 ч в том случае, если больной не принимал антибактериальных препаратов. В этих случаях используют серологические методы диагностики. В последние годы на смену РПГА приходит метод ИФА, обладающий ещё большими чувствительностью и специфичностью.

Анатоксин служит непреодолимым барьером для дифтерийного токсина и защищает организм от интоксикации. Определение титра антител к дифтерийному токсину необходимо для диагностики дифтерийной инфекции, оценки напряжённости иммунитета у обследуемых, оценки эффективности вакцинации дифтерийной вакциной.

Дифтерия — острое инфекционное заболевание, для которого характерно тяжелое течение. Болеют дифтерией и взрослые, и дети. Вызывает заболевание микроб Corynebacterium diphtheriae, который продуцирует токсин, повреждающий клетки тканей человека. Токсин в значительной степени определяет характер заболевания.

В свою очередь, восприимчивость или невосприимчивость зависит от того, были ли люди привиты специальной вакциной или нет, есть ли у них в крови специфические антитоксические антитела.

Помимо иммунопрофилактики (вакцинации) для предупреждения распространения заболеваемости дифтерией важными мерами являются своевременная диагностика заболевания, изоляция больных и бактерионосителей. У привитых лиц дифтерия может протекать в легкой форме или вообще скрыто, в виде бактерионосительства, без явных признаков заболевания. Вот почему после длительного отсутствия в коллективе или при приеме в детский коллектив, а также при выписке из больницы и детей, и взрослых проверяют на бактерионосительство.

Для постановки ИФА используют специальные планшеты с лунками, к поверхности которых прочно прикреплены данные антитела. Интенсивность окраски меняется в зависимости от количества токсина, связавшегося с антителами. В первом случае это позволяет прогнозировать тяжесть течения и исход заболевания, во втором — оценить эффективность вакцинации и определить степень защищенности населения от заболевания.

Этот метод основан на том, что в реакции используют эритроциты, на поверхности которых прикреплен анатоксин. Однако установлено, что эта реакция малочувствительна и часто дает ложно-отрицательные результаты. Более точные данные о содержании антитоксических антител получают при постановке реакции нейтрализации токсина антителами. Оказалось, что под действием токсина они умирают, и степень поражения пласта клеток зависит от количества внесенного токсина.

Эпидемиология дифтерии

При использовании серии разведений сыворотки можно найти то разведение, которое и обеспечивает полную защиту, то есть титр токсин-нейтрализующих антител. Однако и этот метод имеет существенный недостаток, так как может быть использован только в специальных лабораториях, имеющих соответствующее оборудование для работы с живыми клетками.

Этиология дифтерии

Такой метод был разработан в нашей лаборатории. Поэтому можно измерить количество связывающегося токсина, как при простом титровании токсина, так и при постановке реакции нейтрализации. Для оценки эффективности вакцинации и для прогнозирования течения болезни очень важно исследовать напряженность иммунитета. В 1884-1888 pp. Е. Roux и A. Yersin получили экзотоксин дифтерийной палочки и изучили его свойства. Обнаружение в 1890 г. российский ученым Орловским в крови больных антитоксина указало пути к созданию противодифтерийной сыворотки.

Н. Ф. Филатов и Г. Н. Габрнчевський впервые в России применили сыворотку для лечения и убедительно доказали ее эффективность. Возбудитель дифтерии — Corynebacterium diphtheriae, или палочка Леффлера, — принадлежит к роду Corynebacterium.

Специфическая диагностика дифтерии

Способность к токсинообразование — генетически закрепленная признак возбудителя дифтерии. Кроме токсина, дифтерийные палочки продуцируют нейраминидазу, гиалуронидазу, некротизирующий и диффузный факторы.

При низкой температуре сохраняется в течение 6-месяцев без потери патогенных свойств. Источник инфекции — больные дифтерией (заразные с последнего дня инкубационного периода до 10-25-го дня болезни) и бактерионосители токсигенного штамма возбудителя.

Заболевают лица, в которых нет антитоксического иммунитета или напряженность его низкая (содержание антитоксина ниже за 0,03 AO в 1 мл крови). В связи с вакцинацией детей возрастная структура заболеваемости изменилась в сторону ее «взросления».

После перенесенной дифтерии формируется иммунитет различного напряжения и продолжительности, отдельные лица могут болеть повторно. Антитоксические и антибактериальные иммуноглобулины играют главную защитную роль в противодифтерийной иммунитете.

Дифференциальный диагноз дифтерии

Дифтерия встречается во всех странах мира. На всех континентах чаще болеют невакцинированные дети. В Украине в последнее время отмечается повышение заболеваемости дифтерией. Дифтерия является управляемой инфекцией. Болезнь исчезает там, где вакцинацию анатоксином проводят систематически и доброкачественно.

В этих случаях количество связавшегося токсина определяется с помощью реактивов, дающих цветную реакцию, и может быть измерено. В лаборатории получены моноклональные антитела к той части дифтерийного токсина, который определяет его связь с клеткой. Диагностика дифтерии основана на клинических и эпидемиологических данных. В большинстве случаев дифтерии гортани общая интоксикация является умеренной. В 1912 г. В. Schick предложил кожную реакцию для выявления лиц, восприимчивых к дифтерии.

Сегодня популярно:

levosofertun.ru


Смотрите также