Ложноположительный анализ на ВИЧ: возможные причины. Перекрестные реакции антител вич


Ложноположительный анализ на ВИЧ и его причины

01 сентября 2015

Просмотров: 10893

Некоторые люди получают ложноположительный анализ на ВИЧ, причины такого результата могут быть разнообразными. В первую очередь такое может быть вызвано тем, что анализ проводился на дому. Ошибки может совершить медицинский персонал, когда тест проводится в специализированной клинике. К тому же многие болезни и патологические изменения в состоянии здоровья человека могут повлиять на то, что данные, полученные в результате исследования, будут неверными.

Анализ крови на ВИЧ

Причины ложноположительного анализа на ВИЧ при домашнем проведении исследования

Разработанные методики, которые позволяют выявить наличие или отсутствие вируса иммунодефицита человека в организме, дают 100-процентные результаты. Однако в некоторых случаях данные могут подвергаться искажению, поэтому их необходимо перепроверять.Сейчас очень часто обследование производится в домашних условиях, что дает человеку возможность сохранить данные анонимными. Это исследование останется конфиденциальным. Однако именно в таких условиях и появляются ошибки в проведении исследования, из-за чего тест становится некачественным. Чтобы избежать таких ситуаций, лучше провести данное исследование в клинике, а затем получить результаты из лаборатории. В таком случае риск того, что данные будут искажены, составляет всего 0,01%. К тому же домашние анализы могут давать совершенно другой ответ.

Причины, которые приводят к получению ложноположительного результата на ВИЧ

Беременность - причина сдачи крови на ВИЧПривести к подобным последствиям могут перекрестные реакции. Некоторые болезни вызывают такие реакции. К примеру, у человека может быть аллергическая реакция. В таком случае вырабатываются антигены определенного типа, которые будут непонятны для организма. В таком случае иммунитет распознает их как чужеродные. Такие антигены могут привести к тому, что данные будут ложноположительными.

Кроме того, при беременности в организме женщины изменяется гормональный фон, что является причиной получения ложноположительных данных. То же касается и периода менструации.

Если у пациента обнаружены рибонуклеопротеины нормального типа, то результат анализа будет изменен. Кроме того, положительный тип вызывают вирусы гепатита и гриппа, поэтому необходимо сначала пролечить данные заболевания, только потом сдавать кровь на анализ. То же касается и прививок, которые были сделаны совсем недавно. Они будут мешать ходу проведения анализа крови. Лучше сдать кровь позже. Такие реакции может вызывать вакцинация от столбняка, гриппа и гепатита В. Это же касается и вируса туберкулеза. Он изменяет показатель исследования в положительную сторону. Приблизительно так же действует вирус герпеса. Поэтому лучше вылечить все заболевания, которые вызваны подобным вирусом, выждать реабилитационный период и только потом сдавать кровь на анализ.

Вирус ВИЧПри плохой свертываемости тоже не стоит сдавать кровь, т. к. показатель будет ложноположительным. Если у пациента, наоборот, очень густая кровь, то это повлияет на результат. Если человек очень часто сдает кровь в качестве донора, то лучше подождать, когда количество крови в организме восстановится. В противном случае анализ даст ложноположительный результат. Различные виды склерозов и нарушения в работе мелких кровеносных сосудов ведут к неправильному ходу исследования.

Если есть проблемы с органами дыхательной системы (инфекционные заболевания), то параметр может измениться. При лихорадке тоже появляются изменения, которые искажают проведение исследования.

Если в крови повышается количество антител либо изменяется уровень билирубина, то реакция при анализе может быть положительной, но это будут ложные данные. Кроме того, склероз приводит к таким же результатам.Еще одно заболевание, которое вызывает положительный показатель, это рак, поэтому с наличием злокачественных опухолей и других онкологических заболеваний достаточно трудно определить ВИЧ в организме.

Когда производится пересадка органов, то обследование может дать ложноположительный результат, однако это может быть неверно.

Если у человека развиваются аутоиммунные болезни печени, то результат будет искажен. Аутоиммунные заболевания возникают тогда, когда иммунная система организма начинает действовать против собственных же органов в теле, атакуя их и блокируя работу. В целом же, если нарушены регуляторные процессы иммунной системы, то результат станет искаженным, но положительным. Кроме того, употребление алкоголя может вызвать болезни печени, которые и провоцируют неправильные результаты анализа крови на ВИЧ. Кроме того, артрит будет действовать так же.

Врачебные ошибки, из-за которых результаты анализа оказываются неверными

Ложный результат по вине медицинского персоналаДостаточно часто происходят такие ситуации, когда человек получает положительный результат на ВИЧ из-за ошибок самого медицинского персонала, хотя исследование проводилось в специализированном заведении.

Ложный результат может быть получен из-за того, что был неправильно совершен забор крови. Кроме того, если кровь неправильно хранилась в медицинском заведении, до того как необходимо было проводить тест после забора крови, то данные будут искажены. Такие результаты может вызвать и транспортировка крови до лаборатории, которая выполнялась не по правилам. Еще одна причина, которая приводит к ложноположительному результату, это использование некачественной сыворотки для анализа.

Все эти факторы происходят только из-за того, что медицинский персонал халатно относился к своей работе. Его некомпетентность может привести к получению искаженных данных.

Конечно, не все медицинские центры совершают такие ошибки, риск этого очень мал. Однако лучше проверять данные и делать повторный анализ на ВИЧ. На данном этапе развития медицинских технологий многие клиники оснащены специальным новейшим оборудованием, которое исключает риск получения ложного результата.

Как не получить ложноположительный результат при анализе на ВИЧ?

Чтобы данные, полученные в ходе исследования, были максимально точными, необходимо придерживаться некоторых правил. Перед тем как сдавать кровь на анализ, необходимо предупредить врача о том, что возможно развитие какого-либо заболевания. Кроме того, нужно упомянуть обо всех препаратах, которые применяются на данный момент.

Анализ должен проводиться только через 1,5-3 месяца после того, как был совершен подозрительный контакт.

Лучше использовать диетическое питание временно, отказаться от курения, а также не употреблять алкогольные напитки. Кроме того, нужно отказаться от половой активности за 3 недели до анализов.

Автор:

Иван Иванов

Поделись статьей:

Оцените статью:

Загрузка...

Похожие статьи

krovetvorenie.ru

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ)

Что это за анализ?

Исследование специфических антител и антигена p24 вируса иммунодефицита человека.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Ви́рус иммунодефици́та челове́ка — ретровирус из рода лентивирусов, вызывающий медленно прогрессирующее заболевание — ВИЧ-инфекцию.

Вирус поражает клетки иммунной системы, имеющие на своей поверхности рецепторы CD4: Т-хелперы,моноциты, макрофаги, клетки Лангерганса, дендритные клетки, клетки микроглии. В результате работа иммунной системы угнетается и развивается синдром приобретённого иммунного дефицита (СПИД), организм больного теряет возможность защищаться от инфекций и опухолей, возникают вторичныеоппортунистические заболевания, которые не характерны для людей с нормальным иммунным статусом. Без врачебного вмешательства оппортунистические заболевания вызывают смерть пациента в среднем через 9—11 лет после заражения (в зависимости от подтипа вируса). При проведенииантиретровирусной терапии продолжительность жизни пациента может быть продлена до 70—80 лет

Human Immunodeficency Virus - stylized rendering.jpg

Структура вируса иммунодефицита человека

ВИЧ-1 – наиболее распространенный тип вируса, чаще всего встречающийся в России, США, Европе, Японии и Австралии (как правило, субтип В).

ВИЧ-2 – редкий тип, распространен в Западной Африке.

Для данного исследования используется комбинированная тест-система четвертого поколения, способная определять ВИЧ-инфекцию уже через 2 недели после попадания вируса в кровь, тогда как тест-системы первого поколения делают это только через 6-12 недель с момента инфицирования.

Преимуществом этого комбинированного анализа является выявление, благодаря использованию антител к ВИЧ-1 p24 в качестве реагентов, специфического антигена p24 (белка вирусного капсида), который может быть обнаружен данным тестом уже через 1-4 недели с момента инфицирования, т. е. еще до сероконверсии, что значительно сокращает «период окна».

Кроме того, такое исследование выявляет в крови антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 (с использованием реакции антиген-антитело), которые вырабатываются в достаточном количестве для определения тест-системой через 2-8 недель с момента заражения.

После сероконверсии антитела начинают связываться с антигеном p24, в результате чего тест на антитела к ВИЧ будет положительным, а тест на p24 – отрицательным. Однако спустя некоторое время в крови будут определяться и антитела, и антиген одновременно. На терминальной стадии СПИД-тест на антитела к ВИЧ может давать отрицательный результат, так как нарушается механизм выработки антител.

Стадии ВИЧ
  1. Инкубационный период, или «период серонегативного окна», – время с момента заражения до выработки в крови защитных антител к вирусу, когда тесты на антитела к ВИЧ отрицательны, но человек уже может передавать вирус другим людям. Продолжительность данного периода – от 2 недель до 6 месяцев.
  2. Период острой ВИЧ инфекции наступает в среднем через 2-4 недели с момента инфицирования и длится примерно 2-3 недели. На данном этапе у некоторых людей могут развиться неспецифические симптомы, схожие с симптомами гриппа, что связано с активной репликацией вируса.
  3. Латентная стадия протекает бессимптомно, но в течение нее происходит постепенное снижение иммунитета и увеличение количества вируса в крови.
  4. СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) является конечной стадией развития ВИЧ-инфекции, которая характеризуется сильным угнетением иммунной системы, а также сопутствующими заболеваниями, энцефалопатией или онкологическими заболеваниями.

Несмотря на то что ВИЧ-инфекция неизлечима, сегодня существует высокоактивная антиретровирусная терапия (АРВТ), которая может значительно продлить жизнь ВИЧ-инфицированного и улучшить ее качество.

Данный тест имеет особенно высокую диагностическую ценность, если инфицирование ВИЧ произошло незадолго до момента тестирования (за 2-4 недели)

СПИД

Синдро́м приобретённого имму́нного дефици́та (СПИД, англ. AIDS) — состояние, развивающееся на фоне ВИЧ-инфекции и характеризующееся падением числа CD4+ лимфоцитов, множественнымиоппортунистическими инфекциями, неинфекционными и опухолевыми заболеваниями. СПИД являетсяконечной стадией ВИЧ-инфекции.

СПИД был впервые описан Центрами по контролю и профилактике заболеваний США в 1981 году, а его возбудитель, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), был описан в начале 1980-х годов.

Развитые грибковые инфекции — характерный симптом для больных СПИДом (Оральный кандидоз у больного СПИДом — На ФОТО)

Зачем проводится анализ?/Повышение и понижение показателей

Анализ используется для ранней диагностики ВИЧ, что позволяет предотвратить дальнейшую передачу вируса другим людям, а также своевременно начать антиретровирусную терапию и лечение заболеваний, способствующих прогрессированию ВИЧ-инфекции.

Когда назначается исследование?

  • При устойчивой симптоматике (на протяжении 2-3 недель) неясной этиологии: субфебрильной температуре, поносе, ночной потливости, резкой потере веса, увеличении лимфатических узлов.
  • При рецидивирующей герпетической инфекции, вирусных гепатитах, пневмонии, туберкулезе, токсоплазмозе.
  • Если пациент страдает заболеваниями, передающимися половым путем (сифилисом, хламидиозом, гонореей, генитальным герпесом, бактериальным вагинозом).
  • Если у пациента был незащищенный вагинальный, анальный или оральный секс с несколькими половыми партнерами, новым партнером или партнером, в ВИЧ-статусе которого пациент не уверен.
  • Когда пациент проходил процедуру переливания донорской крови (хотя случаи инфицирования таким путем практически исключены, т. к. кровь тщательно тестируется на наличие вирусных частиц и подвергается специальной термообработке).
  • Если пациент употреблял наркотики инъекционным путем, используя нестерильные инструменты.
  • При беременности / планировании беременности (прием азидотимидина во время беременности, кесарево сечение во избежание передачи вируса ребенку в момент прохождения через родовые пути и отказ от кормления грудью снижают риск передачи ВИЧ от матери к ребенку с 30 % до 1 %).
  • Случайный укол шприцом или другим предметом (например, медицинским инструментом), содержащим в себе инфицированную кровь (в таких случаях вероятность инфицирования крайне низкая).

Результаты/Норма/Расшифровка анализа

Референсные значения

Результат: отрицательный.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие ВИЧ,
  • период серонегативного окна (ни антиген, ни антитела еще не выработались в достаточном количестве, необходимом для определения тест-системой).

Причины положительного результата:

  • инфицирование ВИЧ.

Достоверность результатов анализа

Сомнительным (или неопределённым) результат выявляется в случае, если результат невозможно трактовать как однозначное наличие вируса (например, присутствия в сыворотке крови антител перекрёстно реагирующих с белками ВИЧ). В таком случае часто рекомендуют пересдать тест через несколько недель или применить более специфические тест-системы.

Ложноположительным результатом называется ситуация, в которой вируса нет, а тест показал положительный результат. Это возможно для теста по методу ИФА, последующая проверка с помощью другой системы подтверждает отсутствие вируса.

Ложноотрицательный результат — отрицательный показатель теста при том, что вирус присутствует. Такая ситуация может сложиться если анализ проводится слишком рано, до истечения 3 месяцев (недостаточно антител в крови для срабатывания). Также, анализ ПЦР показывает отрицательный результат во время проведения терапии против ВИЧ, когда концентрация вирусов в крови становится ничтожной, ниже порога срабатывания.

Важные замечания

  • Диагностика антител к ВИЧ у детей грудного возраста, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, затруднена, так как младенец получает антитела от матери через плацентарную кровь. Как правило, тест на антитела к ВИЧ у таких детей становится отрицательным не позднее 18 месяцев, если ребенок не инфицирован ВИЧ.
  • С помощью данного теста невозможно определить, как давно произошло инфицирование, или стадию ВИЧ (например, СПИД).
  • ВИЧ содержится практически во всех жидкостях организма, но только в крови, сперме и вагинальном секрете концентрация вируса достаточна для инфицирования. Кроме того, вирус нестабилен и способен жить лишь в жидких средах человеческого организма, поэтому ВИЧ не передается через поцелуй, укусы насекомых и при бытовых контактах (например, при использовании общего туалета, через слюну, воду и пищевые продукты).
  • Данный анализ хотя и сокращает «период окна», но все же способен определить наличие антигена/антител не ранее чем через 1-3 недели с момента возможного инфицирования.
  • Если событие, грозящее заражением ВИЧ-инфекцией, произошло менее чем за 1-3 недели до тестирования, рекомендуется повторить тест.
  • Анализы первого и третьего поколений могли давать ложноположительный результат, если в крови обследуемого присутствовали антитела к вирусу Эпштейна – Барр, ревматоидному фактору, главному комплексу гистосовместимости HLA или антитела после введения вакцины против ВИЧ. Однако вероятность ложноположительного результата при комбинированном тесте практически исключена.
  • В случае положительного результата тестирования проводится подтверждающий анализ с использованием метода иммуноблотинга (тест на антитела к ряду специфических белков вируса).

Подготовка к сдаче анализа

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Что может повлиять на результат анализа?

 

 

Поделитесь новой информацией с друзьями и знакомыми в:

47medportal.ru

Эволюция особенностей кросс-нейтрализующих антител к CD4-BS и углеводному плащу ВИЧ-инфекции у инфицированного ВИЧ-1 субъекта

Evolution of Cross-Neutralizing Antibody Specificities to the CD4-BS and the Carbohydrate Cloak of the HIV Env in an HIV-1-Infected SubjectИсточник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3496710/

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Задуманные и разработанные эксперименты: IM LS. Выполняли эксперименты: IM. Проанализированы данные: IM LS. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: IM LS. Написал газету: IM LS.

Широко нейтрализующие антитела считаются важной частью успешной вакцины против ВИЧ. Лучшее понимание факторов, лежащих в основе их развития во время инфекции, и эпитопов, на которые они нацелены, необходимо для того, чтобы выявить подобные ответы антител путем вакцинации. Мы и другие сообщали, что в среднем требуется от 2 до 3 лет, когда перекрестно-реактивные нейтрализующие антитела становятся обнаруживаемыми в сыворотке ВИЧ-1-инфицированных субъектов и что они нацелены на ограниченное количество эпитопов на ВИЧ-конверте. Здесь мы исследовали возникновение и эволюцию ранних специфических перекрестно-реактивных нейтрализующих антител у одного ВИЧ-1-инфицированного человека, AC053. Мы определили два различных эпитопа на Env, которые нацелены на ответы с широким нейтрализующим антителом, разработанные AC053. Первая специфичность стала очевидной через 3 года после заражения и нацелилась на сайт CD4-связывания Env. Антитела, ответственные за эту специфичность, нейтрализовали большинство, но не все, вирусы, восприимчивые к нейтрализации плазменными антителами AC053. Вторая специфика стала очевидной примерно через год. Это было связано с PG9-подобными антителами, которые смогли нейтрализовать те вирусы, которые не были восприимчивы к анти-CD4-BS-антителам в AC053. Эти результаты улучшают наше понимание совместного развития широко нейтрализующих антител, которые нацелены на более чем один эпитоп во время естественной ВИЧ-1-инфекции у отдельных ВИЧ-инфицированных. Они подтверждают гипотезу о том, что разработка широко нейтрализующих ответов антител, нацеленных на различные эпитопы путем иммунизации, может быть осуществимой.

Реакция нейтрализующего антитела (NAb) достаточной продолжительности и величины считается важной частью успешной вакцины против ВИЧ [1] — [3]. В многочисленных исследованиях была продемонстрирована защита стерилизацией NAbs от заражения вирусом иммунодефицита обезьян-человека (SHIV) в моделях нечеловеческих приматов [4] — [7], а давление отбора, которое NAbs оказывает на вирус во время естественной инфекции у людей [8] — [11]. Эти наблюдения в подавляющем большинстве указывают на то, что наличие подобных типов NAbs, вызванных вакциной, будет полезно для вакцины.

Единственной мишенью для нейтрализации антител к ВИЧ является вирусный кодированный огибающий гликопротеин (Env). Функциональная единица Env, выраженная на поверхности инфекционных вирионов, представляет собой тример нековалентно-ассоциированной внеклеточной субъединицы (gp120) и трансмембранной субъединицы (gp41). Из-за огромного генетического разнообразия ВИЧ Env, антитела, вызванные успешной вакциной, должны будут нейтрализовать широкий круг циркулирующих изолятов ВИЧ-1 [2]. Такие антитела называются широко нейтрализующими антителами (bNAbs). Хотя выявление таких ответов путем вакцинации еще не достигнуто, многочисленные исследования исследовали развитие и характеристики широко нейтрализующих антител, полученных при естественной инфекции ВИЧ-1 у людей. Такие исследования предоставили новую информацию о эпитопах, нацеленных на эти кросс-кладовые нейтрализующие активности, и факторы, связанные с их развитием. Несколько исследований инфицированных субъектов ранней и хронической инфекции ВИЧ-1 продемонстрировали, что ответы с широким нейтрализующим антителом развиваются примерно у 15% инфицированных лиц [1], [12] — [18] и становятся обнаруживаемыми через 2 — 3 года после инфицирования [14], [16], [19]. Напротив, ответы аутологичных нейтрализующих антител развиваются от нескольких недель до нескольких месяцев после инфицирования практически у всех инфицированных пациентов, но, хотя они и являются мощными, в значительной степени зависят от штамма и быстро удаляются вирусом [8], [20] — [23].

Систематический анализ специфичности эпитопов ответчиков с полностью нейтрализующими антителами в сыворотках ВИЧ + продемонстрировал, что ограниченное количество специфических факторов отвечает за перекрестно-нейтрализующую активность сыворотки у любого данного человека [13], [15], [24] — [29] , Моноклональные антитела (MAbs) с широкой нейтрализующей активностью были выделены у пациентов с хроническим заражением ВИЧ +, и было показано, что они нацелены на структурно-консервативные эпитопы Env: сайт связывания CD4 (CD4-BS) [30] — [34], консервативные элементы петли V2 и связанных с ней углеводов [35], [36] и консервативных элементов петли V3 и связанных с ней углеводов [37], [38] на gp120. Кроме того, несколько широко нейтрализующих MAbs нацелены на проксимальную внешнюю область мембраны субъединицы gp41 [39], [40].

В предыдущем исследовании мы стремились определить время разработки реакции с широкой нейтрализацией антител к клану В-1 ВИЧ-1 в когорте антиретровирусных наивных субъектов, которые контролировались в продольном направлении от нескольких месяцев до 7 лет после инфицирования [14]. Наши результаты показали, что ответы на нейтрализующие антитела возникали постепенно и становились обнаруживаемыми в течение примерно 2,5 лет после заражения. Впоследствии эти ответы усилились как в потенции, так и в широте. Другие также сообщили об аналогичной зависящей от времени разработке ответных реакций с поперечно-нейтрализующими антителами во время заражения ВИЧ-1 [16], [19], [41]. Исследования картирования эпитопов поликлональных ответов IgG в плазме из когорты, которую мы исследовали, показали, что самые ранние ответы с нейтральным нейтрализующим антителом были нацелены либо на CD4-BS на gp120, либо на эпитопы, не присутствующие на мономерной gp120 [14]. Поскольку нейтрализующая активность против gp41 субъединицы Env не обнаруживалась в плазме, мы предположили, что эти более поздние нейтрализующие активности нацеливают эпитопы, присутствующие на олигомерном Env, но не присутствующие на мономерной gp120. Мы также сообщали, что в некоторых плазме небольшое количество специфических эпитопов способствовало общей кросс-нейтрализующей активности образца плазмы. Например, антитела против CD4-BS отвечали за нейтрализацию определенного количества вирусов, а антитела, которые не могли быть сопоставлены с gp120, отвечали за нейтрализацию различных вирусов, против которых была протестирована плазма. Два последних исследования показали, что, действительно, общая кросс-нейтрализующая активность у хронически инфицированного ВИЧ-объекта может быть повторена двумя моноклональными антителами, выделенными от этого субъекта, которые нацелены на различные эпитопы на Env [42], [43]. Однако в этих исследованиях не было выяснено, возникли ли одновременно оба эти специфики или нет, и как они эволюционировали с течением времени. В настоящем исследовании мы стремились лучше понять относительное появление и эволюцию характеристик двойного эпитопа в хорошо охарактеризованном контроле случаев из вышеописанной когорты.

В этом исследовании были использованы образцы от субъекта AC053 из больничной группы «Раговый институт Массачусетской общей больницы» (MGH) «Острая / ранняя» когорта ВИЧ-инфекции (также называемая «первичной» когорой). Субъект был заражен ВИЧ-1 класса B, не имел болезней, определяющих СПИД, и не был на антиретровирусной терапии во время сбора проб. При заражении ВИЧ-инфекцией MGH «Первичная инфекция» определялась выявляемой РНК ВИЧ в присутствии (i) отрицательного ELISA p24 или (ii) положительного ELISA, но развивающегося WB, или (iii) документированного отрицательного ELISA ВИЧ в прошлом 6 месяцев. Дата инфекции для AC053 была известна, и 9 образцов были собраны в продольном направлении, начиная с 0,82 года после инфицирования, до 6,85 лет после инфицирования, после чего количество лимфоцитов CD4 упало ниже 200 и объект был помещен на антиретровирусную терапию. Образцы были инактивированы при нагревании при 56 ° С в течение 1 часа перед использованием в анализах нейтрализации. Нейтрализующая активность плазмы AC053 сообщалась нашей группой ранее [14].

Рекомбинантные мономерные SF162 gp120 WT или SF162K160N белки gp120 связывали с MyOne Dynabeads Tosylactivated (Invitrogen), как описано ранее [13], [24]. Вкратце, 50 мг магнитных шариков подвергали взаимодействию с 1 мг белкового лиганда в течение ночи при 37 ° С с вращением. После сбора гранул на магните супернатант удаляли и шарики инкубировали в течение ночи при 37 ° С в PBS, 0,5% BSA, 0,05% Твин 20. Магнитные гранулы промывали дважды PBS, 0,1% BSA, 0,05% Tween 20 и хранили при 4 ° С в том же буфере, с добавлением 0,02% азида натрия. Связанные с бисером протеины Env тестировали на антигенную целостность с помощью проточной цитометрии с использованием известных MAbs b12, 447-52D, 2G12, PG9 и 4E10 с последующим обнаружением вторичного антитела коз-анти-человеко-IgG-FITC (данные не показаны). Экспериментальные эксперименты по адсорбции / элюированию с использованием нескольких антивирусов Env MAbs в концентрации 10 мкг / мл в наивной плазме выполнялись как положительный контроль. 250 мкл или 500 мкл плазмы, разведенной 1:58 в DMEM / 10% FBS, инкубировали с 100 мкл или 200 мкл белков Env, связанных с белками, соответственно, при 37 ° C в течение 120 минут с нежным вращением. Образцы помещали на магнит и выделяли гранулы. На один образец проводили четыре раунда бортовых адсорбций.

Анти-gp120-плазменные антитела, связанные с белковыми белками Env, были элюированы в серии все более кислых растворов, как описано ранее [24]. Бусины из каждой серийной адсорбции объединяли и инкубировали в 0,1 М глицин-HCl, рН 2,7 в течение 30 секунд с перемешиванием. Бусины собирали путем кратковременного центрифугирования и удерживали на месте магнитом. Супернатант удаляли и доводили до рН 7,5 с помощью 1 М Трис (рН 9,0). Процесс повторяли с помощью шариков в 0,1 М глицин-HCl, pH 2,3, а затем снова при рН 1,7. Конечные супернатанты заменяли буферным раствором в PBS и промывали на центрифугационном концентраторе Amicon Ultra с концентрацией 30 кД (Millipore). Концентрацию иммуноглобулина определяли с помощью абсорбции при 280 нм (спектрофотометр NanoDrop ND-1000, Thermo). Пропитанную анти-gp120-антителом плазму и антитела против gp120, элюированные гранулами, покрытыми gp120, испытывали с помощью ELISA для активности связывания и для нейтрализующей активности (данные не показаны).

В этом исследовании использовались одиночные грамотрицательные вирусы, экспрессирующие Env из генов Clades A, B и C. Изоляты клады B SF162, JRFL и YU2 выделялись во время хронической инфекции ВИЧ-1, а оставшиеся изоляты выделялись во время острой инфекции [44] — [46]. Одноразовые компетентные вирусы были получены в 293 клетках, как описано ранее [47], с модификацией, что GeneJuice (EMD Millipore) использовали в качестве трансфекционного реагента. В тех случаях, когда использовали псевдовирусы, обработанные кифуненисне или пуансонином, клетки-продуценты 293 обрабатывали 50 мкМ ингибитора гликозидазы после трансфекции, а псевдовирус собирали после 72-часовой инкубации. Все обработанные псевдовирусы были протестированы на устойчивость к нейтрализации PG9 или PG16.

Нейтрализующую активность плазмы определяли с использованием анализа нейтрализации на основе Tzm-bl [48]. Вкратце, плазменные разведения предварительно инкубировали с однократными компетентными вирионами (псевдовирусом) в течение 90 минут при 37 ° С. Смесь плазмы / псевдовируса добавляли к клеткам TZM-bl (помещали накануне на 3000 клеток на лунку в 96-луночный планшет) в течение 72 часов при 37 ° C. Супернатант удаляли и в каждую лунку добавляли 100 мкл субстрата для анализа люмиферазы Steady-Glo (Promega). Плиты инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре от света и 75 мкл лизата переносили в микротитрационные пластины. Активность люциферазы, ассоциированную с клетками, для каждой лунки определяли на люминометре Fluoroscan (Thermo). Процент нейтрализации рассчитывали при каждом разведении плазмы в виде процента ингибирования проникновения вируса по образцу плазмы по сравнению с отсутствием плазмы. Для каждой тестируемой комбинации плазмы / вируса с помощью GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego California, USA) генерировалась кривая нейтрализации (процентная нейтрализация по сравнению с плазменным разжижением) и разведение плазмы, при котором была зарегистрирована 50% нейтрализация (IC50) путем преобразования данных в шкалу log10 с установленными сигмоидальными кривыми зависимости доза-реакция. Нейтрализационная ширина образца плазмы определяется как процент (0% — 100%) из 20 изолятов, нейтрализованных этим образцом [14]. Все образцы плазмы подвергали скринингу на не-ВИЧ-специфическую нейтрализацию с использованием мышиного лейкоза (MLV), псевдотипированного в основную цепь ВИЧ.

В некоторых случаях эксперименты по нейтрализации конкуренции проводились в присутствии D368R gp120, как описано ранее подробно [49]. Вкратце, последовательно разбавленную плазму ВИЧ + предварительно инкубировали с D368R (25 мкг / мл) в течение 1 часа при 37 ° С, а затем смесь инкубировали с вирусом в течение еще одного часа при 37 ° С и затем с клетками, как описано выше. Определялось снижение кратности логарифма log10 IC50-нейтрализации каждой плазмы, протестированной против каждого вируса в присутствии D368R gp120.

Чтобы определить, как эволюция эпитопов реакции широко нейтрализующего антитела эволюционировала с течением времени, мы сосредоточили наш анализ на одном субъекте в когорте MGH — AC053. Годовые образцы плазмы были доступны для AC053, начиная с 0,82 года до 6,85 лет после инфицирования, после чего субъект инициировал антиретровирусную терапию. Раньше мы характеризовали развитие реакции с широким нейтрализующим антителом у этого субъекта и продемонстрировали, что в течение 3,29 года плазма этого субъекта могла нейтрализовать 45% из 20 тестируемых изолятов из кросс-кладов и на 5,31 года -80% [14]. Кумулятивные титры IC50 во всех временных точках (сумма взаимных разведений для достижения 50% -ного ингибирования инфекционности) показаны на рисунке 1. Исходные исследования картирования эпитопа показали, что в целом нейтрализующий ответ антитела AC053 на 5,31 года был в основном сфокусирован на CD4-BS, как присутствует на мономерной gp120 [14]. Однако для некоторых тестируемых изолятов (например, TRO.11, CAAN и Zm214M) нейтрализующая активность плазмы не зависела от истощения антител против gp120 или анти-MPER. Это заставило нас предположить, что по крайней мере одна дополнительная специфичность антитела присутствует в плазме субъекта; специфичность, которая нацеливала эпитоп на ассоциированный с вирионом Env, вне CD4-BS. Наличие частых и долговременных доступных образцов сделало этот предмет удобным для изучения эволюцией характеристик двойного эпитопа реакции кросс-реактивного антитела к ВИЧ.

Антитела IC50-нейтрализующих плазменных антител против 19 гетерологичных Clade A (синих), B (зеленых) и C (оранжевых) изолятов определялись в определенные моменты времени во время инфекции. Показана сумма этих титров (кумулятивный титр IC50). Реакция нейтрализующего антитела постепенно увеличивалась в широте и потенции, и при самой высокой зарегистрированной ширине (5,31 ypi) AC053 нейтрализовал 16 из этих изолятов (ширина 80%). Наиболее сильные нейтрализующие активности были против изолятов Clade B.

MAbs PG9, PG16 и CH01-04 представляют собой класс кросс-нейтрализующих специфик, которые в первую очередь нацелены на зависящие от вириона Env на соответствующие растворимые рекомбинантные формы Env и отображают вне CD4-BS [36], [50]. Эти типы антител распознают сложный эпитоп в петле V2, который образован как аминокислотами, так и молекулами гликанов [35]. MAbs PGT125-128 представляют собой второй класс кросс-нейтрализующих специфик, которые также распознают два консервативных гликана на gp120, но нацелены на сложный эпитоп, который включает аминокислотную основу цикла V3 [37], [38]. Известной отличительной особенностью эпитоподобных особенностей PG9 / PG16 (по сравнению с специфичностью PGT-подобных эпитопов) является потеря нейтрализующей активности против вирусов, обработанных кифуненсином [36], [51]. Кифуненсин является маннозным аналогом, который ингибирует альфа-гликозидазы типа I, а вирионы ВИЧ, продуцируемые клетками, обработанными кифунсином, устойчивы к нейтрализации с помощью PG9 и PG16 [51]. Однако эта обработка не оказывает существенного влияния на нейтрализацию других сильно нейтрализующих mAb, таких как VRC01 или 2G12 (рисунок 2) и др. [29]. Кроме того, такая обработка не влияет на нейтрализующую активность MAb PGT125-128 (которые распознают консервативный эпитоп в петле V3 и ассоциированных углеводах) [38]. В качестве отрицательного контроля мы включили лечение с помощью антагониста, который ингибирует маннозидазу-II, и другие сообщили, что он не отменяет нейтрализацию PG9 и PG16 [51]. Интересно, что ВИЧ, подвергшийся лечению сперсонами, был более восприимчивым к PG9, PG16 и 2G12, чем к необработанному вирусу (рисунок 2).

Кривые нейтрализации были нанесены на график для MAbs PG9, PG16, VRC01 и 2G12 с необработанными (черные круги), обработанными кифунсинзином (красные квадраты) и псевдоожиженным (синие треугольники) SC422661.

Сначала мы исследовали, были ли PG9 / PG16-подобные нейтрализующие активности присутствовали в плазме AC053, путем сравнения нейтрализующей активности этой плазмы с использованием вирусов, полученных в отсутствие или присутствии кифунзина. PG9 / 16-подобные антитела не распознают SF162 gp120, поскольку в нем отсутствуют гликаны в положении 160, которые необходимы для связывания PG9 / 16-Env [36], [52]. Поэтому это объясняет, почему нейтрализующая активность анти-TRO.11, CAAN или Zm214M-активности плазмы AC053 не может быть устранена с помощью адсорбции антител на основе SF162gp120 [14]. Введение аспарагина в этом положении (SF162K160N) делает вирус очень восприимчивым к PG9 / 16 [53]. Поэтому мы протестировали плазму AC053 на 5,31 года PI против вирусов SC422661, PVO.4 и SF162 K160N, выращенных в присутствии или в отсутствие кифуненсина или шунгонина (рис. 3). Нейтрализующая активность против всех вирусов, обработанных кифуненсином, либо полностью отсутствовала (SC422661 и PVO.4), либо заметно уменьшалась (SF162K160N) по сравнению с необработанными или обработанными вирусом свиньями вирусами. Этот результат предположил, что, возможно, в плазме AC053 содержатся антитела, подобные PG9 / 16.

Процентная нейтрализация вирусов, продуцируемых в 293 Т-клетках, либо в присутствии, либо в отсутствии 20 мкМ ингибиторов кифуненсина или свайнониновой гликозидазы (как описано в Материалах и методах) определялась при данном разведении плазмы. Черные круги — без лечения, красные квадраты — лечение кифуненсином, синие треугольники — лечение свайнами.

Вышеприведенный анализ AC053 проводили с плазмой, собранной через 5,31 года после инфицирования, в то время, когда широкомасштабная нейтрализация активности плазмы у этого субъекта была хорошо установлена. Чтобы определить, насколько рано эта специфичность возникла в плазме AC053 и совпала ли она с появлением общей широко нейтрализующей активности у этого субъекта, мы провели аналогичные исследования с плазмами, собранными в продольном направлении. Однако самые ранние образцы не проявляют широко нейтрализующих действий и не нейтрализуют SC422661 или PVO.4 [14], поэтому мы не могли использовать эти вирусы для этого эксперимента. Однако все образцы нейтрализуют вирус SF162K160N. Нейтрализующую активность продольной плазмы от AC053 оценивали по сравнению с SF162K160N, выращенной в присутствии или в отсутствие кифунзина (рисунок 4A). Самая ранняя плазма (собранная через 0,82 года после заражения) не могла нейтрализовать ни кифуненсин, ни вирусы, обработанные вирусом. Напротив, плазма, собранная через 1,75 года после инфицирования, могла только нейтрализовать необработанный вирус и вирус, обработанный с помощью свингонинов, но не вирус, обработанный кифуненсином. Эти результаты свидетельствуют о том, что, возможно, PG9 / 16-подобные нейтрализующие активности начали возникать у этого субъекта в течение первых двух лет заражения, когда-то между 0,82 и 1,75 годами после инфицирования (в то же время, что и общая кросс-нейтрализующая активность AC053 плазма стала обнаруживаться [14]). Это относительно раннее развитие антител, подобных PG9 / 16, во время ВИЧ-инфекции было недавно сообщено у других субъектов ВИЧ + [16], [26]. Плазма AC053, собранная после этой точки заражения, также нейтрализовала вирус WT и вирус, обработанный свайнами, но не вирус, обработанный кифуненсином. Таким образом, зависимая от кифунсензина нейтрализующая специфичность в AC053 поддерживалась на протяжении всего наблюдения (более 6 лет заражения).

Процентное изменение в титрах IC50 плазмы обработанных кифуненсином (красных) и обработанных пуансонином (зеленых) SF162 K160N рассчитывали по отношению к необработанному вирусу. Для каждого образца указываются годы заражения и нейтрализованные проценты изолятов. (A) Годовые продольные образцы плазмы AC053 с 1,75 года до 6,85 лет продемонстрировали чувствительность только к обработке кифуненсина, тогда как образцы 0,82 не могли нейтрализовать ни обработанный вирус. PG9 включен как положительный контроль. (B) Образцы плазмы из когорты MGH, подробно описанные в предыдущем отчете [14], были протестированы на нейтрализацию обработанных и необработанных вирусов. Были отобраны четыре плазмы с узкой шириной (ширина ≤35%) и четыре плазмы с поперечно-реактивными ответами NAb (ширина ≥75%). AC053 была единственной плазмой, которая продемонстрировала PG9-подобную резистентность к кифунсин-, но не лечившимся под действием перорально псевдовирусов.

В свете этих результатов мы хотели исследовать, насколько распространенная кифунсин-зависимая нейтрализующая специфичность была в когорте MGH. Эффект лечения кифуненсином был протестирован на плазме у 3 других пациентов из этой когорты, которые развивали широко нейтрализующие ответы на антитела и на плазму у 4 пациентов из этой когорты, у которых не было таких ответов (рисунок 4B). В отличие от результатов, полученных в плазме AC053, лечение кифуненсином не оказывало такого же влияния на нейтрализующую активность этих 7 плазмы. Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что чувствительность к кифуненсину, но не бразилонину, была уникальной особенностью в AC053 широко нейтрализующем ответе антител в этой когорте. Следует отметить, что в другом исследовании отдельной когорты хронически инфицированных ВИЧ-1 субъектов с широкими ответами NAb сообщалось о сходной частоте специфичных для PG9 / 16 нейтрализующих антител [26].

Затем мы проверили гипотезу о том, что глюканоспецифическая, PG9-подобная кросс-нейтрализующая активность в плазме AC053 будет «истощена», если будут использованы соответствующие реагенты. С этой целью мы выполнили следующий набор экспериментов. Плазмы, собранные в четырех временных точках после того, как ответы на генерализованные нейтрализующие антитела были истощены из их антител против gp120 либо WTSF162gp120 (который не разрушает PG9-подобные антитела), либо SF162K160Ngp120 (который истощает PG9-подобные антитела) (фиг. S1) , Оба белка конверта истощают антитела против CD4-BS (данные не показаны). Нейтрализующие активности незавершенной и обедненной плазмы оценивали и сравнивали с использованием вирусов, полученных из CAAN, в качестве мишеней (рис. 5). CAAN является одним из вирусов, который, хотя и восприимчив к нейтрализующей активности плазмы AC053, не чувствителен к антителам против CD4-BS, присутствующим в AC053 (фиг. 5A и [14]). Помимо WT CAAN, в эти эксперименты также были включены два варианта CAAN. Один (CAAN N301Q) не имеет N-связанного сайта гликозилирования на N-конце петли V3 в положении 301, а другой (CAAN 332) не имеет N-связанного сайта гликозилирования на С-конце цикла V3. Эти два гликана являются частью эпитопов PGT-подобных антител [37], [38]. Глинец с высоким содержанием маннозы в положении 332 также является частью эпитопа 2G12 — другого гликанозависимого MAb [54].

A) Log10 уменьшает титры IC50 путем элиминации анти-WT SF162 gp120 или конкуренции анти-D368R SF162 gp120 антител, как сообщается в [14], что демонстрирует, что CAAN не восприимчив к анти-CD4BS-кросс-реактивным ответам NAb AC053. (B) Log10 уменьшают титры IC50 путем элиминации анти-WT SF162 gp120 или анти-K160N SF162 антител, что свидетельствует о глюкано-специфическом кросс-нейтрализующем ответе. Голубой: без эффекта или меньше 0,5 log10; Оранжевый: уменьшение от 0,5 до 0,9 log10; Красный: более 0,9 Log10 уменьшается.

На нейтрализующую активность плазмы AC053 не влияла обработка истощения WTSF162gp120 (рисунок 5B). Однако истощение SF162K160Ngp120 привело к постепенной потере нейтрализующей активности плазмы AC053. Инициирующие IC50 титры плазмы AC053 увеличивали (т. Е. Менее сильную нейтрализацию) более чем на половину журнала 10, первоначально против CAAN N301Q (4,30 ypi), затем против CAAN N301Q и CAAN N332Q (5,31 ypi) и, наконец, против всех трех вирусов (CAAN N301Q, CAAN N332Q и CAAN) (5,88 ypi).

Наши результаты показывают, что гликанзависимая нейтрализующая активность в плазме AC053 возникала где-то между 0,82 и 1,75 ypi (рис. 5). В то время, когда эта активность стала очевидной (при 1,75 ypi), общая ширина нейтрализующей активности в крови была очень узкой, а ~ 20% тестируемых изолятов из гетерологичной кланы B и C были восприимчивы к нейтрализации плазмой AC053 [14]. При приблизительно 3 ypi антитела против CD4-BS с поперечно-нейтрализующим потенциалом становились обнаружимыми (рис. 6 и [14]). Как упоминалось выше, и в нашем предыдущем исследовании [14], эти антитела были способны нейтрализовать широкий диапазон изолятов, но не каждый изолят тестировался против (например, TRO или CAAN). Нейтрализующая активность, зависящая от присутствия гликанов в положении 160, стала очевидной значительно позже, иногда после 4,30 мк. Мы полагаем, что антитела, подобные PG9, а не PGT-подобные антитела или 2G12-подобные антитела, появились в то время в AC053, поскольку: (a) на эту нейтрализующую активность влияет кифуненсиновая терапия целевого вируса, (b) она зависит от присутствия углеводов в положении 160, и (с) не зависит от присутствия углеводов в положениях 301 или 332.

В последние несколько лет несколько групп сообщили, что примерно 15% инфицированных ВИЧ-1 развивают широко нейтрализующие ответы на антитела [12] — [18]. Из этих субъектов выделены MAb с мощной и широкой анти-ВИЧ-нейтрализующей активностью [31], [32], [36], [38] — [40], [50]. Мы и другие показали, что широко нейтрализующие ответы на антитела обнаруживаются в плазме ВИЧ + в среднем через 2 — 3 года после инфицирования, но очень редко до этого [14], [16], [19]. Наш первоначальный анализ картирования эпитопа показал, что, как и в исследованиях хронической ВИЧ-инфекции [25], [26], относительно небольшое количество областей Env нацелено на самые ранние ответы нейтрализующего нейтрализующего антитела [14] ,

Характеристика таких MAbs предоставила новую информацию о структуре широко нейтрализующих антител к ВИЧ-1, местоположении и структурах их эпитопов и расширила наши знания о механизмах, с помощью которых такие антитела предотвращают ВИЧ-инфекцию [31], [33] — [35], [55] — [58]. Является ли общая интенсивная нейтрализация активности плазмы человека одной или несколькими специфическими эпитопами антител, остается предметом интенсивного исследования. Недавние исследования, проведенные с образцами, собранными у очень небольшого числа ВИЧ-1-инфицированных пациентов, указывают на то, что одна или две различные специфичности эпитопа могут повторить большинство широко нейтрализующей активности соответствующей плазмы [42], [43], [ 59]. В одном отчете активность, нейтрализующая анти-CD4-BS, в целом нейтрализующая активность нейтрализующей PG9 / 16 [42], в то время как в другом отчете активность, нейтрализующая анти-CD4-BS, была дополнена активностью, направленной против четко определенный эпитоп, который предпочтительно экспонируется, когда Env взаимодействует с CD4 [43]. Эта информация очень актуальна не только для будущих усилий по разработке вакцины против ВИЧ, но и для понимания того, как иммунная система человека (в частности, ее рука В-клетки) реагирует на ВИЧ-инфекцию. Однако вышеупомянутые наблюдения были сделаны в контексте хронической ВИЧ-инфекции, и остается неизвестным, проявляется ли двойная специфичность в целом нейтрализующие ответы на антитела в одно и то же время инфекции или последовательно у данного субъекта.

Широта ответов нейтрализующих антител (т. Е. Процент гетерологичных изолятов, нейтрализованных образцами плазмы из всех тестируемых изолятов [14]), был нанесен на график для всех доступных временных точек для субъекта AC053. Стрелки на временной шкале соответствуют приблизительным годам после инфицирования, когда проявляются специфические особенности нейтрализующих антител. Ширина цвета кодируется следующим образом: синий 0-19%, зеленый 20-39%, оранжевый 40-74%, красный 75-100%.

Чтобы рассмотреть тему относительного времени появления широко нейтрализующих антител, которые нацелены на два (или более) отдельных региона Env в рамках данного предмета, мы сосредоточили наше внимание на пациенте AC053. Clade B-инфицированный AC053 был частью когорты ВИЧ-1-инфицированных субъектов, которые контролировались в продольном направлении со времени их заражения ВИЧ-1 [14]. Ранее сообщалось, что активность широко нейтрализующего антитела плазмы этого субъекта объясняется, по меньшей мере, двумя особенностями: та, которая нацелена на CD4-BS на gp120 и была эффективной против многих, но не для всех, изолятов, в которых была протестирована плазма, а другая — который не нацеливался на CD4-BS или субъединицу Env gp41 [14]. Вторая специфичность была эффективной против вирусов, которые были естественным образом устойчивы к анти-CD4-BS NAbs этого субъекта. Доступность девяти образцов плазмы из AC053, собранных между 0,82 до 6,85 года после инфицирования, и знание того, когда ответы об общем нарушении нейтрализующего антитела были обнаружены у этого индивидуума, сделали его идеальным примером для изучения эволюции двойных эпитопных особенностей широко нейтрализующего антитела во время заражения ВИЧ-1.

Когда-то между 0,82 и 1,75 годами заражения в крови AC053 проявлялась гликанзависимая нейтрализующая активность. Время появления этой активности совпадает с первоначальным появлением кросс-нейтрализующих антител у этого субъекта. На 0,82 ypi плазма только нейтрализовала SF162 (из 20 тестированных изолятов), а при 1,75 ypi плазму нейтрализовали четыре из 20 изолированных протестированных [14]. Два из этих четырех изолятов были кладом С, а два — кладом Б. Однако в тот момент эффективность нейтрализации была слабой, а ширина нейтрализации была узкой. Кроме того, несколько изолятов, чувствительных к PG9, были устойчивы к нейтрализации этой плазмой. В целом, эти наблюдения подсказывают нам, что гликозависимая нейтрализующая активность в плазме AC053 в раннем развитии не была обусловлена ​​антителами, подобными PG9. Разумеется, можно также утверждать, что в этот момент инфекции начали возникать антитела, подобные PG9, но что их домены VH и VL антител еще не вызывают соматических мутаций, которые необходимы для широкой нейтрализующей способности PG9. В отсутствие выделенных в продольном направлении MAbs из AC053 невозможно напрямую обратиться к этой точке. Более широкие реакции нейтрализации нейтрализующих антител, способные нейтрализовать по меньшей мере 50% тестируемых изолятов (из кладов А, В и С), впервые проявились при приблизительно 3 г / см и были вызваны нейтрализующими антителами против CD4-БС (рис. 6 и [14] ). Как мы подробно обсуждали ранее, эти антагонистизирующие активности против CD4-BS не были эффективны против всех изолятов, которые были восприимчивы к нейтрализации плазмой AC053 [14]. Например, они не эффективны против вирусов CAAN или TRO.11. Даже анти-CD4-BS-нейтрализующая активность плазмы, выделенной позднее в результате инфекции, которая была более широкой и мощной, была неэффективной против этих и других вирусов. При 3 ypi специфичность кросс-нейтрализации, зависящая от присутствия гликана в положении 160, не была очевидна в AC053. Эта вторая поперечно-нейтрализующая специфичность стала очевидной примерно в 4,30 раза. Из-за его зависимости от 160 гликанов, но не от гликанов, расположенных в областях Env, нацеленных на PGT-подобные антитела или 2G12-подобные антитела, мы полагаем, что эта вторая кросс-нейтрализующая специфичность обусловлена ​​PG9-подобными антителами. Мы не считаем, что это связано с PG16-подобными антителами, потому что нейтрализующая активность PG16 не может быть блокирована SF162K160N gp120, тогда как активность PG9 и плазменных антител AC053 эффективно блокируется этим рекомбинантным белком.

Мы использовали два независимых метода, чтобы продемонстрировать наличие специфической к PG9 гликано-зависимой эпитопной специфичности ответа с нейтральным нейтрализующим антителом в AC053. Использование ингибиторов гликозидазы, таких как кифуненсин, для обогащения гликонов с высоким содержанием маннозы, является хорошо известным методом и ранее использовалось для идентификации гликано-зависимых эпитопов, нацеленных на ответы против ВИЧ-антител [26], [29], [51] , Следует отметить, что характер схемы гликозилирования на ВИЧ Env может зависеть от используемых клеток хозяина и условий культивирования [60], [61]. Большинство исследований по ответам на антитела к ВИЧ использовали псевдовирусы, продуцируемые в клеточных линиях, таких как 293T, используемые в этом исследовании. Однако, возможно, что эти вирусы имеют различную структуру N-сцепленного гликозилирования, чем те, которые реплицируются у инфицированных хостов. Следовательно, вирусы, выращенные в Т-клетках, обработанных кифуненсином, потенциально могут иметь различную восприимчивость к нейтрализации, чем те, которые продуцируются клеточными линиями. Несмотря на эти оговорки, исследования с ингибиторами гликозидазы, описанные здесь, обеспечивали воспроизводимые и интерпретируемые результаты, которые согласуются с другой используемой экспериментальной стратегией — истощение с гликопротеином SF162 K160N.

Наши результаты согласуются и распространяются на те, которые недавно были опубликованы Bonsignori и др. [42], что одновременно могут присутствовать две различные широко нейтрализующие специфические антитела, одна против CD4-BS и другая против петли V1V2 (PG9-подобная) у субъекта ВИЧ + с широкой нейтрализацией сыворотки. В этом исследовании не было установлено время относительного появления этих двух различных особенностей. Здесь мы независимо показываем похожие двойственные особенности в другом предмете, но мы также сообщаем, что специфика анти-CD4-BS возникла первой, в то время как специфичность PG9 появилась примерно через 1-2 года. Остается неизвестным, могут ли эти два типа специфики одновременно генерироваться у ВИЧ-инфицированного субъекта и могут ли они быть вызваны одновременно путем вакцинации. В настоящее время у нас нет информации о вирусной последовательности на AC053, чтобы определить, как вирус развился у этого субъекта до и после разработки нейтрализующих антитела против CD4-BS. Цикл V2 позиционируется таким образом, который ограничивает доступность CD4-BS нейтрализующим антителам [62] — [64]. Таким образом, возможно, что в попытке избежать их действия вирус изменил аминокислотную композицию и / или структуру гликозилирования в петле V2, и такими выходными вирусными env-клонами были те, которые стимулировали В-клетки для продуцирования PG9-подобных антител , Мы считаем, что самое раннее развитие гликано-зависимых нейтрализующих специфик помогло в развитии антител, подобных PG9, позже в заражении.

Таким образом, наши исследования поддерживают усилия по выявлению широко нейтрализующих анти-ВИЧ-антител с множественными эпитопными особенностями путем вакцинации. Скорее всего, это будет достигнуто с помощью импульсных протоколов иммунизации, в ходе которых последовательные иммунизации с различными белками Env будут стимулировать развитие широких NAb с различными специфическими эпитопами.

Истощение нейтрализующей активности PG9 с помощью SF162 K160N gp120. PG9 в наивных человеческих сыворотках был истощен 4 последовательными инкубациями с гранулами SF162K160N gp120, как описано в разделе «Материалы и методы». Нейтрализация по незавершенным (сплошные символы и линии) и обедненные (четкие символы и пунктирные линии) PG9 тестировали против вирусов SF162 K160N (оранжевые круги) и REJO (синий квадрат), демонстрируя существенно уменьшенную активность нейтрализации при истощении.

(TIF)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Мы признаем доктора. Sather и McGuire для многих полезных комментариев и предложений. Захари Колдуэлл предоставил очищенный рекомбинантный Env, а доктор Маркус Альтфельд предоставил образцы плазмы из AC053. Это исследование является частью докторской диссертации И.М. в Отделе глобального здравоохранения в Вашингтонском университете.

rupubmed.com

Консультирование связанное с ВИЧ - Все о медицине

Тестирование на антитела к ВИЧ это не то же самое, что профилактика ВИЧ. Со времени введения в практику тестирования на антитела к ВИЧ некоторые комментаторы, к сожалению, интерпретировали тест таким образом, как будто получение результата анализа было необходимым и достаточным, чтобы гарантировать, что человек принял условия безопасного секса.

Во всем мире исследования показали, что не существует чет­кой или универсальной связи между осведомленностью о своем ВИЧ-статусе (наличии или отсутствии антител к ВИЧ) и следованием правилам безопасного секса. Мы знаем, что единственное, что связывает между собой тестирование на антитела к ВИЧ и принятие правил безопасного секса — это качественное до- и послетестовое консультирование, а не результат теста сам по себе. Более того, такое непонимание цели тестирования на антитела заключает в себе риск отвлечения внимания от жизненно важной потребности каждого постигать правила безопасного секса.

Хороший консультант может использовать возможность консультирования по безопасному сексу и безопасному употреблению наркотиков при тестировании на антитела.

Консультантам придется давать советы и оказывать поддержку людям на самых разных стадиях. Некоторым людям надо будет впервые задуматься о принятии для себя правил безопасного поведения. Другим понадобится поддерж­ка, чтобы продолжать следовать этим правилам.

Процедура тестирования

Подробное описание процедуры тестирования очень важно для получения осознанного согласия. Консультанту необходимо черкнуть следующее:

• Решение о тестировании не обязательно принимать немедленно.

• Результаты исследования будут готовы не сразу. Период ожидания может быть очень стрессовым, и наилучший способ уменьшить этот стресс — пройти тестирование в тот же день с получением результатов в ближайшие дни. Од­нако за счет этого не следует сокращать время на консультирование или обдумывание.

• Результаты всегда должны выдаваться лично в руки и никогда по телефону или по почте.

• Кто еще узнает о результате, какие данные будут храниться в лаборатории? Будет ли поставлен в известность участковый врач клиента?

Конфиденциальность

Принцип конфиденциальности нельзя недооценивать.

Подробное рассмотрение конфиденциальности должно включать в себя обсуждение мер защиты конфиденциальности клиента при его посещении лаборатории, особенно венерологической клиники, а также обсуждение того, как человеку сохранять конфиденциальность в течение длительного времени.

Многие люди не скрывают факта тестирования, ожидая, что оно даст отрицательный результат. Это может создать серьезные про­блемы для соблюдения конфиденциальности, если результат окажется положительным.

Сообщать ли партнерам о результате теста? Проводит ли клиника политику поощрения партнеров информировать друг друга? Как это можно сделать?

Каждый клиент должен пройти послетестовое консультирование, посетив консультанта столько раз, сколько потребуется, независимо от того, положителен результат или отрицателен.

Оценка риска

В дотестовом консультировании большую роль играет определение степени риска, поскольку многие люди, никогда не подвергавшиеся риску заражения, стремятся пройти тестирование на антитела к ВИЧ. Ожидание теста способно вызвать психологические страдания, которые можно в значительной мере облегчить в ходе консультирования на предмет возможного риска заражения в прошлом.

Согласно отзывам пациентов, информированность о собственном ВИЧ-статусе мало влияет на их поведение, в то время как консультирование о безопасном сексе и употреблении наркотиков влияет значительно. Поэтому беседа с па­циентом об определении степени риска может быть очень важным средством привлечения его внима­ния к вопросам безопасного секса и употребления наркотиков. К тому же дотестовое консультирование поможет избежать напрасного расходования средств на тестиро­вание людей, не подвергавшихся риску заражения ВИЧ,

Для того, чтобы делать правильные выводы о степени риска, которому подвергался человек в прошлом, и давать полезные советы обеспокоенным людям, необходимо хорошо знать механизмы передачи ВИЧ-инфекции. Мужчинам бывает трудно признаться в наиболее рискованных действиях, таких как опасный секс с другими мужчинами или использование общих шприцев при употреблении наркотиков. Консультанту нужно найти деликатный подход к пациентам, чтобы реалистично оценить риск, которому они подвергались.

Для некоторых женщин нетрудно признаться в рискованном поведении (например, в опасной половой близости с мужчинами), но гораздо труднее признать, что их партнеры могли подвергаться риску заражения, например употреб­лять наркотики. Поэтому женщинам, даже в располагающей и конфиденциальной обстановке, труднее пра­вильно оценивать степень риска. Также трудно женщинам бывает признаться, что их риск мог быть обусловлен анальным сексом, из-за табу, существующего в обществе на этот счет.

Страх перед СПИД

При консультировании в связи с обследованием на антитела к ВИЧ нужно быть готовым к встрече с различными страхами перед СПИД, зачастую необоснованными. Существует опасность навешивания на таких людей ярлыков «паникеров» или «паникеров» или «невротиков». Вот некоторые примеры таких страхов:

1. Страх по поводу половых контактов, не являвшихся рискованными, например половая близость с проституткой с использованием презерватива, который остался целым. Человек стремится пройти тестирование «на всякий случай».

2. Страх по поводу секса с незначительным риском, особенно орального секса.

3. Страх по поводу маловероятных событий, которые могли привести к заражению, например, человек боится, что ему ввели инфицированную кровь, пока он спал.

4. Страх из-за сомнений в точности результата теста, что приводит к просьбам этот тест повторить.

Это обычно связано с другими видами страха, упомянутыми выше. Первый и второй варианты страха вероятно, основаны как на чувстве вины, так и на недостаточной информированности о путях передачи инфекции. Часто у клиентов нет возможности обсудить с кем-либо волнующие их проблемы секса.

С третьим вариантом страха справиться гораздо труднее, т.к. он в основе своей абсурден. Не было зарегистрировано случаев ВИЧ-инфекции в результате введения крови так, чтобы человек не знал об этом, но эта информация вряд ли убедит такого человека и рассеет его страхи. Любой человек с такой формой боязни нуждается в опытном консультанте или психотерапевте, чтобы выявить первопричину своего страха. Это единственная форма страха, которую можно назвать фобией.

В случаях с фобиями успешно применяется психотерапия, чтобы помочь людям избавиться от навязчивых страхов относительно ВИЧ-инфекции. С этими страхами нельзя справиться в ходе обычного дотестового консультирования или давая советы по телефону. Лучшим решением будет направление такого пациента к психологу-клиницисту или консультанту, специализирующемуся на случаях с фобиями. Однако направление к психологу-клиницисту даст положительный результат лишь в том случае, если психолог достаточно хорошо информирован о ВИЧ-инфекции. Слишком часто люди, направляемые к психологам за помощью, обнаруживают, что те дают им противоречивую инфор­мацию о ВИЧ, что только ухудшает ситуацию.

Четвертая форма страха часто связана с другими его вариантами. Например, тот, кто испытывает чувство вины из-за половой связи с другим мужчиной или из-за секса «на стороне», может добиваться повторных тестов, чтобы получить подтверждение правомерности своих действий и убедиться, что ничего страшного не случилось.

С другой стороны, это может быть связано с недостатком информации о ВИЧ и тестировании. Все это может сильно огорчать консультантов, т.к. повторное тестирование подрывает доверие к их советам. Вот почему для консультантов очень важно постоянно знакомиться с новейшими данными о механизмах передачи и тестировании на ВИЧ и быть в состоянии четко объяснить, почему людям следует полагаться на эти данные.

Все эти формы страхов могут сопровождаться стойкими и убедительными симптомами, которые усиливают страхи и заставляют пациента приходить к консультанту снова и снова. Эти симптомы нередко имеют другую физическую причину, совершенно не связанную с ВИЧ-инфекцией, и, если консультант будет убеждать пациента в том, что это психосоматические (внушенные) симптомы, это не принесет пациенту никакого облегчения, т.к. его страдания могут быть вполне реальными.

Особенности консультирования мужчин-гомосексуалистов Прохождение ВИЧ-теста может являться предварительным условием перед тем, как согласиться на рискованный секс во взаимоотношениях с партнером. Эта договоренность опирается на соглашение о том, что никто из двух партнеров не будет иметь рискованного секса «на стороне», и на соглашение о том, что является приемлемой сексуальной практикой на стороне. Например, один из партнеров может сомневаться относительно безопасности орального секса, а другой — нет.

Такого рода разногласия могут вызвать сильное беспокойство и напряжение во взаимоотношениях. Важная задача послетестового консультирования — помочь обоим партнерам в решении подобных проблем.

Консультирование пар

Может создать проблемы для конфиденциальности в отношении тестирования на ВИЧ. Например, один из партнеров может не рассказать другому о некоторых деталях из своего сексуального прошлого. Все же необходимо поощрять пары приходить на консультирование вместе после отрицательного или положительного результата, чтобы убедиться, что они оба достигли понимания последствий этого результата для их взаимоотношений.

Некоторым геям и бисексуалам, особенно начинающим, было бы полезно разъяснить, что к тесту на антитела к ВИЧ не следует относиться как к обычному исследованию в одном ряду с анализами на сифилис и гепатит В. Превращение тестирования на ВИЧ в рутинную процедуру может психологически травмировать некоторых геев. Под этим они могут подразумевать неизбежность развития сероконверсии у гомосексуалистов, что ведет к подсознательному фатализму.

Для других геев тестирование на ВИЧ может превратиться в повторяющуюся процедуру, когда человек получает отрицательный результат после рискованного секса, какое-то время практикует безопасный секс, а затем снова возвращается к опасному сексу. Поскольку результаты тестов оказываются отрицательными, это может привести к утрате должного внимания к проблеме безопасного секса. Такие люди могут считать себя обладателями загадочного иммунитета к ВИЧ-инфекции, либо полагать, что их инфицирование — лишь дело времени, пасуя перед трудностями поддержания практики безопасного секса.

В таких ситуациях тестирование не помогает им решить проблему собственной защиты на будущее.

Многие люди хорошо знакомы со всеми аргументами за и против тестирования на ВИЧ и многое знают о ВИЧ-инфекции, но при этом они могут длительное время воздерживаться от тестирования, приняв для себя решение о том, что знать собственный ВИЧ-статус необязательно.

Для многих, однако, потребность знания может перевесить желание оставаться в неведении относительно своего ВИЧ-статуса. Это может произойти вследствие вступления в связь с ВИЧ-позитивным или ВИЧ-негативным партнером, с которым возникает дискуссия о желательности рискованного секса. Это также может быть следствием получения новой информации о лечении бессимптомной ВИЧ-инфекции или из-за беспокойства о своем здоровье в целом.

Во всех таких случаях консультант должен признать, что это чувство неуверенности может парадоксальным образом помогать достижению безопасности и что диагноз ВИЧ-инфекции может вызвать такой же сильный шок у хорошо информированного человека, как и у того, для кого этот диагноз, как гром среди ясного неба.

Особенности консультирования женщин

Женщины могут испытывать затруднения в определении степени риска. Большинство из них, имея рискованные половые контакты с мужчинами, зачастую затрудняются в оценке риска заражения ВИЧ.

У каждой женщины, живущей с ВИЧ/СПИД своя история. Многие из них не знали, что их мужчины-партнеры вели опасный образ жизни, например, вступая в половые связи с другими мужчинами или употребляя инъекционные наркотики. Если партнер женщины не попадает ни в одну из указанных категорий, это не значит, что она не подвергается риску заражения. Она может не знать о его рискованной жизни в прошлом, или партнер отрицает свое рискованное поведение. Таким образом, очень важно не экономить время на обсуждении возможности получения положительного результата теста женщинами, казалось бы, с минимальным риском заражения.

Консультанту следует тщательно рассмотреть с клиенткой стратегию безопасного секса. Следует ли она ей сейчас? Есть ли у нее свой хороший или печальный опыт в этом отношении? Испытывает ли она какие-либо дополнительные трудности, такие как сложности в применении контрацептивов (например, пероральных контрацептивов), или подвергается оскорбительному и агрессивному обращению со стороны мужчины-партнера?

Также тщательно нужно проверить обоснованность тестирования клиентки. Некоторые женщины могут стремиться пройти тестирование потому, что подозревают наличие факторов риска у партнера (например, его неверность). Легко ли ей будет иметь дело с основной проблемой, принимая правила безопасного секса или продолжая следовать им, если тест даст отрицательный результат?

Стремление пройти обследование на ВИЧ может быть связанным с желанием иметь детей. Все женщины детородного возраста (и всех сексуальных ориентации) должны получить информацию о ВИЧ и беременности. Она должна включать в себя описание риска передачи инфекции от матери плоду, возможностей контрацепции и планирования беременности для уменьшения риска заражения и детальное рассмотрение всех аспектов рождения ребенка.

Если женщина стремится пройти обследование на антитела к ВИЧ, чтобы знать свой статус перед зачатием, важно, чтобы будущий отец ребенка также принял решение пройти тест. Все больше женщин проходят тестирование во время беременности. На этом этапе важно подробно рассмотреть все потребности женщины и убедиться, что ее никто не принуждает к тестированию.

Особенности консультирования наркоманов

Только на том основании, что клиент употреблял инъекционные наркотики в прошлом или употребляет их сейчас, нельзя делать вывод о том, что он обязательно подвергается риску заражения ВИЧ. На первом этапе консультанту необходимо тщательно проанализировать специфику поведения клиента прежде, чем прийти к заключению о риске, связанном с наркотиками или сексом.

Важно подкрепить стратегию, уже используемую клиентом, в отношении безопасного секса и менее опасного употребления наркотиков. Вероятно, будет легче развивать существующие стратегии, чем вводить совершенно новые.

Возможно, клиент принял наркотик или слишком пьян для восприятия информации и лучше было бы перенести консультацию на другой день?

Консультант должен проанализировать мотивы клиента для тестирования. Он пришел на тестирование под чьим-то давлением или это его свободный выбор? Давление может исходить от партнеров или семьи. Эта проблема особенно остро стоит в тюрьмах и больницах.

Не подтолкнул ли его к этому реабилитационный центр? Если да, то почему? Насколько постоянно клиент употребляет наркотики? Как положительный результат теста может повлиять на употребление им наркотиков? Не начал ли клиент метадоновую программу, не начал ли он сокращать прием наркотиков? В этом случае лучше всего дать ему возможность стабилизировать новый режим прежде, чем проходить тестирование.

Не был ли клиент недавно включен в программу детоксикации или реабилитации? Было бы лучше дать ему возможность адаптироваться к этим переменам перед тестированием.

Для многих людей информация, получаемая в ходе дотестового консультирования, может показаться сложной и запутанной, сопряженной с нервозностью и употреблением алкоголя или наркотиков. С целью уменьшить стресс часто бывает полезным подкрепить устную информацию рисунками для ключевых моментов, предложить клиенту записать основные пункты или воспользоваться готовой листовкой.

Организации, работающие с наркоманами, склонны направлять клиентов на тестирование. Положительный результат может помочь людям получить жилье, доступ к со­циальным выплатам и оборудованию, что значительно облегчает им жизнь с ВИЧ. Консультанты также должны быть готовыми помочь ВИЧ-отрицательным наркоманам получить доступ к этим материальным благам, чтобы повысить важность безопасного поведения.

Особенности консультирования представителей этнических меньшинств

Довольно трудно распределить по категориям данные о представителях этнических меньшинств потому, что они могут попадать во все основные группы риска. Однако имеется ряд ключевых проблем. Особенно важна проблема языка. Эти люди могут нуждаться в услугах переводчиков, а в отсутствие таковых они испытывают трудности в понимании того, что им рассказывают о тестировании на ВИЧ. В то же время, некоторые клиенты могут быть особенно чувствительны к присутствию третьего лица — переводчика из их общины, особенно, если эта община маленькая.

Консультирование с переводом не должно проводиться с обычным переводчиком. Это должен быть человек, обладающий знаниями о ВИЧ-инфекции и понимающий важность соблюдения конфиденциальности.

До- и послетестовое консультирование, вероятно, особенно важно для людей, согласно обычаям которых, устная информация ценится выше печатной — например, для выходцев из Вьетнама.

Мужчинам может быть трудно беседовать с женщинами-консультантами и наоборот, особенно для выходцев из мусульманских стран.

Представители различных культур также по-разному понимают категории здоровья и болезни, у них совершенно другие традиции медицины. Особенно важно учитывать национальный опыт, касающийся СПИД, если клиенты — вы­ходцы из африканских стран.

Диагноз СПИД может приводить к тому, что больных клеймят, отвергают и изгоняют из общества, как это часто случается во многих африканских странах. Вследствие этого люди страдают от подавленности, изоляции и страха не только потому, что они больны, но и изза реакции окружающих.

Люди из африканских стран после постановки диагноза ВИЧ-инфекции в Великобритании нередко делают вывод о своей неизбежной смерти в ближайшее время, поэтому они просто запираются в своих домах. Особенно важно убедиться в том, что клиент понимает разницу между ВИЧ и СПИД, и информировать его о доступных службах, могущих оказать поддержку и предоставить информацию. Для женщин из этнических меньшинств нужно особо выделять вопросы беременности и зачатия потому, что в ряде культур деторождение является проблемой огромной важности.

Консультанту необходимо поднять вопросы, касающиеся планов на будущее, с ВИЧ-инфицированными матерями на случай их смерти или неспособности позаботиться о детях из-за тяжелой болезни. Кто будет заботиться об их детях? Если речь идет о большой семье, что им расскажут о ВИЧ-инфекции и как это повлияет на обращение с детьми?

Мужчины-гомосексуалисты и бисексуалы из этнических мень­шинств могут испытывать большую озабоченность относительно последствий положительного результата тестирования для отношений в их семьях потому, что прочность семейных связей зачастую имеет очень большое значение. Мужчинам из этнических меньшинств бывает трудно признаться в своей бисексуальности даже самим себе, не говоря уже о женщинах-партнерах.

Многие представители этнических меньшинств стремятся пройти тестирование на ВИЧ только после появления симптомов. Частично это происходит из-за недостатка информации о ВИЧ-инфекции и СПИД, особенно в общинах беженцев, но также и из-за ограниченного доступа к службам здравоохранения.

Послетестовое консультирование

Положительный результат

Любые плохие новости сообщать трудно, и эта — не исключение. Каждый человек реагирует по-своему. Можно поддаться соблазну ободрить клиента, предоставив ему дополнительную информацию, вместо того, чтобы посочувствовать его гневу, страху, печали или панике. Почти каждый, кому ставят диагноз ВИЧ-инфекции, испытывает сильное потрясение, что затрудняет немедленное восприятие сложной информации, например, касающейся дальнейшего развития болезни,

Важно увидеться с этим клиентом снова в ближайшее время и запланировать его последующие визиты. Нуждается ли он также в визите к врачу? Необходимо дать ему телефоны линии помощи и информацию о том, как он может связаться с консультантом в дальнейшем. Неплохо было бы дать клиенту какую-то информацию в письменном виде. Лучше не вдаваться сразу в подробности возможного негативного воздействия ВИЧ-инфекции до того, как он усвоит первичную информацию.

Нужно проверить, знает ли клиент, к кому он может обратиться в случае срочной необходимости. Если клиент пришел с партнером или другом, узнать, хочет ли он, чтобы разговор вели с ними обоими.

Отрицательный результат

Огромное облегчение, которое испытывает человек при получении отрицательного результата, может помешать ему вникнуть в то, что ему говорят. Неплохо было бы пригласить его на хотя бы еще одну консультацию, отрицательный результат не дает никаких гарантий на будущее. Он не означает, что человек автоматически перейдет к практике безопасного секса или менее опасного употребления наркотиков. Роль консультанта в этой ситуации жизненно важная.

Нужно помнить, что эмоциональное состояние клиента все еще может требовать консультирования. Например, у ВИЧ-негативного гомосексуалиста есть друзья, живущие с ВИЧ или СПИД, из-за чего он может испытывать противоречивые, и болезненные эмоции. Известно, что такие эмоции могут провоцировать рискованное поведение.

Выбор лечения для тех, кому недавно поставлен диагноз В свете последних достижений в области лечения ВИЧ-инфекции крайне важно во время консультирования после постановки диагноза обсудить с клиентом возможные варианты его лечения, даже если он об этом не просит.

Вскоре после постановки диагноза людям нередко предлагают воспользоваться возможностью, чтобы обсудить варианты лечения с врачом. Этот подход может быть разным в различных центрах в зависимости от того, как быстро после постановки диагноза будут проделаны дополнительные тесты (тест на вирусную нагрузку, подсчет CD4+). Эта информация является принципиально важной для обсуждения, которое будут проводить с клиентом консультант или врач в первые месяцы после получения им положительного результата теста.

Можно рассмотреть много вариантов ситуаций на примерах, предложенных врачами или людьми, живущими с ВИЧ.

Немедленное начало лечения

У некоторых пациентов могут быть показания к немедленному началу антиретровирусного лечения в расчете на положительный эффект. Это зависит частично от состояния их здоровья, а частично от мнения врача, проводившего тесты. Например, некоторые врачи настоятельно рекомендуют лечение тем, кто подвергся риску заражения совсем недавно или находится в процессе сероконверсии.

При таких обстоятельствах важно, чтобы пациент понимал, что эти предложения носят экспериментальный характер. Хотя показано, что лечение в раннем периоде инфекции у большинства пациентов снижает вирусную нагрузку до неопределяемого уровня, количество наблюдений остается небольшим, а процент прекративших лечение из-за его непереносимости колебался от 5 до 50 в различных исследованиях. Кроме того, примерно 5 % тех, кто начал антиретровирусную терапию на этой стадии, не в состоянии соблюдать предписанную дозировку.

Пока неясно, как долго будет сохраняться эффект, достигнутый таким лечением. Тщательное соблюдение предписанной дозировки является главным определяющим фактором для достижения благоприятного и продолжительного результата лечения. Пациентам необходимо понять важность строгого соблюдения схемы приема назначаемой комбинации антиретровирусных препаратов до того, как приступать к лечению.

Врачи вряд ли будут рекомендовать очень раннее начало лечения (в ближайшие дни), разве что у пациента первичная стадия инфекции или появились симптомы заболевания.

Точность тестирования на ВИЧ

Положительный результат теста обычно очень точен, поскольку тестируются две пробы крови. В целом кровь тестируется несколько раз различными тест-системами, чтобы убедиться, что она содержит антитела к ВИЧ. Крайне мала вероятность того, что результат может оказаться ложноположительным.

Отрицательный результат так­же надежен, если клиент выждал, по крайней мере, три месяца после того, как он подвергся риску заражения.

Ложноположительные результаты

Есть две причины ложноположительных результатов: перекрестные реакции антител и ошибка человека. Следует подчеркнуть, что такие результаты очень редки.

Иногда в крови могут присутствовать антитела, не имеющие отношения к ВИЧ, которые, тем не менее, могут обусловить положительный результат теста. В первые годы после введения в практику тестирования на ВИЧ такие ложноположительные результаты встречались нередко. Было замечено, что некоторые заболевания вызывают Ложноположительные результаты.

В настоящее время это случается очень редко поскольку используется много различных тест-систем. Перекрестные реакции случаются в отдельных тест-системах, но не повторяются в других. Обычно в лабораториях используют три различных тест-системы для подтверждения положительного результата.

Люди могут ошибаться при выполнении любых анализов. Поэтому взятая на исследование кровь разделяется на две порции с тем, чтобы повторить тест еще раз, если одна из порций даст положительный результат. Это позволяет уменьшить вероятность положительного результата по причине ошибок персонала лаборатории.

Неопределенные, или слабоположительные, результаты

Неопределенным называют результат, который показывает слабоположительную реакцию либо по причине неизвестных перекрестных реакций антител, либо из-за технической ошибки, либо по причине очень низкого содержания антител к ВИЧ в сыворотке крови.

В последнем случае слабоположительный результат может отмечаться вскоре после заражения. Так происходит потому, что вирус состоит из различных белков, и антитела вырабатываются к каждому из белков отдельно. При ВИЧ-инфекции некоторые белки появляются в крови гораздо раньше других. Если в крови появляются антитела лишь к одному из многих белков, это может приводить к слабоположительному результату.

Могут ли некоторые заболевания быть причиной ложноположительных результатов?

В редких случаях — да. Вакцинация против гепатита В и гриппа может временно повысить вероятность ложноположительных результатов. Такой же эффект может иметь введение иммуноглобулина против гепатита В и противостолбнячного иммуноглобулина. Нет никаких данных о том, что грипп может быть причиной ложноположительного результата. Ложноположительные результаты также наблюдались у небольшого количества больных волчанкой, кистозным фиброзом, хроническими болезнями печени и у больных, пользующихся «искусственной почкой».

www.medline.uz


Смотрите также