Иммунологическая несовместимость крови матери и плода. Определение титра антител


Антитела определение титра - Справочник химика 21

Рис. 40. Определение титров антител в асците. Рис. 40. Определение титров антител в асците.
    Серологическое исследование. Антитела в сыворотках крови больных накапливаются в достаточном количестве ко 2-й нед заболевания. Для их обнаружения используют непрямую РИФ, ИФА, РСК, РНГА. Определение нарастания титра антител при изучении парных сывороток позволяет считать диагноз обоснованным. [c.240]

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРА ПРЕЦИПИТИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ ПО РАЗВЕДЕНИЮ АНТИГЕНА [c.121]

    Кратность разведений антигена определяется той точностью, с которой должен быть определен титр антител можно приготовить десяти-, пяти-, трех- и двукратные разведения антигена. [c.124]

    В некоторых реакциях преципитации количественный анализ образовавшегося преципитата дает абсолютные величины содержания антигена или антител (метод количественной преципитации). Другие реакции позволяют получать лишь относительные величины (определение титра). [c.17]

    Определение титров антител [c.498]

    Область применения. Определение титра антител в иммунных сыворотках. [c.123]

    Титр антисыворотки сильно зависит от концентрации антигена, используемого дл я тестирования и от способа его определения. Например, одна и та же сыворотка может иметь титр 100 в тесте иммунопреципитации и 100 000 в тесте иммуноферментного анализа. Поэтому при тестировании сыворотки и определении титра лучше всего применять тот же метод, что и при анализе, а концентрацию антигена выбирать близкую к минимальной в том диапазоне, который выбран для анализа. Кроме того, следует учитывать, что в иммуноферментном анализе используют как гомогенные, так и гетерогенные методы определения концентрации антигена, которые могут сильно отличаться по структуре образующихся иммунных комплексов. В частности, в твердофазных методах вероятность образования циклических комплексов антиген — антитело значительно меньше, чем в гомогенных, а следовательно, и Наблюдаемая аффинность антител в обеих системах будет разная. [c.158]

    Определение титра нейтрализующих антител по уменьшению числа бляшек [c.88]

    ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТРОВ АНТИТЕЛ В АСЦИТНЫХ ЖИДКОСТЯХ [c.321]

    Реакция Николаева основана на идентификации величины белковой корпускулы по способности выпадать в осадок при определенной концентрации сульфата аммония. Известно, что чем больше относительная молекулярная масса белковой молекулы, тем при меньшем насыщении соли она выпадает в осадок. Антитела и антигены любой специфичности и природы будут иметь корпускулы меньшей относительной молекулярной массы, чем образуемые при их взаимодействии иммунные комплексы, состоящие не менее чем из 2 молекул. Следовательно, выпадение белков в такой системе будет происходить при добавлении меньшего количества химического реагента, чем в случае, когда реакция антиген — антитело не произойдет. В связи с этим учет реакции основан на сравнении объемов раствора сульфата аммония, необходимого для появления заметной мути (т. е. начала выпадения глобулинов) в опытных и контрольных пробирках. Достигается это повторными добавлениями равных объемов соли (по 0,1 мл, а затем по каплям) и регистрацией мути (визуально или с помощью нефелометра). Если при достижении некоего объема раствора соли муть появится лишь в опытных пробирках, но будет отсутствовать в контрольных, реакцию считают положительной, а разведение сыворотки принимают за титр. В реакции используют сыворотки и их разведения в объеме 1 мл (реже 0,5 мл), а антиген в объеме 0,1 мл. Добавление сульфата аммония начинают через 2—3 мин после тщательного смешивания антигена с сывороткой. [c.247]

    Для исследования реактивности организма, подвергающее гося воздействию различных промышленных ядов в низких концентрациях, наибольшей популярностью пользуются различные модификации фагоцитарной реакции нейтрофилов кро-ви. Довольно часто применяют и определение титра иммунных антител. В литературе можно встретить также экспериментальные исследования, в которых изучались тесты на реактивность количество комплемента, пропердина, интен-сивность бактерицидных свойств сыворотки крови титры лизоцима в слюне и тканях, барьерные функции крови и ели- [c.281]

    Было изучено связывание гаптена антителами при различном их соотношении и показано, что меченные иминоксрмьными сво-бодпыдгп радикала.ми гаптены могут быть использованы для определения титра антител. [c.172]

    Поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках для определения титра специфических антител в сыворотке, полученной от кролика на предыдущем занятии. [c.109]

    При использовании антигенов, полученных с помощью хроматографических методов и поэтому, по крайней мере частично, растворимых, смешайте 0,2—2,0 мг интактного гибридного белка, растворенного в 1 мл физиологического раствора или PBS с 1,25 мл полного адъюванта Фрейнда и получите гомогенную эмульсию, как описано выше. Сделайте зафиксированному кролику подкожные инъекции в несколько мест. Повторите инъекции 0,2—1,0 мг антигена в неполном адъюванте Фрейнда на 14-й и 21-й день и с 28-го дня начинайте брать кровь. Для определения титра антител берите кровь еженедельно и повторите введение 0,2—1,0 мг антигена, когда титр антител начнет уменьшаться. После получения достаточного количества антисыворотки, пока титр антител остается достаточно высоким, возьмите под анестезией кровь из сердца кролика. [c.163]

    Несмотря на то что методы преципитации в геле занимают значительное место в изучении и количественном определении антигенов, а также широко применяются для контроля специфичности и определения титра преципитирующих антител, предел чувствительности данных методов составляет около 5 мкг/мл, и их невозможно использовать для количественного определения антигенов небольшой мол. массы, которые образуют только нерастворимые комплексы. По этой причине возникла необходимость в разработке альтернативных методов количественного определения антигенов. В 1945 г. Кумбс и сотр. [c.12]

    Какой бы метод детекции антител ни был выбран, его надо отработать до начала получения гибридом, так как потом на это не будет времени. Основные требования к методу детекции — надежность и быстрота. Проверке должно подвергаться сразу большое число проб. Точное количественное определение титра антител на данной стадии не требуется. [c.111]

    Определение титра антивирусных антител в опытах по защите мышей [c.85]

    Ниже приведены иммунологические методы обнаружения специфических антител к вирусу краснухи, особенно эффектив-I ные для диагностики заболевания плода и определения титра [c.313]

    Серологическая диагностика острых и хронических стрептококковых инфекций. При некоторых острых, но главным образом при хронических стрептококковых заболеваниях (хронический тонзиллит, ревматизм, нефрит) больные, как правило, длительное время получают большие дозы антимикробных препаратов сульфаниламидов, антибиотиков. Выделение же возбудителя из слизистого отделяемого носоглотки, мокроты, гноя ран, абсцессов и крови представляет большие трудности. Поэтому проведение трудоемких бактериологических исследований на стрептококки в таких случаях оказывается безрезультатным. В то же время проведение полного серологического анализа с обнаружением в крови стрептококкового антигена и определение титра стрептококковых антител может оказать большую помощь в установлении этиологического фактора болезни. [c.180]

    Титрование исследуемой сыворотки. Схема постановки реакции агглютинации для определения титра антител приведена в табл. 16. Сначала готовят основное разведение сьшоротки, которое в зависимости от титра может составлять 1 50, 1 100 или 1 1000. Затем делают серию разведений сыворотки путем последовательного переноса 1 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда. Из последней пробирки 1 мл разведенной сыворотки удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль антигена) вносят [c.109]

    Присутствие АОК в селезенке животных после иммунизации можно выявить путем анализа бляшкообразования (см. гл. 29). Как установлено. АОК в этом органе появляются примерно за сутки до того, как антитела в доступных для определения титрах обнаруживаются в сыворотке крови. [c.211]

    Реакция нейтрализации при исследованиях с вирусами полиомиелита применяется в двух основных модификациях. В одном случае с ее помощью производят идентификацию выделенных вирусов, в другом — ее используют для определения титров антител в сыворотках. [c.137]

    Определение .v-реактивного белка (со специфической иммунной сывороткой в модификации П. М. Пашинина [5]) на фоне 43 дней отравления показало наличие его у подопытных кроликов. Изучение динамики содержания .v-реактивного белка на фоне острофазовой реакции , вызванной тетравакциной, показало, что его уровень выше, чем у контрольных животных. Определение титра антител после первой (на фоне 43 дней отравления) и второй (на 112 день) вакцинации показало замедленную выработку О- и Н-агглютининов у подопытных кроликов, причем различия были более выраженными после повторной вакцинации. Очевидно, вследствие нарастающего действия продуктов термоокислительной деструкции пентапласта изменения реактивности организма кроликов усиливались. [c.157]

    Отбор высокоактивных иммунных антисывороток, определение конечного и рабочего титра Оценка аффинности и концентрации фракции высокоаффинных антител [c.158]

    Определение титра аитисыворотки. Титр — это эффективная величина, характеризуюи ая связывающую способность антител, зависящая от их концентрации и аффинности. Абсолютное значение титра также зависит от метода и условий проведения эксперимента (температуры, времени, pH и т. д.) и от начальной концентрации свободного антигена. [c.157]

Рис. I. Схема процедуры слияния клеток. Показаны три этапа, на которых используется иммунофермеитиый метод для выявления антител исследование первичных культур, исследование клонов к определение титра асцитной жидкости. Рис. I. Схема процедуры слияния клеток. Показаны три этапа, на которых используется иммунофермеитиый метод для выявления антител исследование <a href="/info/1391764">первичных культур</a>, исследование клонов к <a href="/info/71163">определение титра</a> асцитной жидкости.
    Диагностические эталонные типоспецифические сьшоротк против вщ уса клещевого энцефалита и других арбовщ>усов Получены путем иммунизации животных определенными арбо вирусами или используются сыворотки людей, переболевши соответствующей арбовирусной инфекцией. В каждом случш предварительно устанавливают титр антител. [c.245]

    Принципиальное различие этих этапов заключается в следую-ш,ем при определении титра исследуют связывание выбранной концентрации антигена при различных разведениях антисыворот-ки. При определении аффинности и концентрации антител исследуют связывание антисыворотки (в определенном разведении) с различными концентрациями меченого антигена. При изучении специфичности антисыворо ток в соответствуюш,ем разведении и при постоянной концентрации меченого антигена добавляют различные концентрации перекрестно реагируюш,его антигена. [c.157]

    Определение титра компонентов системы a-ELISA. Удоб-йее всего титровать компоненты системы с помощью модифицированного варианта методики, использованной для получения данных табл. 14-3. В такого рода предварительных тестах вполне можно обойтись лишь ограниченным набором разведений Ig. В их число должны войти разведения, соответствующие минимальному и максимальному количествам специфических антител, которые предстоит определять в данной системе, например 0,05 и 100 нг на лунку. Целесообразно включить в тест также два промежуточных разведения. [c.219]

    При различных инфекционных заболеваниях накопление специфических антител в сьшоротке вдет с неодинаковой скоростью и достигает разных величин. В связи с этим принято говорить о диагностическом титре антител—той величине титра, при которой можно с уверенностью поставить серологический диагноз заболевания в определенный его период. При многих инфекциях наиболее надежным диагностическим признаком считается не наличие антител, а нарастание их титра в динамике заболевания, которое выявляется путем постановки серологических реакций с парными сьшоротками, т. е. полученными дважды от одного и того же больного. [c.108]

    Иммуноанализ антител. 1. Антиген в солевом растворе инкубируют на пластиковой подложке или в пробирках, в результате чего небольшое его количество адсорбируется на поверхности пластика. 2. Свободный антиген удаляют путем отмывания. (Подложку затем можно обработать избытком постороннего белка, чтобы предотвратить последующее неспецифическое связывание белков.) 3. Добавляют исследуемые антитела, которые связываются с антигеном. 4. Несвя-завшиеся белки удаляют отмыванием. 5. Антитела определяют при помощи меченого лиганда. Лигандом может служить, например, стафилококковый белок А, который связывается с F -областью IgG чаще используют другие антитела, специфичные по отношению к исследуемым антителам. Применяя лиганд, который связывается с антителами определенного класса или подкласса, можно дифференцировать изотипы антител. 6. Несвязанные антитела удаляют отмыванием. 7. Определяют связавшуюся метку. Типичная кривая титрования представлена внизу. С повышением количества антител интенсивность сигнала возрастает линейно от фонового значения до уровня плато. Титр антител можно определить правильно лишь в линейной области. Уровень плато, как правило, в 20-100 раз выше фонового. Чувствительность метода обычно составляет приблизительно 1-50 нг специфических антител в 1 мл. Специфичность метода можно проверить, добавив свободный тест-антиген в повышающихся концентрациях к исследуемым антителам на зтапе (3). Антиген связывается с антителами и блокирует их соединение с антигеном, фиксированным на подложке. Добавление возрастающих количеств свободного антигена снижает интенсивность сигнала. [c.534]

    Псевдоаллели. Гены, проявляющиеся как истинные аллели в тестах на аллелизм, но разделяющиеся в процессе кроссинговера не занимают гомологичной позиции в хромосоме (например, С4). Псевдогены. Гены, структурно сходные с обычными генами, но неспособные экспрессироваться с образованием функционально активных продуктов (например, J/сЗумыши). Радиоиммуноанализ (РИА). Ряд высокочувствительных методов для определения титра антигена или антител с использованием радиоактивно меченных реагентов. [c.562]

    Как уже отмечалось, картина преципитации, получаемая при иммуноэлектрофорезе, сильно зависит от свойств иммунной сыворотки. Для каждого компонента смеси антигенов существует определенный диапазон концентраций, в котором получаются хорошо сформированные четкие линии преципитации (зона эквивалентности). В многокомпонентных смесях концентрация отдельных антигенов может различаться в широких пределах. Концентрация (титр) антител в применяемой иммунной сыворотке также может варьировать в значительной степени. Таким образом, вполне возможна ситуация, при которой зоны эквивалентности для разных компонентов смеси не будут перекрываться. В связи с этим иммуноэлектрофорез многокомпонентных смесей рекомендуется проводить при нескольких относительных концентрациях антиген-антитело, так как при использовании только одной такой концентрации можно не обнаружить какие-то компоненты. Предложен, в частности, метод иммуноэлектрофореза с применением последовательных разведений сыворотки человека [618, 619]. Этот метод иммуноэлектрофоретического титрования полезен для полуколичественного определения от- [c.239]

    Реакция пассивной кожной анафилаксации (ПКА) является тестом для полуколичественного определения титра кожно-сенсибилизирующих антител и методом для идентификации их класса. Проводится в случае положительной реакции АКА, что явилось обоснованием для ее применения в работе [137]. [c.257]

    С целью количественного определения титра кожно-сенсибилизирующих антител и их идентификации на 15-ти морских свинках поставлена реакция пассивной кожной анафилаксии, однако положительный результат пассивного переноса не удалось получить ни в одном случае. Это не противоречит данным некоторых авторов [ 132 ] о том, что лошадиная сыворотка не способствует формированию ПКА у морских свинок. Положительные результаты в реакциях системной и активной кожной анафилаксии без сомнения доказывают наличие состояния сенсибилизации экспериментальных животных. Следовательно, отрицательные результаты в реакции ПКА обусловлены гетерогенностью классов иммуноглобулинов, участвующих в развитии анафилактических реакций. Очевидно, гомоцитотропные антитела представлены классом иммуноглобулинов С, которые имеют очень короткий (порядка нескольких часов) период фиксации в коже и при тестировании после 24 часов не выявляются. [c.262]

    Описанный метод используют главным образом для одновременного количественного определения всех компонентов какой-либо гетерогенной смеси. Для этой цели нужна антисыворотка, содержащая антитела ко всем анализируемым компонентам, причем титр этих антител должен быть достаточно высоким, чтобы образовались преципитаты, поддающиеся измерению. Подобную сбалансированную антисыворотку трудно получить путем иммунизации. Ганрот [424] предлагает готовить антисыворотки высокого титра для нескольких антигенов, а затем смешивать их в таком соотношении, при котором обеспечивается адекватное содержание антител для каждого антигена. Очевидно, более выгодно использовать при перекрестном иммуноэлектрофорезе смесь антигенов в двух разных концентрациях [1017]. Само количественное определение заключается в измерении площадей под пиками преципитации. Его можно провести с помощью полуавтоматического электронного планиметра [873, 1386]. Другой способ состоит в том, что пластинку проецируют на лист белой бумаги, пики обводят карандашом, вырезают и взвешивают. Если методика электрофореза отличается высокой [c.256]

    В луики с адсорбированным антигеном виосят по 0,2 мл стандартных — положительной и отрицательной и испытываемых сывороток в разведении 1 30. Для количественного определения антител в сыворотках их титруют последовательным двукратным разведением в ТФБ, начиная с разведения 1 30. Тщательно перемешивают в течение 5—7 с и инкубируют в термостате 1,5—2 ч при 37 С. Затем 4—5 раз луики отмывают от несвязавшихся антител ТФБ. При качественной постановке реакции (ответ есть или нет ) постановку осуществляют аналогично, ио сыворотки ие титруют, а ставят ие менее тре.ч повторных опытов с разведением 1 30. [c.275]

chem21.info

Количественное определение антител

⇐ ПредыдущаяСтр 5 из 6Следующая ⇒

Наиболее часто используемым методом количественной оценки активности антител является определение их титра. Этой процедуре предшествует приготовление разведений (обычно двукратных) сыворотки. Далее каждое из них исследуется с соответствующими антиген позитивными эритроцитами в том методе, котором антитела проявляют свое действие. Процедура имеет ряд серьезных недостатков. Во первых, несмотря на тщательные усилия, происходит избыточный перенос сыворотки при приготовлении разведений. Во вторых, даже если разведения сыворотки приготовлены с большой точностью, различные константы антител одной и той же специфичности способны существенно влиять на результаты. N.C. Hughes-Jones показал, что даже если два вида антител присутствуют в сыворотке в одинаковых количествах, но обладают различными константами, различающимися на 10минут, то титр одного вида антител может превышать в 10 раз этот показатель для других. В третьих, результаты титрования, выполненного вручную, учитываются с известной долей субъективизма (также как и другие при выполнении проб на совместимость, фенотипирование) в то время как в данном случае главным является необходимость объективно отличить положительные результаты от отрицательных.

В результате существования этих трудностей были разработаны более точные и элегантные методы определения активности антител. Они включали прямую метку антител с использованием изотопов йода, использование анти-IgG, меченных йодом применение системы AutoAnalyzer. Все эти системы помогли разрешить многие проблемы, обусловленные различиями констант связывания различных видов антител и иммунопреципитации. Используя AutoAnalyzer, можно судить о концентрации антител в количественном отношении в нанаграммах на литр. Используя известные стандарты, стало возможным весьма точно оценить содержание антител в различных сыворотках.

Однако, все эти достижения по-прежнему остаются вне внимания большинства иммуногематологов - последние предпочитают по-старому определять активность антител методом титрования.

.

1.В каждую из 10 пробирок поместите 1 объем разводителя (обычный изотонический раствор)

2.В первую пробирку с разводителем добавьте равный объем титруемой сыворотки.

3.Перемешайте содержимое пробирки и перенесите один объем из нее в следующую пробирку с объемом разводителя.

4.Повторите описанную процедуру включая пробирку 10.

5.Теперь в пробирках приготовлены двукратные разведения от 1:2 до 1:1024.

6.Перенесите по 2 капли из пробирок с приготовленными разведениями по 2 капли в соответствующие пробирки, в которых приготовлены сухие капли эритроцитов. Может быть также выполнена проба с неразведенной сывороткой в отдельной пробирке.

7.Проводите серию тестов с приготовленными разведениями сыворотки.

Важные замечания по технике титрования

1.После переноса объема сыворотки или ее разведения в следующую пробирку замените наконечник пипетки-дозатора. Использование одной и той же пипетки или наконечника приведет к излишнему переносу титруемой сыворотки и значительному завышению значений титра антител.

2.Чем больше объемы приготовленных разведений, тем меньше погрешность при титровании, уровень ошибки обратно пропорционален объему используемой пипетки.

3.Антитела нестабильны в разведенном состоянии. После приготовления разведений титрование должно быть выполнено сразу.

4.Если требуется приготовить разведение 1:1024, то лучше приготовить разведение 1:1000 путем смешивания в отдельной пробирке 0,1 мл сыворотки с 99,9 мл изотонического раствора. Точность будет выше, если смешать 1 мл с 999 мл изотонического раствора.

5.Если титрование проводится с энзимированными эритроцитами (одноэтапный метод), в качестве разводителя следует использовать 50% сыворотку АВ группы, поскольку в больших разведениях сыворотки содержание белка очень незначительно - это может привести к гемолизу эритроцитов.

6.Если для исследования имеются небольшие объемы сыворотки, реакции по определению титра проводят прямо в приготовленных разведениях. При этом следует помнить, что такое титрование сопряжено с ошибками и погрешностями, которые отмечены в п.2 выше.

7.Поскольку результаты титрования не являются легко воспроизводимыми , следует использовать серийные методы исследований (описываются в главе 26, посвященной пренатальным серологическим тестам).

8.Moore и соавт. Рекомендуют использовать в качестве разводителя при титровании 1% раствор бычьего альбумина.

Точка конца титра

Правильный способ сообщить о результатах титрования - использовать величину, обратную наибольшему разведению, в котором наблюдается положительная реакция на 1+. Таким образом, о сыворотке, реагирующей неразведенной на 4+ , в разведении 1:2 на 3+, 2+ в разведении 1:4, 1+ в разведении 1:8, затем слабее, чем на 1+ в разведениях 1:16 и 1:32 и показывающая отрицательный результат в разведении 1:64 можно сказать, что она имеет титр 8 (не "1:8" - это не титр, а разведение!).Реакции с силой слабее 1+ обычно не принимаются во внимание при определении титра.

Система счета (score)

Существует также дополнительный способ характеристики активности антител, основанный на оценке в баллах силы положительных реакций в каждом разведении. Впервые предложенная система подсчета была десятибалльной, в ней троекратно положительная реакция оценивалась на 10 баллов, реакции силой в 2+ на 8 баллов, 1+ - на 5 баллов. Однако, в большинстве лабораторий максимально выраженные положительные реакции оценивают на 4+ и в этой связи применяют 12-балльную шкалу при подсчете показателя score. Для определения указанного показателя производят оценку в баллах всех положительных реакций, полученных при титровании сыворотки. Определение score часто полезно, когда с одной и той же сывороткой исследуют разные образцы эритроцитов или наоборот, оценивают антитела различных сывороток с одним и тем же образцом эритроцитов. Показатель score отражает не только титр, но также и авидность антител. Например, антитела двух различных сывороток могут иметь одинаковый титр 256, но при этом те из них, которые реагируют во всех разведениях на 1+ будут иметь невысокий показатель score, в то время как этот параметр будет существенно выше у другого образца антител, если при титровании получены положительные реакции выраженностью в 3+ или 4+. Очень часто различия в авидности антител либо экспрессии антигенов лучше демонстрируют показатели score, нежели значения титров. Система подсчета score, которой мы пользовались на протяжении долгих лет приведена далее в таблице.

Учитесь читать результаты титрования

Для того, чтобы не перестараться при учете показателей титра некоторые исследователи предпочитают вести учет результатов не с наименьших, а с наибольших разведений. Такой подход (наряду со сменой наконечников пипетки для титрования) позволяет избежать субъективизма при учете результатов титрования.

Тем, кто не верит в сложность процедуры титрования предлагаем поупражняться в этом следующим образом. Пусть Ваш коллега проведет титрование, перепутает порядок, в котором были установлены пробирки а Вам будет предложено оценить результаты и попытаться расставить их в правильной первоначальной последовательности - попробуйте, и Вы убедитесь, что это не так просто, как может показаться на первый взгляд!

Система подсчета score

Сила реакций Синонимы при учете реакции Оценка в баллах score
Полная
3,5 слабая 4 или сильная 3
 
2,5 слабая 3 или сильная 2
 
1,5 слабая 2 или сильная 1
 
0,5 слабая 1 или±
следы  
 

Эффект прозоны

Сравнительно редко антитела при титровании слабо или вовсе не реагируют будучи неразведенными или в начальных разведениях, а в разведениях 1:16 или 1:32 наблюдаются самые сильные реакции. Этот феномен известен как эффект прозоны и обусловлен избыточным количеством антител, которые способны заблокировать все антигенные детерминанты таким образом, что агглютинации не наступает. В действительности это одно из проявлений перенасыщения антигена антителами.

Этот феномен может сослужить плохую службу в тех ситуациях, когда исследуется сыворотка крови больного с сильной посттрансфузионной гемолитической реакцией. Если при исследовании получены отрицательные результаты, то рекомендуется их повторить с сывороткой, разведенной в 5 или 10 раз.

Феномен прозоны при титрованиях в аниглобулиновом тесте может иметь несколько причин, например конкуренцию между полными и неполными антителами за антигенные сайты, частичная элюция антител при отмывании или выраженная элюция антител перед добавлением антиглобулиновой сыворотки, что приводит к ее последующей нейтрализации. Наиболее часто он наблюдается при работе с анти-IgG компонентом антиглобулиновой сыворотки (см. более подробно главу 4).

 

Некоторые возможные результаты титрования и их интерпретация

Читайте также:

lektsia.com

Иммунологическая несовместимость крови матери и плода

При беременности может возникать иммунологическая несовместимости крови матери и плода по резус-фактору , реже по системе АВ0 и еще реже по некоторым другим ( система Келл, Даффи, Лютеран, Льюис, система Рр ) факторам крови. В результате такой несовместимости возникает гемолитическая болезнь плода и новорожденного.

Резус-фактор и гемолитическая болезнь

Резус-фактор Резус-фактор (Rh) является белком, который в основном содержится в эритроцитах крови человека и в гораздо меньшем количестве содержится в лейкоцитах и тромбоцитах. Различают несколько разновидностей резус-фактора. Так антиген-D присутствует в крови у 85% людей. Антиген С (Rh') содержится в крови у 70% людей, а антиген Е (Rh") имеется у 30% людей. Кровь, в которой отсутствуют перечисленные антигены, которые представляют собой разновидности резус-фактора, является резус-отрицательной.

Чаще всего гемолитическая болезнь плода и новорожденного возникает из-за иммунологического конфликта в связи с несовместимостью крови матери и плода по фактору D. При этом материнская кровь должна быть резус-отрицательной. А кровь плода содержит резус-фактор. Гемолитическая болезнь плода и новорожденного может также возникнуть при несовместимости крови матери и плода по группе крови (по системе АВ0). Групповая принадлежность крови человека обусловлена присутствием в ней определенных антигенов. Так, наличие в крови антигена "А" обусловливает II(А) группу крови. Наличие антигена "В" - III (В) группу крови. Совместное присутствие антигенов "А" и "В" обусловливает IV (АВ) группу крови. При отсутствии обоих антигенов у человека определяется I (0) группа крови. Иммунологическая несовместимость чаще всего проявляется в том случае, если у матери имеется I (0) группа крови, а у плода II(А) или III (В). Клетки крови плода, содержащие резус-фактор или групповые антигены и обладающие соответствующей антигенной активностью, проникают в материнский кровоток. Вследствие этого происходит иммунизация женщины, что сопровождается выработкой в ее организме или антирезус-антител или антител против групповых антигенов.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденного развивается вследствие иммунизации материнского организма , которая происходит либо уже при первой беременности плодом с резус-положительной кровью или с наличием в его крови соответствующих групповых антигенов, либо после переливания резус-положительной крови. Наиболее часто элементы крови плода, содержащие соответствующие антигены, попадают в материнский кровоток во время родов, особенно при оперативных вмешательствах, когда выполняют кесарево сечение или ручное отделение плаценты и выделение последа. Попадание элементов крови плода в материнский кровоток и последующая иммунизация женщины возможны и во время беременности при нарушении целостности ворсин плаценты, что бывает при токсикозе беременных, угрозе прерывания беременности, предлежании плаценты, при отслойке плаценты, внутриутробной гибели плода.

Принимая во внимание, что резус-фактор образуется с самых первых дней беременности, а в первые недели беременности образуются эритроциты, попадание их в материнский организм и иммунизация возможны при выполнении абортов или при внематочной беременности. После первой беременности иммунизируется около 10% женщин.

Иммунные антитела , которые выработались в организме женщины, проникают обратно в кровоток плода и воздействуют на его эритроциты. При этом происходит разрушение эритроцитов, что влечет за собой образование непрямого токсического билирубина, анемию и кислородное голодание (гипоксию). У плода развивается гемолитическая болезнь. Нарушается структура и функция печени плода, снижается выработка белка в организме плода, нарушается циркуляция крови в его организме с явлениями сердечной недостаточности. У плода в организме накапливается излишняя жидкость, что проявляется в виде отеков и асцита. Часто поражается ткань головного мозга. Развитие гемолитической болезни плода возможно уже с 22-23 недель беременности.

Диагностика гемолитической болезни

Диагностика гемолитической болезни должна быть комплексной, с применением целого ряда диагностических методик, и основывается на выявлении признаков, указывающих на иммунизацию матери, определении антител и их титра, оценке состояния плода и показателей околоплодных вод. Результаты только одного какого-либо теста не могут служить объективным и достоверным признаком возможного осложнения и требуют дополнения результатами других методов исследования.

Если в беседе с женщиной с резус-отрицательной кровью или с I(0) группой крови выясняется, что ей вводили донорскую кровь без учета резус- или групповой принадлежности, а также если у нее были самопроизвольные прерывания беременности в поздние сроки или имела место гибель плода при предыдущих беременностях, или рождение ребенка с желтушно-анемической или отечной формой, то эти факторы являются прогностически неблагоприятными с точки зрения высокого риска поражения плода при данной беременности.

Одним из простых способов определения характера течения беременности, темпов роста и развития плода и увеличения объема околоплодных вод является измерение высоты стояния дна матки (ВДМ) над лонным сочленением и измерение длины окружности живота. Эти измерения целесообразно проводить в динамике каждые две недели со II-то триместра беременности. Чрезмерное увеличение этих показателей в сравнении с нормативными для данного срока беременности в совокупности с результатами других исследований позволяет заподозрить наличие имеющейся патологии.

Определение антител в крови беременной имеет относительное диагностическое значение, и должно быть использовано для выявления данной патологии только в комплексе с другими диагностическими тестами. Важным признаком является величина титра антител и его изменение по мере развития беременности. Титр антител соответствует наибольшему разведению сыворотки, при котором она еще способна воздействовать (агглютинировать) резус-положительные эритроциты (титр антител может быть равен 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и т. д.). Соответственно, чем больше титр, тем больше антител и тем менее благоприятен прогноз.

Титр антител в течение беременности может нарастать, быть неизменным, снижаться, а также может отмечаться попеременный подъем и спад титра антител. В последнем случае вероятность заболевания плода наиболее велика.

Оценка состояния плода и фето-плацентарного комплекса

Для оценки состояния плода и фето-плацентарного комплекса могут быть использованы такие инструментальные методы диагностики как кардиотокография (КТГ) и ультразвуковое исследование. По данным КТГ в случае страдания плода отмечаются явные признаки нарушения сердечного ритма плода, урежение сердцебиений, монотонный ритм и т.п. При ультразвуковом исследовании оценивают размеры плода, состояние его внутренних органов, структуру и толщину плаценты, объем околоплодных вод. Определяют также функциональную активность плода и с помощью допплерографии изучают интенсивность кровотока в системе мать-плацента-плод .

Ультразвуковое исследование у женщин с ожидаемой гемолитической болезнью плода следует проводить в 20—22 нед., 24—26 нед., 30—32 нед., 34—36 нед. и незадолго до родоразрешения. До 20 недель беременности признаки гемолитической болезни эхографически не выявляются. Повторные исследование необходимы для исключения в динамике гемолитической болезни плода. У каждой беременной сроки повторных сканирований вырабатываются индивидуально, при необходимости интервал между исследованиями сокращается до 1—2 недель.

Принимая во внимание, что при гемолитической болезни плода происходит отек плаценты , то ее утолщение на 0,5 см и более может свидетельствовать о возможном заболевание плода. Однако при этом следует исключить и другие осложнения, при которых также может происходить утолщение плаценты (например, внутриутробное инфицирование или сахарный диабет).

Для гемолитической болезни плода наряду с утолщением плаценты возможно и увеличение размеров его живота по сравнению с грудной клеткой и головкой плода. Такое увеличение обусловлено чрезмерными размерами печени плода, а также излишним скоплением жидкости в его брюшной полости (асцит). Отек тканей плода проявляется в виде двойного контура его головки. При выраженной водянке плода дополнительно также отмечаются скопление жидкости в других полостях (гидроторакс, гидроперикард), признаки отека стенок кишечника.

При ультразвуковом сканировании оцениваются и поведенческие реакции плода (двигательная активность, дыхательные движения, тонус плода). При нарушении его состояния отмечаются соответствующие патологические реакции со стороны этих показателей. По данным допплерографии отмечается снижение интенсивности кровотока в фето-плацентарном комплексе.

Важное диагностическое значение имеет определение в околоплодных водах оптической плотности билирубина , группы крови плода, титра антител. Накануне родоразрешения околоплодные воды целесообразно исследовать для оценки степени зрелости легких плода.

Для исследования околоплодных вод, начиная с 34—36 недель беременности, выполняют амниоцентез , который представляет собой пункцию полости матки для взятия пробы околоплодных вод. Процедуру проводят под ультразвуковым контролем с обезболиванием и с соблюдением всех правил асептики и антисептики.

Амниоцентез может быть выполнен либо через переднюю брюшную стенку, либо через канал шейки матки. Место пункции выбирают в зависимости от расположения плаценты и положения плода. Возможными осложнениями при этом могут быть: повышение тонуса матки, отслойка плаценты, кровотечение, излитие околоплодных вод и начало родовой деятельности, развитие воспаления.

По величине оптической плотности билирубина в околоплодных водах, если она более 0,1, оценивают возможную степень тяжести гемолитической болезни плода. При величине этого показателя более 0,2 можно ожидать рождение ребенка со средней и тяжелой формой гемолитической болезни.

Выявление группы крови плода по околоплодным водам является одним из тестов, определяющих прогноз для плода. Чаще можно ожидать развитие гемолитической болезни вследствие несовместимости по резус-фактору, при одногруппной крови матери и плода.

Важное значение имеет определение группы крови при подозрении на развитие АВ0-конфликтной беременности . Значимым диагностическим тестом является определение титра антител в околоплодных водах.

Для исследования крови плода используют пункцию сосудов пуповины ( кордоцентез ) под ультразвуковым контролем. Исследование полученной таким образом крови плода позволяет определить его группу крови и резус-принадлежность, оценить уровень гемоглобина, белка сыворотки крови и ряда других показателей, отражающих наличие и тяжесть осложнения.

В рамках ведения беременности у всех пациенток и их мужей следует определить резус-принадлежность и группу крови при первом обращении к врачу, не зависимо от того, предстоят ли роды или планируется прерывание беременности . У беременных с первой группой крови, если у их мужей другая группа крови, необходимо провести исследование на определение групповых антител. Беременных с резус-отрицательной кровью необходимо обследовать на наличие антител и их титра 1 раз в месяц до 20 недель, а далее 1 раз в 2 недели. Если у беременной с резус-положительной кровью имеется указание на рождение ребенка с гемолитической болезнью, следует исследовать кровь на наличие групповых иммунных антител, а также на "анти – с" антитела, если кровь мужа содержит антиген "с". Наличие резус-сенсибилизации у беременных не является показанием для прерывания беременности.

Профилактика и лечение гемолитической болезни плода

Всем беременным с резус-отрицательной кровью, даже при отсутствии у них в крови антител, а также при наличии АВ0 сенсибилизации следует провести в амбулаторных условиях 3 курса неспецифической десенсибилизирующей терапии продолжительностью по 10-12 дней, в сроки 10-22, 22-24, 32-34 недели.

В рамках проведения неспецифической десенсибилизирующей терапии назначают: внутривенное введение 20 мл 40% раствора глюкозы с 2 мл 5% раствора аскорбиновой кислоты, 100 мг кокарбоксилазы; внутрь рутин по 0,02 г 3 раза в день, теоникол по 0,15 г 3 раза в день или метионин по 0,25 г и кальция глюконата по 0,5 - 3 раза, препараты железа, витамин Е по 1 капсуле. На ночь применяют антигистаминные препараты: димедрол 0,05 или супрастин 0,025.

При осложненном течении беременности: угроза прерывания, ранний токсикоз беременных, гестоз и пр., пациентки должны быть госпитализированы в отделение патологии беременных, где наряду с лечением основного заболевания проводится курс десенсибилизирующей терапии.

Беременным, у которых имеется высокий титр резус-антител , а в анамнезе у них были самопроизвольные выкидыши или роды плодом с отечной или тяжелой формой гемолитической болезни, рекомендуется применять плазмоферез . Эта процедура позволяет удалить из плазмы крови антитела. Плазмоферез проводят 1 раз в неделю под контролем титра антител, начиная с 23—24 нед. беременности, до родоразрешения.

Для лечения гемолитической болезни плода применяется также гемосорбция с использованием активированных углей для удаления из крови антител и уменьшения степени резус-сенсибилизации. Гемосорбцию применяют у беременных с крайне отягощенным акушерским анамнезом (повторные выкидыши, рождение мертвого ребенка). Гемосорбцию начинают проводить с 20-24 недель в стационаре, с интервалом в 2 недели.

Лечение гемолитической болезни плода во время беременности возможно также путем переливания крови плоду под ультразвуковым контролем .

Беременных с резус-сенсибилизацией госпитализируют в родильный дом в 34-36 нед. беременности. При АВ0 - сенсибилизации госпитализация осуществляется в 36-37 недель. При наличии соответствующих показаний, указывающих на выраженный характер осложнения, госпитализация возможна и в более ранние сроки.

При наличии гемолитической болезни плода целесообразно досрочное родоразрешение в связи с тем, что к концу беременности увеличивается поступление антител к плоду. При выраженной гемолитической болезни плода беременность прерывают в любые сроки беременности. Однако в большинстве случаев беременность удается пролонгировать до приемлемых сроков родоразрешения. Как правило, родоразрешение проводится через естественные родовые пути. Кесарево сечение выполняют при наличии дополнительных акушерских осложнений.

В родах проводят тщательный контроль за состоянием плода, осуществляют профилактику гипоксии . Сразу после рождения ребенка быстро отделяют от матери. Из пуповины берется кровь для определения содержания билирубина, гемоглобина, группы крови ребенка, его резус-принадлежности. Проводится специальный тест, позволяющий выявить эритроциты новорожденного, связанные с антителами.

Лечение гемолитической болезни новорожденного

При гемолитической болезни новорожденного различают три ее формы: анемическую, желтушную и отечную . При лечении анемической формы гемолитической болезни новорожденных при цифрах гемоглобина менее 100 г/л проводят переливания резус-положительной эритромассы, соответствующей группе крови новорожденного. Для лечения желтушно-анемической формы гемолитической болезни новорожденных применяют заменное переливание крови, фототерапию, инфузионную терапию . При тяжелом течении гемолитической болезни новорожденного заменное переливание крови выполняется неоднократно в комплексе с терапией, направленной на снижение интоксикации, обусловленной непрямым билирубином.

Действие фототерапии или светолечения направлено на разрушение непрямого билирубина в поверхностных слоях кожи новорожденного под воздействием лампы дневного света или синего (длина волны 460А). При выполнении инфузионной терапии внутривенно капельно вводят растворы гемодеза, глюкозы, альбумина, плазмы в различных комбинациях.

Лечение отечной формы гемолитической болезни новорожденного заключается в немедленном заменном переливании одногруппной резус-отрицательной эритро-массы. Одновременно проводится дегидратационная терапия, направленная на устранение отеков .

Для предотвращения гемолитической болезни плода и новорожденного необходимо, чтобы при любом переливании крови она была одногруппной и сходной по резус-принадлежности.

Первая беременность и резус-конфликт

Важно сохранять первую беременность у женщин с резус-отрицательной кровью . Необходимо проводить профилактику и лечение осложненной беременности, а также осуществлять десенсибилизирующую терапию. Первобеременным женщинам с резус-отрицательной кровью, которые еще не сенсибилизированы к резус-фактору, на 28 неделе беременности или после досрочного прерывания беременности, или после аборта вводят антирезусный иммуноглобулин . После родов в первые 48-72 часа введение иммуноглобулина повторяют.

Запись к специалистам по телефону единого колл-центра: +7(495)636-29-46 (м. "Щукинская" и "Улица 1905 года"). Вы можете также записаться к врачу на нашем сайте, мы Вам перезвоним!

www.art-med.ru

Медицинская энциклопедия - значение слова Титр Антите́л

(франц. titre определение, титр)предельное разведение пробы сыворотки крови или другой биологической жидкости, при котором обнаруживается активность антител с помощью какой-либо серологической реакции.

Смотреть значение Титр Антите́л в других словарях

Титр — титра, м. (фр. titre от латин. titulus). 1. Надпись, содержащая пояснительный текст или передающая слова действующих лиц в кинокартине (кино). 2. Мера тонины шелковой нити определенной........Толковый словарь Ушакова

Титр — -а; м. [франц. titre]1. Надпись на кадре в фильме, передающая слова действующих лиц или содержащая пояснительный текст. Титры кинофильма. Внутрикадровый т. (субтитр).2.........Толковый словарь Кузнецова

Коли-титр — см. коли–индекс.Словарь микробиологии

Биосинтез Антител — см. Антителообразование.Большой медицинский словарь

Титр — 1) в хим. анализе концентрация раствора, выражаемая числом граммов вещества в 1 мл раствора; 2) в микробиол. количество клеток микроорганизма в единице объема материала........Словарь микробиологии

Титр Вируса — 1) количество вирусов в ед. объема (обычно в 1 мл) суспензии. Подсчитывают в электронном микроскопе или методом бляшек (см. Бляшки) на к-ре клеток. В первом случае выявляют........Словарь микробиологии

Титр Диагностический — титр Ат к конкретному возбудителю болезни в с-ке крови, выявляемый у большинства лиц на определенной фазе болезни и не наблюдающийся у большинства здоровых людей. Подтверждает........Словарь микробиологии

Зона Избытка Антител — диапазон количественных соотношений антигенов и антител в реакциях преципитации и связывания комплемента, при котором наблюдается относительный избыток антител;........Большой медицинский словарь

Коли-титр — (коли- + франц. titre определение, титр; син. титр кишечной палочки) показатель фекального загрязнения объектов окружающей среды, выраженный наименьшим объемом в миллилитрах........Большой медицинский словарь

Матричная Теория Образования Антител — см. Хауровитца теория образования антител.Большой медицинский словарь

Полинга Теория Образования Антител — (L. С. Pauling) теория, согласно которой антиген служит матрицей при формировании присущей данному антителу конфигурации антидетерминанты.Большой медицинский словарь

Коли-титр — минимальное количество материала (воды, почвы и др.), вкотором содержится 1 кишечная палочка; показатель фекального загрязненияисследуемой среды.Большой энциклопедический словарь

Синдром Дефицита Антител — см. Агаммаглобулинемия.Большой медицинский словарь

Синтез Антител — см. Антителообразование.Большой медицинский словарь

Титр Антител — (франц. titre определение, титр) предельное разведение пробы сыворотки крови или другой биологической жидкости, при котором обнаруживается активность антител с помощью........Большой медицинский словарь

Титр Бактериофага — 1) число активных единиц бактериофага, содержащихся в 1 мл фаголизата; 2) по Аппельману - предельное разведение взвеси бактериофага, способное вызвать лизис культуры........Большой медицинский словарь

Титр Вируса — количество инфекционных, бляшкообразующих, гемагглютинирующих или других единиц активности вируса, определяемое в единице объема вируссодержащей жидкости.Большой медицинский словарь

Титр Кишечной Палочки — см. Коли-титр.Большой медицинский словарь

Хауровитца Теория Образования Антител — (F. Haurowitz; син. матричная теория образования антител) теория антителообразования, согласно которой антиген является мутагеном, направленно изменяющим синтез иммуноглобулинов.Большой медицинский словарь

Титр — (в текстильной промышленности) - см. в ст. Текс.Большой энциклопедический словарь

Титр Раствора — число граммов растворенного вещества в 1 мл раствора.Большой энциклопедический словарь

Титр — — надпись в кинофильме.Исторический словарь

Титр — Устаревшая единица линейной плотности, применявшаяся в текстильной промышленности.Словарь мер и весов

Титр — - (в иммунологии) активность содержащей антитело сыворотки крови, которая характеризует ее способность к растворению до достижения момента, когда полученный раствор........Психологическая энциклопедия

ТИТР — ТИТР, -а, м. Надпись на кадре в кинофильме. Внутрикадровый т. (субтитр). || прил. тигровый, -ая, -ое. Толковый словарь Ожегова

Посмотреть еще слова :

slovariki.org

Иммуноферментный анализ. Определение титра антител в ИФА. — Мой личный опыт

Метод ИФА применяют при оценке вакцинального процесса у морских свинок, иммунизированных конъюгированной и живой бруцеллезной вакцинами. Показано, что при отсутствии антигена в крови бруцеллезные антитела регистрировались, начиная с 5 суток (1:800), нарастая к 45 суткам (1:1 600). ИФА успешно применяется и в диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота для определения наличия бруцеллезных антител в крови и молоке.

Иммуноферментный анализ. Определение титра антител в ИФА.

Представляет интерес использование метода ИФА при исследовании сывороток крови у тех категорий людей, где общепринятые серологические реакции на бруцеллез дают отрицательный результат. Исследования сывороток вакцинированных людей с отрицательными результатами РА, сомнительной или слабоположительной РХ (реакция Хеддельсона) и РБ (Роз-Бенгал тест) показали, что титры антител в ИФА (1:320-1:640) в известной мере коррелировали с РНАг (реакция нейтрализации антигена), но при совпадающих результатах двух реакций в ИФА они на 2-3 порядка выше. В то же время в РПГА титры антител не превышали 1:20- 1:80, т. е. в 8- 16 раз были ниже, чем в ИФА. В работах других исследователей показано, что при выявлении бруцеллезных антител в кроличьих сыворотках, метод ИФА в 4-64 раза чувствительнее РПГА и в 10-100 раз — РА (21). Чувствительность ИФА при определении специфических антител колебалась от 108 до 10 9г/мл.

Определение титра антител в ИФА в исследуемых сыворотках увеличивает трудоемкость и стоимость анализа и затрудняет его использование для массового обследования населения. Полученные результаты исследования 336 сывороток дают основание считать диагностическим титр 1:200.В связи с этим при диагностике бруцеллеза для получения сопоставимых результатов в качестве положительной контрольной сыворотки постоянно использовали сыворотку одного больного, имеющую титры в ИФА 1:3200. Эта же сыворотка в РА со стандартным диагностикумом имела титр 1:100, что соответствует 100 ME (международных единиц). В качестве отрицательной сыворотки использовали сыворотку от 500 доноров (пул).

При анализе результатов выявлено, что ИФЕ положительных сывороток колебались от 40 до 800, причем величина ИФЕ коррелировала с титром специфических антител. ИФЕ сывороток, имеющих титр в ИФА 1:400-1:800, варьировали от 40 до 80, 1:600-1:6400 — от 80 до 400.Полученные результаты позволяют рекомендовать определение антител в одном разведении как качественный тест при массовом обследовании населения, с последующим определением титра антител в положительных или сомнительных случаях.Благодаря высокой чувствительности, специфичности и быстроте постановки (4-5 часов) метод ИФА может быть с успехом применен при диагностике туляремии и бруцеллеза. Применение антисывороток против IgG, IgA, IgM, IgD и IgE позволяет проводить определение специфических антител, принадлежащих к определенному классу иммуноглобулинов. Более того, обобщение результатов проведенных исследований позволяет сделать вывод о том, что применение метода ИФА при изучении гуморального иммунитета является весьма перспективным.Значение заболеваний, этиологическим фактором которых является пневмококк, во многом недооценивается. Этот грам-положительный микроб — один из самых распространенных условно патогенных возбудителей.Установлено, что до 50% и более широко распространенных инфекционных заболеваний органов дыхания вызвано пневмококком, 28% — при гнойных менингитах. Если учесть, что заболеваемость (например, хроническим бронхитом) составляет от 3 до 11% , то в целом этой формой пневмококковой инфекции болеют от 8 до 30 млн человек ежегодно. Поэтому поиск средств эффективной профилактики и лечения пневмококковой инфекции чрезвычайно актуален. Однако и в настоящее время в СССР не существует налаженной лабораторной диагностики пневмококковой инфекции.

uprava-mitino.ru


Смотрите также