Специфичность антител. Их классификация по методу специфичности. Полные и неполные антитела. Неполные антитела


Специфичность антител. Их классификация по методу специфичности. Полные и неполные антитела.

Специфичность антител

Одним из важнейших свойств А. является их специфичность, к-рая выражается в том, что А. активнее и полнее взаимодействует с тем антигеном, к-рым организм был стимулирован. Комплекс антиген — антитело в этом случае обладает наибольшей прочностью. А. способны различать в антигенах незначительные изменения в структуре. При использовании конъюгированных антигенов, состоящих из белка и включенного простого хим. вещества — гаптена, образующиеся А. специфичны к гаптену, белку и комплексу белок — гаптен. Специфичность обусловлена хим. структурой и пространственным рисунком антидетерминант А. (активных центров, реактивных групп), т. е. участков А., к-рыми они соединяются с детерминантами антигена. Число антидетерминант А. часто называют их валентностью. Так, молекула IgM-антитела может иметь до 10 валентностей, молекулы IgG- и IgA-антител двухвалентны.

По данным Караша (F. Karush, 1962), активные центры IgG состоят из 10—20 аминокислотных остатков, что составляет примерно 1 % всех аминокислот молекулы А., а, по представлениям Уинклера (М. Н. Winkler, 1963), активные центры состоят из 3—4 аминокислотных остатков. В их составе найдены тирозин, лизин, триптофан и др. Антидетерминанты расположены, очевидно, в аминоконцевых половинах Fab-фрагментов. В образовании активного центра участвуют вариабельные отрезки легких и тяжелых цепей, причем последним принадлежит основная роль. Возможно, легкая цепь лишь частично участвует в формировании активного центра или стабилизирует структуру тяжелых цепей. Наиболее полноценная антидетерминанта создается лишь комбинацией легких и тяжелых цепей. Чем больше точек совпадения связи между антидетерминантами А. и детерминантами антигена, тем выше специфичность. Разная специфичность зависит от последовательности аминокислотных остатков в активном центре А. Кодирование огромного разнообразия А. по их специфичности неясно. Портер допускает три возможности специфичности.

1. Образование стабильной части молекулы иммуноглобулина контролируется одним геном, а вариабельной части — тысячами генов. Синтезированные пептидные цепи соединяются в молекулу иммуноглобулина под влиянием особого клеточного фактора. Антиген в этом случае выступает в качестве фактора, запускающего синтез антител.

2. Молекула иммуноглобулина кодируется стабильными и изменчивыми генами. В период клеточного деления происходит рекомбинация изменчивых генов, что и обусловливает разнообразие их и вариабельность участков молекул глобулинов.

3. Ген, кодирующий вариабельную часть молекулы иммуноглобулинов, повреждается особым ферментом. Другие ферменты восстанавливают повреждение, но вследствие ошибок допускают различную последовательность нуклеотидов в пределах данного гена. Этим и обусловлена различная последовательность аминокислот в вариабельной части молекулы иммуноглобулина. Имеются и другие гипотезы, напр. Бернета (F. М. Burnet, 1971).

Гетерогенность (неоднородность) А. проявляется по многим признакам. В ответ на введение одного антигена образуются А., различающиеся по сродству к антигену, антигенным детерминантам, мол. весу, электрофоретической подвижности, N-концевым аминокислотам. Групповые А. к различным микробам обусловливают перекрестные реакции к разным видам и типам сальмонелл, шигелл, эшерихий, животных белков, полисахаридов. Продуцируемые А. неоднородны по своей специфичности относительно гомогенного антигена или одной антигенной детерминанты. Гетерогенность А. отмечена не только против белковых и полисахаридных антигенов, но и против комплексных, в т. ч. конъюгированных, антигенов и против гаптенов. Полагают, что гетерогенность А. определяется известной микрогетерогенностью детерминант антигена. Гетерогенность может быть вызвана образованием А. на комплекс антиген — антитело, что наблюдается при многократной иммунизации, различием клеток, образующих А., а также принадлежностью А. к разным классам иммуноглобулинов, которые, как и другие белки, обладают сложной антигенной структурой, контролируемой генетически.

Полные антитела имеют не менее двух активных центров и при соединении с антигенами in vitro обусловливают видимые реакции: агглютинацию, преципитацию, связывание комплемента; нейтрализуют токсины, вирусы, опсонизируют бактерии, обусловливают визуальный феномен иммунного прилипания, иммобилизации, набухания капсул, нагрузки тромбоцитов. Реакции протекают в две фазы: специфическая (взаимодействие антитела с антигеном) и неспецифическая (тот или иной из вышеуказанных феноменов). Общепризнано, что различные серологические реакции обусловливаются одним, а не множеством А. и зависят от методики постановки. Различают тепловые полные А., реагирующие с антигеном при t° 37°, и холодовые (криофильные), проявляющие эффект при t° ниже 37°. Имеются также А., реагирующие с антигеном при низкой температуре, а видимый эффект проявляется при t° 37°; это двухфазные, биотермические А., к к-рым отнесены гемолизины Доната — Ландштейнера. Все известные классы иммуноглобулинов содержат полные А. Активность и специфичность их определяются титром, авидностью (см. Авидитет), числом антидетерминант. IgM-антитела более активны, чем IgG-антитела, в реакциях гемолиза и агглютинации.

Неполные антитела (непреципитирующие, блокирующие, агглютиноиды), как и полные А., способны соединяться с соответствующими антигенами, но реакция при этом не сопровождается видимым in vitro феноменом преципитации, агглютинации и др.

Неполные А. обнаружены у человека в 1944 г. к резус-антигену, их находили при вирусных, риккетсиозных и бактериальных инфекциях по отношению к токсинам при различных патологических состояниях. Существует ряд доказательств двухвалентности неполных А. Бактериальные неполные А. обладают защитными свойствами: антитоксическими, опсонизирующими, бактериологическими; вместе с тем неполные А. обнаружены при ряде аутоиммунных процессов — при заболеваниях крови, особенно гемолитических анемиях.

Неполные гетеро-, изо- и аутоантитела способны вызвать повреждение клеток, а также играть определенную роль в возникновении медикаментозных лейко- и тромбоцитопении

Нормальными (естественными) принято считать А., обычно встречающиеся в сыворотке крови животных и человека при отсутствии явной инфекции или иммунизации. Происхождение антибактериальных нормальных А. может быть связано, в частности, с антигенной стимуляцией нормальной микрофлорой организма. Эти взгляды теоретически и экспериментально обоснованы исследованиями на животных-гнотобионтах и новорожденных в обычных условиях обитания. Вопрос о функциях нормальных А. связан непосредственно со специфичностью их действия. Л. А. Зильбер (1958) полагал, что индивидуальная устойчивость к инфекциям и, кроме того, «иммуногенная готовность организма» определяются их наличием. Показана роль нормальных А. в бактерицидности крови, в опсонизации при фагоцитозе. Работами многих исследователей было показано, что нормальные А. в основном являются макроглобулина-ми — IgM. Некоторые исследователи находили нормальные антитела в IgA- и IgG-классах иммуноглобулинов. В их составе могут быть как неполные, так и полные А.

cyberpedia.su

22. Неполные антитела. Методы определения неполных антител

23. Динамика антителообразования и характеристика фаз. Моноклонапьные и поликлокальные антитела.

Моноклональные антитела моноспецифичны и являются исключительно удобным диагностическим средством.

Ц. Мильштейн и Г.Келер в 1975 г. разработали методику получения моноклональных антител, которые называют гибридомами и по сути представляют собой бессмертные клоны непрерывно делящихся В-клеток. Получают гибридом путем слияния нормальных по продолжительности жизненного цикла лимфоцитов, продуцирующих антитела, с опухолевыми (бессмертными) дефектными линиями В-клеток, не способных к секреции иммуноглобулинов. Для иммунизации антигеном (имеет 2 и больше детерминант) используют мышей или крыс. Получают лимфоциты селезенки. При слиянии нормальных и опухолевых лимфоцитов разрушают клеточные стенки нормальных лимфоцитов с помощью полиэтиленгликоля.

Получены гетерогибридомы (человеческая антителообразующая клетка + мышиная опухолевая В-клетка). Они не вызывают иммунной реакции при введении человеку.

Путем клонирования гибридом можно получить набор моноклональных антител фактически против любых эпитопов определенного иммуногена. С помощью гибридом можно получить неограниченное количество антител, которые сохраняют свою высокую специфичность и чувствительность.

24. Классы иммуноглобулинов. Основные функции различных классов иммуногпобулинов, особенности строения.

В зависимости от строения константных областей тяжелых цепей все иммуноглобулины подразделяют на пять классов: IgG, IgE, IgD, IgM и IgA.

Различия в строении молекул:

При этом в их составе соответственно содержатся γ, ε, δ, μ и α Н-цепи, χ или λ вариант L-цепей, т. е. каждый класс иммуноглобулинов представлен двумя типами молекул, например IgGχ и IgGλ. и т. д.. Первые три класса иммуноглобулинов IgG, IgE, IgD являются мономерами и содержат два антигенсвязывающих центра. IgM – полимер, состоит из пяти мономерных молекул, полимеризованных (связанных) в области Fc-фрагментов j-цепями. IgA в сыворотке крови, как и IgG, – мономер, а в секретах слизистых оболочек, межтканевой жидкости – полимер, состоящий из двух мономерных молекул IgAS, защищённый от воздействия протеолитических ферментов особым полипептидом (секреторным компонентом Sc).

Функциональные значение иммуноглобулинов разных классов

Иммуноглобулины класса М. Содержатся в сыворотке крови. Синтезируются при первичном попадании Аг в организм. Пик образования приходится на 4-5 сутки. Эти АТ низкоаффинны, но высокоавидны из-за большого числа активных центров. Аффинность, или аффинитет (К-константа связывания) – это сила связывания отдельной детерминанты (эпитопа) антиген со специфическим к нему активным центром (паратопом) антитела. Авидность, или авидитет – это прочность связывания всей молекулы иммуноглобулина с антигеном.

Образование IgМ к некоторым антигенам (например, к жгутиковым Аг бактерий) осуществляется постоянно. К IgM относится значительная часть АТ, вырабатывающихся к Аг грамотрицательных бактерий. Наличие IgM к Аг конкретного возбудителя указывает на острый инфекционый процесс. Т.к. эти антитела состоят из 5 мономеров, их молекула приобретает 10 Аг-связывающих участков. В комплексе с антигеном IgМ более эффективно активирует комплемент, чем IgG. IgМ опсонизируют, агглютинируют, препицитируют и лизируют содержащие Аг структуры.

Иммуноглобины класса G. У человека являются наиболее важными. Составляют основную массу иммуноглобулинов сыворотки крови и до 75 % всех Ig. Они неоднородны построению Fc-фрагмента, в связи с этим различают их четыре субкласса: G1, G2, G3, G4. В большом количестве появляются при вторичном иммунном ответе. Иммуноглобины класса G обеспечивают противоинфекционную защиту, связывают токсины, усиливают фагоцитарную активность, активируют систему комплемента, вызывают аглютинацию бактерий и вирусов. Они способны переходить через плаценту, обеспечивая новорожденному пассивный иммунитет.

Иммуноглобины класса А. Делят на 2 разновидности: сывороточные и секреторные. Первые из них находятся в крови (15-20 % всех Ig), вторые - в различных секретах. Соответственно этому сывороточный иммуноглобин А принимает участие в общем, иммунитете, а секреторный обеспечивает местный иммунитете, создавая барьер на пути проникновения инфекций и токсинов в организм.

Секреторный находится в наружных секретах - в слюне, слизи трахеобронхиального дерева, мочеполовых путей, молоке. Молекулы иммуноглобина А, присутствующие во внутренних секретах и жидкостях, существенно отличаются от молекул наружных секретов. Секреторный компонент, по всей видимости, образуется в эпителиальных клетках и в дальнейшем присоединяется к молекуле IgA.

IgA нейтрализует токсины и вызывает аглютинацию микроорганизмов и вирусов. Содержание IgA резко возрастает при заболеваниях верхних дыхательных путей, пневмониях, инфекционных заболеваниях желудочно-кишечного тракта и др.

Иммуноглобины класса Е. Принимают участие в нейтрализации токсинов, опсонизации, аглютинации и бактериолизисе, осуществляемом комплементом. К этому классу также относятся некоторые природные антитела, например к чужеродным эритроцитам. Содержание IgE повышается при инфекционных заболеваниях у взрослых и детей. Защитные свойства направлены преимущественно против гельминтов (нематод).

Иммуноглобины класса D. Представляют собой антитела, локализующиеся в мембране плазматических клеток, в сыворотке их концентрация невелика. Служат рецептором В-лимфоцитов. Их количество увеличивается при некоторых вирусных заболеваниях. Предполагают, что они участвуют в аутоиммунных процессах.

У новорожденных в крови имеется только материнский IgG (8-10 г/л), уровень которого снижается к 5-6 месяцам (до 5 г/л). Количество IgA и IgM очень небольшое (0,02-0,1 г/л). К году их уровень увеличивается. У 2-х-летних детей уровень иммуноглобулинов близок к нормам взрослых.

Кроме различных классов иммуноглобулинов, между молекулами АТ существуют аллотипические, изотипические и идиотипические отличия.

Аллотипы иммуноглобулинов – это вариации в их строении у разных индивидуумов. Их наличие обусловлено различиями небольших аминокислотных последовательностей константных участков тяжелых и легких цепей в результате незначительного полиморфизма генов, кодирующих их синтез. Аллотипические различия не влияют на функциональные свойства АТ.

Изотипы иммуноглобулинов – молекулы иммуноглобулинов, у которых константные (С) домены тяжелых цепей генетически и структурно различаются. Примеры – пять классов иммуноглобулинов. Структурные различия в составе цепей влияют на функциональные свойства АТ.

Идиотипы – совокупность антигенных детерминант V-областей антител. Идиотипические детерминанты расположены в антигенсвязывающих центрах. Все молекулы Ig, продуцируемые отдельным лимфоцитом и его потомками (т.е. клоном плазматических клеток), несут один и тот же идиотип и обозначаются термином «моноклональные антитела».

studfiles.net

Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть III, страница 11

Реакцию кольцепреципитации ставят в узких пробирках. В опытную пробирку наливают 0,1-0,5 мл диагностической преципитирующей сыворотки, в контрольную такое же количество нормальной сыворотки. Затем пастеровской пипеткой, держа пробирки наклонно, медленно по стенке в обе пробирки наслаивают преципитиноген, так чтобы слои жидкостей не перемешивались. Пробирки ставят горизонтально и через 1-2 минуты учитывают результат. Если исследуемый антиген соответствует  антителам диагностической  сыворотки, в опытной пробирке на границе жидкостей   образуется белое кольцо преципитации. В контрольной пробирке такого кольца не будет.

В тетради записывают результат и делают вывод:

Реакция преципитации  ……………………………………………………….. 

ЗАНЯТИЕ 25

ТЕМА: НЕПОЛНЫЕ АНТИТЕЛА. РЕАКЦИЯ КУМБСА. РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕЧЕННЫХ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ

Цель занятия: Изучить сущность и методы постановки реакций на выявление неполных антител. Изучить сущность реакций с использованием меченых антигенов или антител, их достоверность и информативность.

План занятия

1.  Неполные антитела

2.  Методы выявления неполных антител

3.  Реакция иммунофлюоресценции

4.  Реакция иммуноферментного анализа

5.  Реакция радиоиммунного анализа

Неполные антитела – это антитела, которые реагируют с антигеном одним активным центром, в результате видимый комплекс не образуется, реакция визуально не проявляется. Неполные антитела называют также непреципитирующими, так как они не дают реакции преципитации. Неполные антитела, в отличие от полных, более устойчивы к нагреванию, легче проникают через плаценту. Впервые они были обнаружены к резус-антигену, потом их стали находить при бактериальных и вирусных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, аллергических состояниях, гемолитической анемии.

                    Наибольшей интерес представляют неполные антитела к резус-антигену эритроцитов. Несовместимость крови матери и плода по              резус-антигену (отсутствие у матери и наличие у плода) являетсяпричиной гемолитической болезни плода и новорожденных. Выявляютнеполные антитела в реакции Кумбса.

Реакция Кумбса

Для выявления неполных антител предложена иммунологическая диагностическая проба Кумбса (реакция Кумбса, антиглобулиновыйтест). Она выявляет антитела к резус-антигену эритроцитов, бактериальным антигенам в сыворотках больных. Эти антитела появляются уже в первые дни болезни. Название пробы связано с именем английского иммунолога Кумбса, предложившего эту реакцию. Реакция Кумбса является одним из методов ранней диагностики инфекционных  заболеваний.

Различают два варианта реакции Кумбса:

1. Прямая реакция Кумбса

2. Непрямая реакция Кумбса

Прямая реакция Кумбса. В прямой реакции Кумбса выявляет анти­тела, связанные с эритроцитами. Для этого исследуемую кровь смеши­вают с антиглобулиновой сывороткой. Антитела антиглобулиновой сыворотки взаимодействуют с неполными антителами, находящимися на поверхности эритроцитов и склеивают последние.

Положительная прямая реакция Кумбса служит основным диагностическим признаком при приобретенной аутоиммунной гемолитической анемии, гемолитической анемии новорожденных.

Непрямая реакция Кумбса. В непрямой реакции Кумбса выявляют антитела, свободно циркулирующие в сыворотке крови. Реакция про­водится в два этапа. Нa первом этапе неполные антитела адсорбиру­ют из сыворотки на нормальных эритроцитах, можно на бактериальных клетках, риккетсиях. На втором этапе эти эритроциты смешивают с антиглобулиновой сывороткой, полученной путем гипериммуниэации животных антителами человека. Молекула антиглобулина соединяет   две молекулы неполных антител, фиксированных на разных эритроцитах, наступит реакция агглютинации эритроцитов, которая будет наблюдать­ся уже через 10 минут, по ней можно судить о наличии неполных анти­тел в исследуемой сыворотке.

Реакции иммунитета с использованием меченых антигенов или антител

Серологические реакции, в которых используются меченые антигены или антитела, отличаются высокой чувствительностью и находят все более широкое применение в диагностике инфекционных за­болеваний   как для обнаружения и идентификации антигена в исследуемом материале, так и для обнаружения антител в сыворотке крови больных. Метят антигены или антитела флюорохромами, ферментами или радиоактивными изотопами. При этом антигены и антитела, образовывая комплексы с метками, не утрачивают способности к иммунному реагированию.

Реакция иммунофлюоресценции

Реакция иммунофлюоресценции используется для выявления микробных или вирусных антигенов, локализованных в пораженных тканях или патологическом материале. Меченые антитела получают путем обработки иммунной сыворотки флюорохромами.

Различают два варианта постановки реакции иммунофлюоресценции:

а) Прямой метод Кунса. Этот метод может быть использован для экспресс-диагностики. Он обладает высокой чувствительностью и специфичностью.  Метод заключается в обработке среза ткани  или мазка из патологического материала сывороткой, содержащей антитела к предполагаемому антигену, меченые флюорохромом. После промывания препарата, при котором удаляются свободные антитела, его просмат­ривают в люминесцентном микроскопе. Если в препарате присутствует антиген, он свяжется с мечеными антителами, образуется комплекс, который будет давать свечение в ультрафиолетовом свете.

              б) Непрямой метод Веллера и Кунса. Этот метод имеет преимущество как более чувствительный и как более доступный. Он позволяет использовать одну флюоресцирующую сыворотку, содержащую антитела против глобулинов кролика и набор немаркированных иммунных кроличьих сывороток к различным антигенам.

         Непрямой метод ставится в два этапа. На первом этапе препаратобрабатывают   диагностической иммунной сывороткой. На втором этапе - люминесцирующей антисывороткой. При положительном результатеобразуется иммунный комплекс, состоящий из антигена, антител к немуимеченых антиглобулинов, этот комплекс будет светиться в ультрафиолетовых лучах.

vunivere.ru

Антитела неполные - Справочник химика 21

    Метод выявления неполных антител (проба Кумбса). [c.107]

    Сопутствующие химические изменения можно изучить, анализируя тонкие слои эпидермиса, срезанные параллельно поверхности, или последовательные слои клеток, обдираемые при повторном наложении и снятии липкой ленты. Молекулы кератина можно экстрагировать и идентифицировать по их электрическому заряду, молекулярной массе, сродству к специфическим антителам н набору малых пептидов, на которые расщепляются кератины при их неполном переваривании. Таким способом было показано, что кератины содержатся во всех слоях эпидермиса. Однако существует много различных видов кератина, кодируемых большим семейством генов. Это семейство возникло в процессе эволюции в результате дупликаций и мутаций какого-то одного предкового гена. В различных слоях эпидермиса синтезируются разные виды кератинов. Кератины шиповатых клеток отличаются, например, от кератинов, заполняющих мертвые ороговевшие чешуйчатые клетки. По мере того как стюловая клетка, находившаяся в основании колонки, превращается в чешуйку наверху, она последовательно экспрессирует различные группы из всего набора гомологичных кератиновых генов. [c.156]

    При использовании антигенов, полученных с помощью хроматографических методов и поэтому, по крайней мере частично, растворимых, смешайте 0,2—2,0 мг интактного гибридного белка, растворенного в 1 мл физиологического раствора или PBS с 1,25 мл полного адъюванта Фрейнда и получите гомогенную эмульсию, как описано выше. Сделайте зафиксированному кролику подкожные инъекции в несколько мест. Повторите инъекции 0,2—1,0 мг антигена в неполном адъюванте Фрейнда на 14-й и 21-й день и с 28-го дня начинайте брать кровь. Для определения титра антител берите кровь еженедельно и повторите введение 0,2—1,0 мг антигена, когда титр антител начнет уменьшаться. После получения достаточного количества антисыворотки, пока титр антител остается достаточно высоким, возьмите под анестезией кровь из сердца кролика. [c.163]

    И второй эксперимент. Обычный гамма-глобулин из сыворотки кролика можно перестроить в пробирке в антитела, специфичные, скажем, к человеческому сывороточному альбумину с динитрофенильным остатком (ДНФ) в качестве дополнительной группы. Для этого достаточно только заранее немного (неполностью) развернуть молекулу гамма-глобулина и предоставить идти процессу свертывания в присутствии ДНФ-альбумина. Конечно, большая часть молекул приобретет исходную форму, однако 0,5% молекул станут все-таки после этого специфичными к ДНФ-альбумину. Может показаться, что это совсем мало, однако, в сущности, именно этого и следовало ожидать, так как, очевидно, всегда лишь немногие антигены будут встречаться с частично развернутым глобулином в нужном месте и в нужное время. [c.346]

    Определению аутоиммунного характера приобретенной гемолитической анемии способствовали многочисленные исследования, проведенные на основе предложенной Кумбсом прямой пробы, которая позволяет выявлять блокирующие неполные фиксированные на эритроцитах антиэритроцитарные антитела. Разработанная тем же автором непрямая проба применяется для обна- [c.230]

    При помощи РПГА определяют полные (бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этим методом, так как, соединяясь с антигеном, блокируют его, но не могут вызвать агрегации частиц в крупные конгломераты. Для выявления неполных, например антирезусных, антител в исследуемой сьшоротке используют специальную реакцию — п р о б у с антиглобу-линовой сывороткой, которая получила название р е а к - [c.108]

    Сначала кроликов иммунизируют по Мильгрому. Для этого из ушной вены животного берут 2 мл крови, смешивают с 0,5 мл 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия, осаждают эритроциты и трижды отмывают их пятью объемами физиологического раствора хлористого натрия. К осадку отмытых эритроцитов прибавляют два объема инактивированной сыворотки человека группы АВ и, периодически помешивая, инкубируют смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем эритроциты вновь трижды отмывают, доводят объем суспензии физиологическим раствором до 2 мл и вводят в вену тому же самому кролику. Эти инъекции повторяют каждые 3 дня, пока титр антиглобулиновых антител не достигнет 1 1000—2000 в реакции пассивной гемагглютинации с эритроцитами НЬ (О) +, сенсибилизированными неполными анти-О-антите-лами с титром 1 32. [c.117]

    Исходным материалом для получения анти-1Шо(.0)-1д является сыворотка или плазма крови, содержащая неполные анти-НЬо(О)-антителав вы,соком>титре сыворотка ИЬ(-)лиЦ, сенсибилизированных К D-изоантигену во время предшествующих беременностей. Rh( + ) пл"одом или в резу тате переливания iUi( + ) крови. Однако более стабильные и высококачественные препараты получают в случае использования сыворотки или плазмы крови рт специально иммунизирование доноров (например, Rh-отрицательных женщин нёдеторрдйо р зраста)./ j Г [c.596]

    В молекуле иммуноглобулина меньше двух антигепсвязываю-щих центров быть не может, но один может быть завернут внутрь молекулы — это неполное антитело. Оно блокирует антиген, и тот не может связаться с полными антителами. [c.58]

    Отметить результаты реакции Кумбса определить титр неполных антирезусных антител в сыворотке беременной женщины. Объяснить, какие конт-роли должны сопровождать деакцию Кумбса. [c.109]

    Кроме того, для серодиагностики бруцеллеза используют РПГА, реакцию иммунофлюоресценции, опсонофагоцитарную реакцию, РСК, определение неполных антител и др. Эти серологические реакции обладают достаточно высокой чувствительностью и специфичностью. В поздние периоды заболевания процент положительных серологических реакций (агглютинации, РПГА и РСК) начинает снижаться и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса, поэтому комплексный сероаллергический метод является наиболее надежным в диагностике бруцеллеза. [c.207]

    Поликлональные антитела против GGT почек быка или GGT почек крысы (легкие формы) могут быть получены иммунизацией кроликов (самки, возраст 6—8 нед) путем инъекций в подушечки задних лап эмульсии, состоящей из 50 мкг фермента в 0,5 мл Na l-натрийфосфатного буфера с 0,5 мл полного стимулятора Фрейнда на животное. Через 2 нед вводят то же количество антигена (50 мкг GGT в 0,5 мл того же буфера), хорошо эмульгированного неполным стимулятором Фрейнда, подкожно в несколько мест шеи. Целесообразно повторить последнее введение еще через 2 нед. Через 10—15 сут берут пробы крови кролика инкубируют взятые пробы при 37 Х в течение 2 ч, затем оставляют на ночь при 4 °С и отделяют антисыворотку центрифугированием при 3000 g в течение 30 мин. В анализах методом двойной иммунодиффузии антисыворотка при разбавлении 1 128 (Na l-фосфатным буфером) все еще дает дуги преципи тации с разбавленной GGT (0,025 мг/мл). [c.153]

    Если ферментом помечен высокоочищенный антиген, то на заключительной стадии анализа возможно измерение как несвязанного с антителами Аг, так и связанного (АтАг ) меченого антигена. В первом случае процедура твердофазного анализа упрощается, так как не требуется отмывка иммуносорбента, предшествующая измерению метки. Если метка вводится в неполностью очищенный препарат антигена, то определение ее ферментативной активности возможно в комплексе АтАг только после его отделения, так как в несвязанном с антителами состоянии в этом случае кроме меченого антигена находятся и меченые примесные компоненты. I [c.227]

    Помимо рецептора инсулина существуют другие симметрично построенные белки, проявляющие асимметрию относительно сродства их активных центров к лиганду. Так, в молекуле неполного антитела (ввиду отсутствия у него преципитирующих и агглютинирующих свойств) только один нз активных центров имеет высокое сродство к детерминантной группе антигена. Причина асимметрии реце. тора инсулина (неполное антитело) по степени сродства к лиганду пока еще не выяснена. [c.18]

    Для растворимых антигенов известны разнообразные схемы иммунизации. Например, первую инъекцию 100 мкг антигена, эмульгированного в полном или неполном адъюванте Фрейнда, осуществляют подкожно (в 0,1 мл), а последующие инъекции (оо 100 мкг в PBS объемом 0,5 мл) проводят в/б с интервалом в месяц. Отбирают пробу крови, чтобы убедиться в наличии адекватного титра антител в сыворотке, а затем осуществляют последние инъекции антигена (в/б утром и в/в днем), за 3—4 дня до гибридизации. [c.123]

    С помощью ОФ-ВЖХ пытались разделять целые молекулы иммуноглобулинов (Alvarez et al., 1981 Henson, неопубликованные данные), однако удовлетворительных результатов получить не удалось, поскольку с колонки элюировался широкий пик с плохим разрешением. Вместе с тем такой результат может быть хорошим показателем неполного расщепления антител. Иммуноглобулины чрезвычайно устойчивы к действию протеаз. Для того чтобы прошло полное расщепление иммуноглобулинов, полезно предварительно обрабатывать их кислотой. Предполагают, что обработка кислотой вызывает разворачивание структуры иммуноглобулинов, и это способствует протеаз-ному расщеплению. [c.144]

    Соответствие конформации антигенсвязывающего центра антитела конформации антигенной детерминанты благоприятствует возникновению сил межмолекулярного притяжения и одновременно в большой степени препятствует возникновению сил отталкивания. При неполном соответствии конформаций, напротив, силы отталкивания преобладают. Если электронные оболочки эпитопов и паратопов перекрываются, возникают значительные силы отталкивания, превышающие любые слабые силы притяжения. [c.151]

    Холодовые аутоантитела часто присутствуют в более высоких титрах, чем тепловые. Они принадлежат главным образом к классу IgM и прочно связывают комплемент. В больщинстве случаев эти антитела специфичны по отношению к антигенам системы групп крови l . Эпитопы I и i присутствуют на молекулах — предшественниках полисахаридов, содержащих эпитопы системы ABO, и являются результатом неполного глико-лизирования основного полисахарида. [c.449]

    Возможность свободного вращения активных Fab-фрагментов относительно друг друга сильно влияет на характер реакции антител с антигеном. Так называемые неполные антитела кролика против эритроцитов неспособны вызвать реакцию агглютинации. Однако по ле разрыва единственного дисульфидного мостика между тяжелыми цепями эти же антитела агглютинируют эритроциты (Romans е. а., 1977). Объяснить этот результат можно тем, что при восстановлении дисульфидной связи молекула антитела приобретает способность реагировать сра у с вумя эритроцитами из-за снятия каких-то ограничении, накладываемых этой связью, и вследствие этого появления относительной свободы движения Fab-фрагментов. [c.29]

    Некоторые вещества самостоятельно не вызывают иммунного ответа, но приобретают эту способнорть при конъюгации с высокомолекулярными белковыми носителями или в смеси с ними. Такие вещества называют неполными антигенами, или гаптенами. Гаптенами могут быть химические вещества с малой молекулярной массой или более сложные химические вещества, не обладающие свойствами полного антигена некоторые бактериальные полисахариды, полипептид туберкулезной палочки (РРД), ДНК, РНК, липиды, пептиды. Гаптен является частью полного или конъюгированного антигена. Образующиеся к конъюгату белка с гаптеном антитела могут также реагировать и со свободным гаптеном. Гаптены иммунного ответа не вызывают, но они вступают в реакцию с сыворотками, содержащими специфические к ним антитела. [c.145]

    Вццы антител. Помимо полноценных антител, обладающих специфичностью и активным участием в реакциях иммунной защиты, выделяют нормальные, или естественные, антитела и неполные антитела. К нормальным относят антитела, обнаруживаемые у людей или животных, не подвергавшихся какой-либо иммунизации. Их роль в защите не совсем ясна. К неполным антителам относятся иммуноглобулины с одним активным центром (валентностью). Эти антитела неполноценны, так как, соединяясь с антигеном, они не могут агрегировать частицы в конгломераты. У неполных антител второй центр имеется, однако он экранирован или имеет малую авидность. Для выявления неполных антител используют реакцию Кумбса. [c.156]

    Реакция агглютинации для определения групп крови и резус-фактора. Антитела к резус-фактору эритроцитов являются неполными, поэтому, связываясь с эритроцитами, эти антитела не могут их агглютинировать. Для их выявления дополнительно в реакцию вводят антиглобулиновую сыворотку, содержащую антитела к иммуноглобулинам человека (реакция Кумбса). Антитела антиглобулиноюй сыворотки, взаимодействуя с неполными антителами к резус-фактору, адсорбированными на эритроцитах, агглютинируют эритроциты. С помощью реакции Кумбса выявляют как антитела против резус-фактора, так и резус-фактор диагностируют гемолитическую болезнь новорожденных, эритроциты которых соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору. [c.177]

    Вследствие этого в растворах образуются крупные конгломераты веществ. Антитела, вызывающие видимые реакции, называют ал ьшм. В противоположность этому некоторые иммуноглобулины-мономеры реагируют с антигеном лишь одним паратопом, видимых реакций не дают и поэтому называются неполными антителами. Если же реакция взаимодействия этих антител происходит в крови и не вызывает каких-либо нарушений в организме, их называют антителами-свидетелями. Последние блокируют антиген, а нередко одновременно связывают комйлемент, вследствие чего называются блокирующими и комплементсвязывающими. Реагирование 1 Е и lgG с антигенами может приводить к развитию аллергий. При незначительных, бесследно исчезающих проявлениях аллергии на кожных покровах аллергические антитела называют реагинами, а при ярко выраженных повреждениях клеток кожи — агрессинами или кожно-сенсибилизирующими антителами.  [c.37]

chem21.info

Определение неполных антител - Иммунологические реакции - Исследование крови - Справочник по клинической лабораторной диагностике - Medkurs.ru

Как к изоантителам, так и к аутоантителам могут относиться тепловые антитела (оптимум действия при 37 °С), главным образом, класса IgG. Они называются неполными, унивалентными и, покрывая поверхность эритроцитов, не вызывают их агглютинацию в солевом растворе, однако могут склеивать эритроциты в среде с высокой концетрацией белка (альбумина или сыворотки). Тепловые антитела класса IgG редко обладают способностью фиксировать комплемент, вызывая лизис эритроцитов, т.е. выступать в качестве гемолизинов. Обычно эритроциты, покрытые антителами IgG, секвестрируются селезенкой, где они теряют часть оболочки, что приводит к фрагментации и сфероцитозу, или агглютинируют (в среде с высокой концентрацией белка) и захватываются макрофагами. Фиксированные на эритроцитах неполные антитела выявляются прямой пробой Кумбса (антиглобулиновой пробой). Суть метода состоит в агглютинации эритроцитов, покрытых антителами класса IgG, антисывороткой кролика против γ-глобулина человека.

Непрямая проба Кумбса определяет неполные антитела, содержащиеся в сыворотке крови и могущие быть как аутоантителами, так и изоантителами. В этой пробе эритроциты донора инкубируют с исследуемой сывороткой крови, затем отмывают и соединяют с антиглобулиновой сывороткой, т.е. проводят пробу Кумбса, и с ее помощью устанавливают, имеются ли на поверхности донорских эритроцитов неполные антитела. При положительном варианте происходит агглютинация эритроцитов.

Определение ристомицин-агрегации (агглютинации) в богатой тромбоцитами исследуемой плазме отражает взаимодействие фактора Виллебранда (ФВ) с собственными тромбоцитами пациента. При исследовании in vitro ристомицин способствует связыванию ФВ с тромбоцитарным рецептором ГП1в. Процесс агрегации, индуцируемый добавлением к богатой тромбоцитами исследуемой плазме стандартного количества ристомицина, регистрируется фотометрически по падению ее оптической плотности. Измерения проводятся в агрегометре или на модифицированном фотоэлектроколориметре, снабженном перемешивающим и записывающим устройствами. Ристомицин-агрегация тромбоцитов может снижаться как при качественных, так и при количественных дефектах ФВ.

Определение активности фактора Виллебранда (ристомицин-кофакторной активности — РКА) исследуемой плазмы основано на его способности вызывать в присутствии ристомицина агглютинацию нормальных донорских тромбоцитов. В классическом методе, предложенном H.I. Weiss, предлагается использование суспензии свежеприготовленных отмытых донорских тромбоцитов для измерений, проводимых в агрегометре. При этом взвесь отмытых и ресуспендированных донорских тромбоцитов должна иметь концентрацию около 250*109/л. В кювету агрегометра добавляют взвесь доведенной исследуемой бедной тромбоцитами плазмы и стандартизованное количество ристомицина. Последующий агрегационный процесс регистрируется в течение нескольких минут с помощью записи увеличения трансмиссии. Угол наклона полученной кривой пропорционален РКА исследуемого образца плазмы. РКА исследуемой плазмы определяется в процентах по калибровочной кривой зависимости максимального изменения трансмиссии за минуту от уровня РКА. Для ее построения используется серия разведений стандартной коммерческой или пулированной плазмы, в которых РКА соответствует 100%-, 50%-, 25%-ному уровню.

В модификациях данного метода предусмотрено использование не свежих, а фиксированных формалином донорских тромбоцитов. Такая обработка тромбоцитов способствует длительному хранению их без потери рецепторов к ФВ. Для этого из донорской крови, взятой на ЭДТА-формалиновом растворе (соль этилендиаминтетрауксусной кислоты) в соотношении 9 : 1, готовится бедная тромбоцитарная плазма. Полученный после ее удаления тромбоцитарный осадок дважды отмывается ЭДТА-буферным раствором и разводится в буфере до концентрации тромбоцитов 200—250*109/л. Полученный тромбоцитарный реагент может храниться.

В настоящее время коммерчески доступны тест-наборы, основанные на регистрации агглютинации лиофилизированных фиксированных тромбоцитов как методами агрегатометрии, так и слайд-тестами. Определение РКА в слайд-тестах требует меньших затрат времени и характеризуется более высокой точностью.

Далее по теме:

www.medkurs.ru


Смотрите также