Белок S-100. Локализация антитела s100 в клетке


Белок S-100

Капсулы SugaNorm – спаси себя от смерти

Белки S-100 – низкомолекулярные протеины, которые принимают участие в делении, транскрипции, росте и сокращении клеток. Повышение их концентрации в сыворотке происходит при разрушении нервной ткани и повреждении гематоэнцефалического барьера. Анализ крови на белок S-100 часто выполняется вместе с исследованием нейронспецифической енолазы, общей лактатдегидрогеназы, выявлением маркеров рака легких, молочной железы, толстой кишки. Результаты востребованы в онкологии, неврологии, кардиологии. Они используются для выявления, мониторинга и оценки эффективности лечения меланом, черепно-мозговых травм, нейродегенеративных патологий, сердечной недостаточности и ишемии, аутоиммунных заболеваний. Материал для изучения – сыворотка крови из вены. Исследование проводится с помощью иммуноанализа. Референсные значения не превышают 0,15 мкг/л. Срок подготовки результатов – 1 рабочий день.

Белки S-100 – низкомолекулярные протеины, которые принимают участие в делении, транскрипции, росте и сокращении клеток. Повышение их концентрации в сыворотке происходит при разрушении нервной ткани и повреждении гематоэнцефалического барьера. Анализ крови на белок S-100 часто выполняется вместе с исследованием нейронспецифической енолазы, общей лактатдегидрогеназы, выявлением маркеров рака легких, молочной железы, толстой кишки. Результаты востребованы в онкологии, неврологии, кардиологии. Они используются для выявления, мониторинга и оценки эффективности лечения меланом, черепно-мозговых травм, нейродегенеративных патологий, сердечной недостаточности и ишемии, аутоиммунных заболеваний. Материал для изучения – сыворотка крови из вены. Исследование проводится с помощью иммуноанализа. Референсные значения не превышают 0,15 мкг/л. Срок подготовки результатов – 1 рабочий день.

Белок S-100 – общее название для группы протеинов, которые находятся внутри клетки и обеспечивают нормальное протекание ее жизненных процессов. При участии белков данной группы происходит рост, размножение, сокращение и дифференциация клеток, синтез РНК, фосфорилирование белковых молекул, формирование иммунной реакции. Белки S-100 способны связывать кальций, цинк и медь. Они задействованы в регуляции клеточного цикла, в том числе канцерогенеза – патофизиологического процесса образования и развития злокачественной опухоли. Уровень белка S-100 в крови изменяется при многих онкологических заболеваниях. В клинической практике он рассматривается как онкомаркер, в частности при раке кожи, а также как маркер воспалительных процессов, повреждений нервной и сердечно-сосудистой систем.

Отдельные виды белка S-100 являются тканеспецифическими: S-100 бета-бета образуется в головном мозге, шванновских и глиальных клетках, меланоцитах; S-100 альфа-бета – в глиальных клетках и меланоцитах; S-100 альфа-альфа – в сердечной и скелетных мышцах. Вид белка, который будет определен в ходе анализа, указывается врачом. Белок S-100B диагностически значим при раке кожи, различных повреждениях головного мозга и при аутоиммунных заболеваниях с вовлечением нервной системы. Различные виды белка S-100A являются маркерами онкологических патологий внутренних органов, заболеваний сердца, воспалительных процессов. Для повышения специфичности анализ назначается в комплексе с другими онкомаркерами, белками воспаления, тропонинами и т. д. Материалом для теста является сыворотка венозной крови, при неврологических патологиях дополнительно исследуется ликвор. Анализ проводится с помощью иммуноферментного метода. Сфера применения результатов достаточно широка, показатели используются при диагностике и мониторинге заболеваний в онкологии, нефрологии, кардиологии, ревматологии и общетерапевтической практике.

Показания

Анализ крови на белок S-100 имеет широкий круг показаний, он применяется при диагностике, составлении прогноза и оценке реакции на лечение онкопатологий, неврологических, сердечно-сосудистых и ревматологических заболеваний. В онкологической практике определение белка S-100B в крови выполняется при меланоме. Показатели коррелируют со стадией заболевания, на начальных этапах повышение концентрации маркера определяется у 1,3% пациентов, на поздних – у 74%. Оценивая динамику результатов нескольких исследований, врач составляет прогноз течения патологии, делает вывод о регрессе или прогрессе опухоли, определяет тактику лечения. Анализ крови на белки S-100А используется при обследовании пациентов с онкологическими новообразованиями различных локализаций – молочная железа, яичники, яички, предстательная железа, желудок, поджелудочная железа, легкие, мочевой пузырь.

В неврологической практике тест на определение белка S-100B в крови назначается при состояниях с гипоксическим, гипогликемическим и травматическим повреждением нервной ткани. Показатели исследования позволяют врачу установить степень тяжести черепно-мозговой травмы и принять решение о необходимости дальнейших исследований. Новорожденным анализ показан при асфиксии для выявления гипоксической и ишемической энцефалопатии. У людей пожилого и старческого возраста исследование белка S-100B в крови проводится при нейродегенеративных процессах.

В кардиологии используется исследование крови на белок S-100А1. Он является маркером повреждений миокарда. Показаниями для проведения теста служат инфаркт миокарда, острая ишемия, сердечная недостаточность различного происхождения. После сердечно-легочных реанимационных мероприятий анализ назначается с целью определения вероятности развития неврологических осложнений. Анализ на белки S100A в крови показан при воспалительных, в том числе аутоиммунных заболеваниях. Их уровень в сыворотке отражает степень воспаления при коллагенозах, инфекциях.

Белок S-100 – неспецифический биомаркер, поэтому исследование его уровня не показано при профилактических и скрининговых обследованиях. Кроме этого, назначение этого анализа не всегда оправдано на начальных стадиях онкологического процесса, так как повышение показателей определяется у небольшого количества пациентов. Несмотря на это, тест на белок S-100 в крови широко применяется в медицинской практике, так как его результаты позволяют оценивать динамику патологического процесса и составлять прогноз.

Подготовка к анализу и забор материала

Уровень белка S-100 определяется в сыворотке, полученной из венозной крови. Забор биоматериала, как правило, выполняется в утренние часы, натощак. Последний прием пищи должен быть совершен не менее чем за 4-6 часов, оптимально – за 8-12 часов. В период перед исследованием разрешено пить чистую негазированную воду. За 3-4 дня необходимо исключить интенсивные физические упражнения. Последние полчаса нужно провести в спокойной обстановке, без физических нагрузок, воздержаться от курения. Кровь берется из локтевой вены методом пункции, помещается в пробирку и в этот же день направляется на анализ.

В лаборатории кровь центрифугируют и удаляют из нее факторы свертывания. Уровень белка S-100 определяется в сыворотке методом хемилюминесцентного иммуноанализа. Процедура заключается в том, что сначала в исследуемый образец вводятся антитела, меченые ферментом. Затем добавляется хемилюминесцентный субстрат, который реагирует с ферментом, выделяя свечение. По интенсивности последнего рассчитывается концентрация белка S-100 в сыворотке. Процедура анализа занимает несколько часов, результаты подготавливаются в течение 1 дня.

Нормальные значения

В норме уровень белка S-100 не превышает 0,15 мкг/л. Однако этот показатель может значительно варьироваться в зависимости от условий проведения исследования: особенностей метода, чувствительности реагентов и оборудования. Референсные значения стоит уточнить в соответствующей графе в бланке результатов. При мониторинге заболевания повторные тесты рекомендуется выполнять в одной и той же лаборатории либо подтверждать сопоставимость данных параллельным измерением двумя способами. Некоторое повышение показателей в пределах физиологической нормы может быть определено после интенсивной физической нагрузки.

Повышение уровня

Одной из причин повышения уровня белка S-100 в крови являются онкологические заболевания. Концентрация маркера увеличивается у пациентов с меланомой, раком молочной и поджелудочной железы, простаты, яичка, яичника, мочевого пузыря. При меланоме рост показателей коррелирует со стадией болезни. Другими распространенными причинами повышения уровня белка S-100 в крови являются патологии сердечной мышцы, повреждения головного мозга, аутоиммунные и воспалительные заболевания. Производство белка S-100А1 усиливается при гипертрофии миокарда правого желудочка и при острой ишемии. При повреждениях нервной ткани увеличивается синтез белка S-100B, рост показателей не только в крови, но и в спинномозговой жидкости определяется у пациентов с черепно-мозговыми травмами, гипоксией, ишемией головного мозга, субарахноидальными кровоизлияниями. Заболевания, сопровождающиеся воспалительными процессами, приводят к повышению уровня белков S100A8, S100A9 и S100A2. Показатели увеличены при системной красной волчанке, ревматоидном артрите, хроническом бронхите, псориазе, муковисцидозе.

Снижение уровня

Низкие показатели являются нормой при выполнении анализа крови на белок S-100. Значимым может быть уменьшение количества маркера на фоне лечения при изначально повышенной концентрации. Еще одной причиной снижения уровня белка S-100 в крови при наблюдении в динамике является тяжелая сердечная недостаточность. В этом случае уменьшается концентрация S-100A1.

Лечение отклонений от нормы

Анализ крови на белок S-100 используется для мониторинга течения и контроля успешности лечения меланомы, для раннего выявления метастазов и рецидивов. Кроме этого, он выполняется в рамках комплексного обследования при подозрении на повреждение головного мозга. Результаты позволяют составить прогноз неврологических последствий, определить тактику терапии. С результатами теста необходимо обратиться к врачу, направившему на исследование. Чаще всего им является онколог, невролог или кардиолог. Чтобы избежать физиологического повышения уровня белка S-100, нужно исключить интенсивную физическую нагрузку за несколько дней до забора крови.

Источник

Онлайн Запись к врачу

illnessnews.ru

Белок S100 - показания к анализу, норма и расшифровка

Белок S 100 – маркер меланомы кожи и повреждения центральной нервной системы — головного и спинного мозга.

Синонимы: S-100 protein alpha chain, S-100 protein subunit alpha, S100 alpha, S100 calcium-binding protein A1, S100 protein, alpha polypeptide, protein S100-A1

Белок S 100 – это

группа из 25 белков с низкой молекулярной массой (9-13 кДа). Белки S 100 связывают кальций, некоторые подвиды — цинк и медь. Расположены преимущественно внутри клеток, где принимают участие в росте, дифференциации, делении, сокращении и секреции. Некоторые виды S 100 белков задействованы в иммунном ответе.

Свое название белок S 100 получил благодаря способности оставаться в растворимом (от англ. solubility — растворимый) состоянии в насыщенном растворе сульфата ам­мония. S 100 белки специфичны для позвоночных, их структура очень стабильна. Гены большинства белков S 100 расположены на хромосоме 1q21. Образование отдельных типов белка специфично для некоторых тканей. Время полувыведения почками 2 часа.

Виды

  • S 100 ββ (белок S100-бета-бета) – головной мозг, глиальные и Шванновы клетки, меланоциты
  • S 100 αβ (белок S100-альфа-бета) – глиальные клетки, меланоциты
  • S 100 αα (белок S100-альфа-альфа) – скелетные мышцы, сердечная мышца, почки, печень

При назначении анализа на белок S 100 врач указывает, какой именно вид нужно исследовать.

белок s100

Белки S 100 – онкомаркер злокачественного рака кожи — меланомы.

Онкомаркер — вещество, которое вырабатывается злокачественными клетками или организмом в ответ на наличие опухоли. Подробнее о различных онкомаркерах написано здесь. О подготовке к анализу крови на онкомаркеры — здесь.

Белки S 100 — показатели повреждения центральной нервной системы.

Впервые S 100 был выделен в 1965 году из клеток головного мозга. Разрушение нервной ткани приводит к повышенному высвобождению белка S 100 из астроцитарных клеток глии и повышения его уровня в ликворе. При одновременном повреждении гематоэнцефалического барьера S 100 проникнет в кровь. Повышенный уровень белка S 100 в сыворотке больных с повреждениями головного мозга – показатель вторичного повреждения мозга и маркер тяжести нарушений в центральной нервной системе.

В норме количество белка S 100 в крови минимально, но повышение происходит во время/после инсульта, субарахноидального кровоизлияния, травмы.

белок s100 анализ

Клетки, в которых образуется S 100

  • Шванновские клетки – формируют миелиновую оболочку нервных клеток
  • глия – опорно-трофическая сеть клеток вокруг нейронов
  • меланоциты – пигментосодержащие клетки кожи, происходят из нервного гребня
  • тельца Пачини – механо- и барорецепторы кожи
  • хондроциты – клетки хрящевой ткани
  • жировые клетки – адипоциты
  • миоэпителиальные клетки
  • клетки лимфатических узлов
  • клетки Лангерганса кожи

Показания

  • диагностика рецидива меланомы (рака кожи) и ее метастазов
  • выявление опухолей из хрящевой ткани (позволяет отличить от рака костей)
  • дифференциальная диагностика склерозирующего аденоза от рака молочной железы
  • дифференциальный диагноз болезни Педжета от поверхностной меланомы
  • оценка степени повреждения головного мозга

белок s100 норма

Анализ НЕ проводят

  • диагностика меланомы
  • в процессе общего обследования организма, а только при наличии специфических показаний

Норма, мкг/л

  • в крови 0,02-0,2, превышение 0,5 мкг/л – показатель заболевания
  • в ликворе – до 5 мкг/л.

Помните, что у каждой лаборатории, а точнее у лабораторного оборудования и реактивов есть «свои» нормы. В бланке лабораторного исследования они идут в графе – референсные значения или норма.

белок s100 инсульт

Что влияет на результат?

  • болезни сердца – гипертрофия желудочков, сердечная недостаточность, острый инфаркт миокарда
  • заболевания нервной системы – болезнь Альцгеймера, синдром Дауна (трисомия по 21 хромосоме, гены белка S 100 находятся на 21 хромосоме), рассеянный склероз, боковой амиотрофический склероз, нейродегенерация, болезнь Крейтцфельда-Якоба
  • воспалительные заболевания – ревматоидный артрит, хронический бронхит, псориаз
  • травмы кожи
  • ВИЧ/СПИД с поражением нервной системы
  • искусственное кровообращение

Расшифровка

Причины повышения

1. белок S 100 повышается при следующих видах опухолей

  • меланома – рак кожи из меланоцитов
  • липомы и липосаркомы
  • опухоли из кожных придатков
  • рак молочной железы
  • опухоли слюнных желез
  • опухоли из нервных оболочек – 50% случаев
  • карциноидные опухоли

Отрицательный результат анализа на белок S 100 НЕ является доказательством отсутствия онкологической патологии.

При меланоме белок S 100 повышен на II, III, IV стадиях, рост пропорционален размеру опухоли и стадии, что позволяет прогнозировать течение, выявлять рецидивы и метастазы на более ранних стадиях.

белок s100 повышен

2. при болезнях нервной системы

  • белок S 100 — позво­ляет отличить кровоизлияние в мозг от ишемического инсуль­та
  • при кровоизлияниях в мозг пик концентрации S100 в сыворотке крови и ликворе определяется уже в первые сутки заболевания, при ишемическом инсульте этот пик приходится на 3-й сутки
  • уровень повыше­ния концентрации пропорционален объему поражения мозга

Факты

  • белок S-100 исследуют для диагностики рецидива меланомы и разрушения нервных клеток в головном мозге
  • анализ проводят как в крови, так и в ликворе (спинно-мозговой жидкости)
  • на результат исследования влияют многие заболевания, что учитывают при расшифровке полученного результатта

Белок S 100 was last modified: Октябрь 18th, 2017 by Мария Салецкая

gradusnik.net

способ одновременной верификации и прогнозирования течения увеальной меланомы - патент РФ 2327420

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, а именно к офтальмоонкологии, и предназначено для одновременной верификации увеальной меланомы и прогнозирования вероятности развития ее метастазов. Способ обеспечивает упрощение исследования при высокой специфичности и чувствительности одновременной верификации увеальной меланомы и прогнозирования ее метастазирования. Проводят иммуногистохимический анализ экспрессии белка S-100 и меланина-А в опухолевых клетках с одновременным подсчетом количества S-100-позитивных клеток в поле зрения. Увеальную меланому верифицируют при положительной реакции S-100 и меланина-А с прогнозированием высокой вероятности метастазирования опухоли при наличии в ней менее 50 S-100-позитивных клеток. 1 табл., 1 ил. способ одновременной верификации и прогнозирования течения увеальной меланомы, патент № 2327420

(56) (продолжение):

tumor blood vessel morphology in primary uveal melanoma., Ophthalmology. 1993 Sep; 100(9): 1389-98.

Рисунки к патенту РФ 2327420

способ одновременной верификации и прогнозирования течения увеальной меланомы, патент № 2327420

Изобретение относится к офтальмологии, а именно к офтальмоонкологии, и предназначено для одновременной диагностики и прогнозирования метастазирования увеальной меланомы (УМ).

Согласно современным требованиям к диагностике опухолей человека каждая опухоль должна быть подтверждена не только на световом или гистологическом уровне, но и на иммуногистохимическом (ИГХ) уровне. Сегодня в распоряжении гистологов имеется широкий ряд тканедифферентационных маркеров, с помощью которых проводят верификацию опухолей. Под термином «верификация» подразумевают определение ее тканевого происхождения или гистогенез.

Для верификации УМ, как и меланомы кожи, используют несколько стандартных меланомаспецифических маркеров. К ним относятся: S-100, тирозиназа, меланин-А, НМВ-45, MITF [Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека, - под редакцией С.В.Петрова и Н.Т.Райхлина. - Казань. - 2000 г. - Стр.287]. Частота выявления этих маркеров в УМ, как и количество позитивных опухолевых клеток к этим маркерам в опухоли, по данным литературы, колеблется значительно. Это означает, что чувствительность различных меланомаспецифических маркеров при верификации меланом различных локализаций существенно варьирует. Другими словами, по данным отдельных авторов, могут возникать ситуации, когда эти маркеры не распознают меланому, при этом реакция с этим маркером будет ложно-отрицательной [Beckenkamp G., Schafer H., von Domarus D. Immunocytochemical parameters in ocular malignant melanoma.// Eur J. Cancer Clin Oncol, 1988, vol.24, p.41-45; Bumier M.N. Jr., McLean I.W., Gamel J.W. Immunohistochemical evaluation of uveal melanocytic tumors.// Cancer, 1991, vol.68, p.809-14; Femando S.S., Johnson S., Bate J. Immunohistochemical analysis of cutaneous malignant melanoma: comparison of S-100 protein, НМВ-45 monoclonal antibody and NKI-C3 monoclonal antibody. // Pathology, 1994, vol.26, p.16-19. Heegard S., Jensen O.A., Prause J.U. Immunohistochemical diagnosis of malignant melanoma of the conjunctiva and uvea: comparison of the novel antibody against melan-A with S 100 protein and HMB-45.// Melanoma Res, 2000, vol.10, p.350-354.]

В связи с чем, для уточнения ситуации, а также с целью повышения качества ИГХ-диагностики, мы попытались найти наиболее надежные и точные маркеры для верификации этих опухолей среди других внутриглазных неоплазм. Для этого мы взяли из архива нашего института парафиновые блоки тканей УМ, полученных от 82 пациентов, прооперированных более 5 лет назад, и провели собственные ИГХ-исследования. Целью этих исследований являлась оценка надежности применения того или иного маркера в диагностике или, иными словами, оценка их чувствительности. Это можно было сделать по количеству ложно отрицательных случаев. Для оценки специфичности маркеров мы также взяли и другие внутриглазные опухоли - лейомиосаркому и лимфому. Специфичность ИГХ-маркеров, как правило, анализируется по выявлению ложно позитивных реакций меланоцитарных маркеров в опухолях немеланоцитарного ряда. Попутно мы проводили ретроспективный анализ результатов ИГХ-исследования в корреляции с клиническими данными по выживаемости пациентов.

Оказалось, что практически все маркеры в подавляющем большинстве случаев (94,9-100%) дают позитивную реакцию с S-100, тирозиназой, меланином-А, HMB-45 и MITF. Однако чувствительность различных меланомаспецифических маркеров действительно различается. Справедливости ради, заметим, что эта разница оказалась намного ниже, чем описывали упомянутые авторы (см. табл.1). Результаты проведенных исследований показали, что с помощью одного S-100 нельзя с абсолютной убежденностью утверждать, что S-100-позитивная опухоль - меланома. К этому маркеру давали позитивную реакцию и опухоли миогенного ряда - лейомиосаркома. То есть идет речь о том, что этот маркер не является высокоспецифичным, как например, маркеры меланоцитарного ряда тирозиназа, меланин-А, HMB-45, MITF. Именно последние являются высоко специфичными маркерами и не дают ложно позитивных результатов. Следовательно, их присутствие необходимо для верификации меланом. Вместе с тем они дают ложно негативные результаты. Так, из 82 меланом в 1 случае реакция с тирозиназой оказалась негативной. На практике это означает, что использование только одной тирозиназы в ИГХ-диагностике привело бы к диагностической ошибке. Аналогичная ситуация сложилась бы и при использовании только одного MITF. Этот маркер также давал ложно негативную реакцию с меланомами. Идеальными меланомаспецифическими маркерами оказались НМВ-45 и меланин-А (см. табл).

способ одновременной верификации и прогнозирования течения увеальной меланомы, патент № 2327420

Как показали собственные исследования, применение двух маркеров (S-100 и одного из меланомаспецифических маркеров: меланина-А или НМВ-45) повышает степень надежности ИГХ-диагностики. Преимуществом меланина-А перед НМВ-45 является тот факт, что меланин-А окрашивает премеланосомы, в то время как НМВ-45 - зрелые меланосомы, и не окрашивает опухоли другого генеза. То есть эти два маркера отвечают за 2 различные стадии созревания меланосом. И поскольку различные популяции опухолевых клеток, как правило, находятся на разной стадии зрелости и, следовательно, на разных стадиях меланогенеза, то в УМ обязательно обнаружатся меланин-А-позитивные опухолевые клетки. Что, собственно, и получили мы эмпирическим путем.

Наш ретроспективный анализ также показал, что существует прямая тесная связь между экспрессией S-100 и выживаемостью пациентов. Этот факт по каким-то причинам не нашел отражения в литературе или просто не был замечен другими авторами. Оказалось, что чем меньше в опухоли выявляется S-100-позитивных клеток, тем хуже прогноз. Статистический ретроспективный анализ показал, что критичное количество S-100-позитивных клеток для прогноза - 50. То есть, говоря иными словами, при выявлении в опухоли менее 50 S-100-позитивных клеток вероятность развития метастазов становилась высокой и достигала 82,2%. В качестве доказательства приводим график выживаемости пациентов с двумя диаметрально противоположными показателями в опухоли. Так, согласно этому графику (см. чертеж), среди 28 пациентов, с менее 50 S-100-позитивными клетками в опухоли (страта А), метастазы развились в 9 случаях (32% случаев), а частота их 5-летней выживаемости составила 68%, соответственно. Среди 29 пациентов с способ одновременной верификации и прогнозирования течения увеальной меланомы, патент № 2327420 50 S-100-позитивных клеток в опухоли (страта В) метастазирование наступило у 5 человек (17,8% случаев), а показатель выживаемости достиг 82,2%. Разница в показателях выживаемости достоверна. Это подтверждено 3 различными тестами контроля качества проведения исследования.

В связи с чем в последующей нашей работе мы стали использовать эти два маркера в целях верификации увеальной меланомы, а количественный анализ S-100-позитивных клеток в опухоли служил нам в качестве маркера для прогнозирования метастазирования.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка такого способа, который позволял бы одновременно не только верифицировать увеальную меланому, но и прогнозировать вероятность развития ее метастазов.

Техническим результатом является решение одновременно двух задач (верификация опухоли и прогнозирование вероятности ее метастазирования) с помощью только двух маркеров (S-100 и меланина-А) и одноэтапного иммуногистохимического исследования, что обеспечивает упрощение способа с позитивным экономическим эффектом.

Технический результат достигается за счет использования двух тканедифферентационных маркеров S-100 и меланина-А, отвечающих за принадлежность опухоли к неоплазмам меланоцитарного ряда.

Предлагаемый нами способ прогнозирования осуществляют следующим образом.

1. После энуклеации глаза с увеальной меланомой готовят парафиновые срезы толщиной 3-5 микрон по стандарной методике, депарафинируют в ксилоле и регидратируют в батарее спиртов.

2. Иммуногистохимическое исследование проводят по стандартной методике. Для открытия антигенных детерминант проводят обработку срезов в цитратном буфере [рН 6,0] в течение 30 минут при 95°С на водяной бане.

3. Инкубацию с первичными антителами проводят в течение ночи при 4°С. Для визуализации реакции антиген-антитело используют стрептавидинбиотиновую тест-систему LSAB+kit [DAKO Corp] согласно инструкции. В качестве хромогена используют ДАБ+[DAKO Corp]. В качестве первичных антител используют кроличьи поликлональные антитела к S-100 (разведение 1:500, DAKO Corp) и меланина-А (разведение 1:80, DAKO Corp).

4. Затем срезы докрашивают гематоксилином Майера и заключают в канадский бальзам.

5. Реакцию оценивают с применением светового микроскопа (увеличение ×400) по следующим критериям. Отрицательной считали реакцию при отсутствии специфического окрашивания опухолевых клеток на всей площади опухолевой ткани. Положительную реакцию расценивали при окрашивании опухолевых клеток. При позитивной реакции опухолевых клеток с двумя маркерами опухоль верифицируют как увеальную меланому.

6. Количественную оценку экспрессии маркера S-100 по срезу определяют как число иммунопозитивных клеток в поле зрения микроскопа при увеличении × 400. В случае, где число S-100-позитивных клеток не достигает 50, определяют высокий риск развития метастазов. Если число S-100 позитивных клеток в опухоли более или равно 50, то считают, что риск развития метастазов для пациента невысок.

Пример 1. Пациент 54 года. Диагноз: УМ в стадии Т 3NoMo на правом глазу. Проведено органосохранное лечение в объеме иридоциклхориоидэктомии. Иммуногистохимические исследования парафинового среза опухоли по указанному способу выявили S-100-позитивную и меланин-А-позитивную опухоль, которую верифицировали как меланому. Подсчитали количество S-100-позитивных клеток на срезе УМ при увеличении × 400: их оказалось 17. Больной отнесен в группу высокого риска развития метастазов. Назначены укороченные интервалы между визитами врача. По истечении 8 месяцев наблюдения после проведенной операции у больного выявлены метастазы в печени. Проведена иммунотерапия с целью замедления скорости метастазирования.

Пример 2. Пациентка 72 лет. Перенесла энуклеацию левого глаза по поводу УМ в стадии T4NoMo. Иммуногистохимически выявили S-100-позитивную и меланин-А-позитивную опухоль, которую верифицировали как увеальную меланому. Подсчитали количество S-100-позитивных клеток. На срезе УМ при увеличении × 400 их оказалось 87. Пациент отнесен к группе низкого риска развития метастазов. Продолжительное наблюдение за пациентом в течение 3-х лет показало благоприятное течение заболевание и отсутствие метастазов.

Таким образом, предложенный способ с высокой степенью вероятности позволяет одновременно проводить как верификацию увеальной меланомы, так и оценивать прогноз ее течения, что позволяет осуществлять отбор пациентов в группу риска развития метастазов и обосновывает тактику ведения больных с данной патологией. При этом использование всего двух маркеров позволяет сократить продолжительность исследования и экономические затраты на их проведение.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ одновременной верификации увеальной меланомы и прогнозирования ее метастазирования, включающий проведение иммуногистохимического анализа экспрессии белка S-100 и меланина-А с одновременным подсчетом количества S-100-позитивных опухолевых клеток в поле зрения, и верификацию увеальной меланомы при положительной реакции S-100 и меланина-А с прогнозированием высокой вероятности метастазирования опухоли при наличии в ней менее 50 S-100-позитивных клеток.

www.freepatent.ru


Смотрите также