Иммуноконфликтная беременность. Аво антитела


Конфликт по системе АВО - изосенсибилизация по аво - запись пользователя Oblachko (kukuku) в дневнике

Конфликт по системе АВОКогда происходит конфликт по системе АВО?Конфликт по системе АВО встречается так же часто, как и резус-конфликт.Наблюдается он чаще всего тогда, когда у матери группа крови О (I), а ребенок от отца наследует содержащийся в эритроцитах антиген А или В. Может проявиться уже при первой беременности. В конфликте по системе АВО плод не болеет, а у новорожденного нет анемии. Однако проявления желтухи в первые дни жизни очень тяжелые и многие дети требуют лечения.В большинстве случаев гемолитическая болезнь новорожденных о системе АВО не повторяется у последующих детей, но и исключать ее нельзя.Поскольку жизни плода угрозы нет, массовая диагностика АВО-конфликта у беременных не проводится.Чаще всего лечение ребенка определяется течением желтухи, подтвержденной исследованиями уровня билирубина. Лечение такое же, как при резус-конфликте.

http://medkarta.com/?cat=article&id=23197

Абдрахманова Л. Р., Садыков Б. Г. Психопрофилактические особенности ведения беременности при АВО-кон

"Перинатальная психология и нервно-психическое развитие детей"Из сборника материалов конференции по перинатальной психологии, Санкт-Петербург, март 1998 г.

АВО-конфликт продолжает оставаться насущной проблемой перинатологии и требует своего решения. В отличие от резус-изоиммунизации АВО-конфликт при беременности имеет свои особенности и трудности в диагностике и ведении, приводя к ошибкам. В целях снижения перинатальной смертности и исключения возможных ошибок нами предложено диспансерное ведение беременных при АВО-несовместимости групп крови супругов с целью своевременного прогноза возможного АВО-конфликта и его установления при наличии. Для этого мы выделяем при АВО-несовместимой беременности группы риска и проводим психопрофилактическую подготовку, включая "условия комфорта".В зависимости от анамнеза, соотношения групп крови супругов, уровня и колебания титра агглютининов нами выделено три группы риска.I группа риска - это супружеская пара с несовместимостью групп крови, при сочетании 0(I)-А(II) и 0(I)-B(III), в особенности при резус-отрицательной принадлежности крови беременной.II группа риска - это женщины с первой беременностью, перенесшие в прошлом детские инфекции, воспалительные заболевания половой сферы, имеющие экстрагенитальную патологию и отягощенный акушерский анамнез (ГБН в анамнезе и самопроизвольные ранние аборты).III группа риска - это те женщины, у которых при установленном несовместимом соотношении групп крови определяется запредельный титр групповых агглютининов, а также варианты и динамика колебания титра групповых агглютининов, предложенные нами.Такой подход позволил нам своевременно и значительно точнее установить диагноз АВО-конфликта, осуществлять должное ведение и оказывать эффективную помощь как матери, так и ребенку.

http://www.psyinst.ru/library.php?part=article&id=1889

Ещё полезные ссылки:

http://www.forum.littleone.ru/archive/index.php/t-2265712.html

http://www.forum.littleone.ru/showthread.php?t=1219712

Девочки, спасибо за то, что порекомендовали Шелаеву. Действительно, она очень хороший специалист и все доходчиво разъяснила. Для тех, кто когда-нибудь найдет эту тему поиском, напишу результаты разговора с ней.

1. Внутриутробно при групповом конфликте ребенок не страдает. Поэтому рожать можно, когда угодно и каким угодно способом. Никакого сохранения, досрочного родоразрешения и вообще специальных мер не требуется.

2. Количество антител значения не имеет. Важно просто их наличие. На групповой конфликт должны брать анализ всего 2 раза - в начале беременности и в конце. Не надо смотреть ничего в динамике.

3. Рожать надо "в приличном месте" (это цитата, т.е. там, где есть реанимация новорожденных и кровь для переливания в случае, если разовьется сильная гемолитическая болезнь.Я решила в Отта и рожать.

Групповые антитела образуются по такому же принципу, как и резус антитела, только при наличии у Вас первой группы крови, а у мужа любой другой (в Вашем случае у мужа III-). Данная ситуация называется групповой (или АВО) сенсибилизацией. Нет понятия "хороший" и "плохой" титр - обнаружение групповых антител в любом титре свидетельствует о групповой сенсибилизации. Вероятность развития гемолитической болезни у ребенка и степень ее выраженности мало зависят от титра антител.В подавляющем большинстве случаев групповые антитела не влияют на внутриутробное развитие плода. Лечение лекарственными препаратами не проводится. Эффективных средств борьбы с групповыми антителами во время беременности не существует.Случаи внутриутробного развития гемолитической болезни плода крайне редки. Во время беременности необходим контроль групповых антител 1 раз в месяц и проведение УЗИ 1 раз в месяц для контроля за состоянием плода, размерами печени, количеством околоплодных вод и толщиной плаценты. При наличии иммунных анти-В антител возможно с небольшой долей вероятности развитие гемолитической болезни у ребенка, в том случае, если у него будет В (III) группа крови. Гемолитическая болезнь чаще развивается уже после родов (но далеко не во всех случаях). Течение ее обычно не тяжелое и при правильном лечении на дальнейшем развитии ребенка не отражается. Методы лечения находятся зависимости от уровня гемоглобина и билирубина у новорожденного (фототерапия, инфузионная терапия, крайне редко - заменное переливание крови). Подчёркиваю, что гемолитическая болезнь новорожденных развивается далеко не во всех случаях групповой сенсибилизации, тем не менее, после родов нужен контроль за состоянием ребенка. Если у ребенка будет О(I) группа крови, то антитела ему не страшны, гемолитической болезни быть не может.При АВО-конфликте нежелательно перенашивание, т.к. после 40 недель вероятность развития гемолитической болезни возрастает.

www.babyblog.ru

Иммуноконфликтная беременность.

10

Гемолитическая болезнь новорожденных (ГБ) – часть проблемы иммунологической несовместимости тканей матери и плода. Известно, что хорион защищает плод от влияния иммунной системы матери. Организм ее не отторгает плод вследствие локального угнетения реакций клеточного иммунитета беременной и отсутствия гликопротеидов главного комплекса гистосовместимости (HLA) в клетках трофобласта. Во время беременности имеет место угнетение клеточного имунного ответа за счет того, что хорион синтезирует в-ва , угнетающие клеточный иммунный ответ. В пользу этого свидетельствует тот факт, что экстракт из синцитиотрофобластаinvitroтормозит размножение клеток иммунной системы беременной. Отсутствие АгHLAв трофобласте человека обеспечивает защиту фетоплацентарного комплекса от распознования его иммунокомпетентными клетками беременной (HLA– главный комплекс иммуносовместимости, обеспечивающий цитотоксический иммунный ответ). Трофобласт не содержит также и Аг системы АВО иRh. Прогестерон явл. одним из основных гормонов, который ингибирует реакцию отторжения плода (высокая его концентрация блокирует клеточный иммунный ответ). ХГ обладает иммуносупрессивными свойствами и явл одним из компонентов «блокирующих свойств сыворотки», предотвращающих отторжение чужеродного для матери плода.

С другой стороны, проникновение в материнский кровоток клеток или тканей плода стимулирует ее иммунный ответ выработкой антител. Трансплацентарный перенос эритроцитов лежит в основе изоиммунизации матери к антигенам клеток крови плода. Эти антитела, попадая в через плаценту к плоду могут внутриутробно вызвать повреждения. 1,5% всех беременностей осложнено сенсибилизацией эритроцитарными Аг плода. Приблизительно 97% случаев гемолитической болезни плода и новорожденного вызвана изоиммунизацией беременной системы резус и АВО. Значительно реже она возникает вследствие несовместимости по другим эритроцитарным Аг (например, Kell,Duffy,Kidd).

Эритроцитарные антигенные состемы человека, вызывающие гемолитическую болезнь.

  1. Система АВО

- анти-А антитела (естественные, IgM, иммунныеIgG, агглютинины, гемолизины)

- анти-В (те же)

  1. Система Rh – Hr

  • анти-D антитела (иммунные)

  • анти-С (иммунные)

  • анти-с (иммунные)

  • анти-е (иммунные)

  • анти-СD(иммунные)

  • анти-f (-//-)

  1. Система Келл

  • анти-К (-//-)

  • анти-к (-//-)

  • анти-Кра

  • анти-Крb

  1. Система Даффи

  1. система МNSs – 29 антигенов

  1. Система Лютеран

- анти-Lbu

Система АВО.

Антигены А и В появляются на 3 – 6 неделе внутриутробного развития.. Антигены А и В наиболее активны в возрасте 20 – 30 лет и наименее во внутриутробном периоде (в 5 раз ниже, чем у взрослых). Особую группу представляют матери с О(I) группой крови, а у отца (плода) – А(II)., т.к. аглютинабельная активность антигена А значительно больше, чем В, титр анти-А антител выше, чем анти-В и молекулярная масса Альфа – антител у лиц с 0 (I) группой меньше, чем у лиц с кровью В (III)

Антитела альфа и бета (естественные и имунные) могут появляться внутриутробно, как правило, проникают к ребенку во время родов и поражение при несовместимости по АВО наступает после рождения. Титр антител более 1:128 говорит о наличии иммунных антител, которые появляются при парантеральной сенсибилизации (введение сыворотки, вакцины, гемотрансфузии).

Появление гемолизинов в титре более 1:4 говорит о том, что произошла сенсибилизация. Конфликт по АВО не всегда приводит к ГБН, т.к. при несовместимости по АВО эритроциты плода , попадая в материнский кровоток быстро разрушаются; образованные антитела связываются антигенами А, широко представленными в различных тканях и жидкостях организма. Переход естественных (Ig M) антител альфа от матери к ребенку блокируется плацентой.

studfiles.net

Изоиммунизация по АВО - Гематология - бесплатная консультация None - отвечает Сидоренков Александр Валериевич

Конфликт «мать— плод» возникает при несовместимости крови матери и плода, когда в крови матери образуются антитела, повреждающие эритроциты плода, что приводит к гемолитической болезни новорожденного. В основе этого явления лежит различие крови человека по группам в зависимости от наличия в эритроцитах разных антигенов, а в плазме — общегрупповых антител. Изоиммунизация может развиться в результате несовместимости крови матери и плода по системе АВО, Когда у матери О(I) группа крови, а у плода любая другая. Антигены А и В плода могут проникать во время беременности в кровоток матери, приводя к выработке иммунных альфа- и бетта- антител соответственно и развитию у плода реакции антиген-антитело. Групповая несовместимость матери и плода хотя и встречается чаще, чем несовместимость по резус фактору, гемолитическая болезнь плода и новорожденного при этом протекает легче и, как правило, не требует интенсивной терапии. Почему происходит иммунологический конфликт? Первая группа крови не содержит в эритроцитах антигенов А и В, зато имеются антитела α и β. Во всех остальных группах такие антигены есть и поэтому первая группа крови, встретившись с чужеродными для нее антигенами А или В начинает с ними «вражду», разрушая эритроциты содержащие в себе эти антигены. Именно этот процесс и является иммунологическим конфликтом по системе АВ0. Кому стоит опасаться возникновения конфликта по группе крови? Теоретически такая проблема может возникнуть в том случае, если у матери с будущим малышом оказываются разные группы крови: женщина с I или III группой крови — плод со II; женщина с I или II группой крови — плод с III; женщина с I, II или III группой — плод с IV. Самым опасным сочетанием считается, если женщина с I группой крови вынашивает ребенка со II или III. Именно такой расклад чаще всех остальных приводит к развитию всех признаков конфликта у матери с плодом и возникновению гемолитической болезни у новорожденного. В группу риска также входят женщины: - получавшие в прошлом переливание крови; - пережившие несколько выкидышей или абортов; - родившие ранее ребенка, у которого развилась гемолитическая болезнь или отставание психического развития. Возможность развития группового иммунологического конфликта по системе АВ0 существует у семейных пар имеющих следующие сочетания групп крови: женщина с I группой + мужчина со II, III или IV; женщина со II группой + мужчина с III или IV; женщина с III + мужчина со II или IV. Сенсибилизация по системе АВО не является большой проблемой. Важно знать о ней, дважды за беременность проверять титр антител и не перенашивать беременность, так как именно запоздалые роды дают самые тяжелые формы ГБН, требующие заменного переливания крови. В конфликте по системе АВО плод не болеет, а у новорожденного нет анемии. Однако проявления желтухи в первые дни жизни очень тяжелые и многие дети требуют лечения. В большинстве случаев гемолитическая болезнь новорожденных о системе АВО не повторяется у последующих детей, (то есть повторные беременности протекают как правило легче- в отличие от резус -сенсибилизации), но и исключать ее (ГБН) нельзя.Поскольку жизни плода угрозы нет, массовая диагностика АВО-конфликта у беременных не проводится. Отличительной особенностью иммуноконфликта по системе АВО является более позднее появление признаков гемолитической болезни у новорожденного. Как правило, только на 3-6-й день жизни начинает появляться желтушное окрашивание кожи ребенка, что нередко констатируется как физиологическая желтуха, и только при тяжелых формах гемолитической болезни, которая наблюдается в одном случае на 200-256 родов, своевременно устанавливают правильный диагноз. Такие несвоевременно диагностируемые формы гемолитической болезни новорожденных по системе АВО нередко оставляют последствия у детей. Будущим родителям, попадающим под риск развития такого конфликта, необходимо знать, что, во-первых, вероятность возникновения реального конфликта по группам крови на практике очень мала, а во-вторых, он чаще всего протекает гораздо легче резус-конфликта, и случаи тяжелого течения сравнительно редки, поэтому конфликт по системе АВ0 считается менее опасным для здоровья малыша.

health.mail.ru

Группа крови ABO: База знаний

Группа крови ABO – это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. Определение группы крови имеет огромное значение при переливании крови и ее компонентов.

Синонимы русские

Группа крови, определение группы крови.

Синонимы английские

ABO Grouping, Blood Typing, Blood Group, Blood Type.

Метод исследования

Реакция агглютинации.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона жирную пищу за 24 часа до исследования.
  • Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Группа крови АВO – это система, отражающая наличие или отсутствие антигенов на поверхности эритроцитов и антител в плазме крови. ABO (читается как «а-бэ-ноль») является самой распространенной системой групп крови в России.

Эритроциты на своей поверхности несут сигнальные молекулы – антигены - агглютиногены. Двумя основными антигенами, встроенными в молекулу эритроцитов, являются А и В. Группы крови определяются на основании наличия или отсутствия этих антигенов. Кровь людей, у которых на эритроцитах присутствует антиген А, относится к второй группе – A (II), кровь тех, у кого на эритроцитах – антиген В, относится к третьей группе – B (III). Если на эритроцитах присутствуют и антигены А, и антигены В – это четвертая группа – AB (IV). Бывает и так, что в крови на эритроцитах не определяется ни одного из этих антигенов – тогда это первая группа – O (I).

В норме организм вырабатывает антитела против тех антигенов (А или В), которых нет на эритроцитах – это агглютинины находящиеся в плазме крови. То есть у лиц со второй группой крови – А(II) – на эритроцитах присутствуют антигены A, а в плазме будут содержаться антитела к антигенам В – обозначаются как анти-B (бета-агглютинин). Так как одноименные антигены (агглютиногены) на поверхности эритроцитов и агглютинины в плазме (A и альфа, B и бета) вступают друг с другом в реакцию и приводят к «склеиванию» эритроцитов, они не могут содержаться в крови у одного человека.

Открытие групповой системы ABO позволило понять, почему переливание крови иногда происходило удачно, а иногда вызывало тяжелые осложнения. Было сформулировано понятие совместимости групп крови. Например, если человеку со второй группой крови – А(II), которая содержит антитела к антигену В, перелить третью группу крови – B (III), произойдет реакция между антигенами и антителами, которая приведет к склеиванию и разрушению эритроцитов и может иметь тяжелые последствия вплоть до летального исхода. Поэтому группы крови при переливании обязательно должны быть совместимы.

Группа крови определяется по наличию или отсутствию склеивания эритроцитов с использованием сывороток, содержащих стандартные антигены и антитела.

В центрах переливания крови на пакетах с кровью или с ее компонентами, полученными от доноров, помечается «O (I)», «A (II)», «B (III)» или «AB (IV)», что позволяет быстро найти кровь нужной группы, когда она требуется.

Для чего используется исследование?

Чтобы узнать, какую кровь можно безопасно переливать пациенту. Крайне важно убедиться, что донорская кровь совместима с кровью реципиента – человека, которому ее собираются переливать. Если в донорской крови или ее компонентах есть антитела к антигенам, содержащимся на эритроцитах реципиента, то может развиться тяжелая трансфузионная реакция, вызванная разрушением эритроцитов в сосудистом русле.

Когда назначается исследование?

  • Перед переливанием крови – как тем, кому оно требуется, так и донорам.

Переливание крови и ее компонентов чаще всего требуется в следующих ситуациях:

    • тяжелая анемия,
    • кровотечение, возникшее во время или после операции,
    • тяжелые травмы,
    • массивная кровопотеря любого происхождения,
    • онкологические заболевания и побочные эффекты химиотерапии,
    • нарушения свертываемости крови, в частности гемофилия.
  • Перед хирургическим вмешательством.

Что означают результаты?

Результаты показывают принадлежность крови человека к одной из четырех групп, в зависимости от наличия антигенов на эритроцитах и антител, присутствующих в крови.

Группа крови

Антитела

O (I)

α и β

A (II)

β

B (III)

α

AB (IV)

Антител α и β не будет

Что может влиять на результат?

Гемолиз сыворотки способен делать результаты недостоверными.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Терапевт, врач общей практики, гематолог, трансфузиолог, хирург.

helix.ru

Конфликт по группе крови - Гинекология - бесплатная консультация врача-гинеколога - отвечает Коноваленко Наталия Владимировна

Здравствуйте! Вам необходимо сдать анализ крови на гемолизины, либо это может звучать как исследование на иммунные антитела по системе АВО (природные, иммунные: полные, неполные). Такое исследование делают многие лаборатории. Например, в медицинском центре «Савон», где работаю я, это - анализ крови на гемолизины, в медицинской лаборатории «Дила» - исследование на иммунные антитела по системе АВО. В лаборатории «Синево» название этого исследования звучит: « Гемолизины: иммунные антитела по системе АВО». Я уверена, такой анализ делают еще во многих лабораториях Киева и других городов. Изосерологическая несовместимость (изоиммунизация) крови матери и плода – это образование антител в крови матери в ответ на проникновение антигенов плода, несовместимых либо по группе крови, либо по резус-фактору крови. Проникнув через плацентарный барьер к плоду, антитела разрушают его эритроциты, что приводит к гемолитической болезни плода, новорожденного, иногда к гибели плода, а также прерыванию беременности и другим осложнениям. Известно, что при нормальном течении беременности кровь матери и плода никогда не смешивается, так как плацентарный барьер практически непроницаем для эритроцитов. Антигены группы резус-фактора и системы АВО находятся исключительно на мембране эритроцитов, хотя в небольшом количестве они присутствуют в тканях печени, сердце, селезенке, надпочечниках. В плазме крови и в амниотической жидкости эритроцитарные антигены отсутствуют. Несовместимость по антигенам эритроцитов матери и плода не отражается на течении первой беременности. Однако во время нее происходит сенсибилизация материнского организма к чужеродным антигенам плода (чужеродным по группе крови или по системе резус-фактора). Чаще всего и тяжелее для плода изоиммунизация возникает у резус-отрицательных беременных женщин, если плод резус-положителен. Более высокий риск изоиммунизации возникает при осложненном течении беременности: угроза преждевременного прерывания, поздний токсикоз, отслойка хориона или плаценты, плацентарная недостаточность. При всех перечисленных осложнениях может произойти попадание крови плода (достаточно 0,1 мл) в кровоток матери (плодово-плацентарная трансфузия), что вызывает активацию иммунологических реакций по образованию антител. Женщина может быть сенсибилизирована до наступления беременности, если ей переливали кровь без учета резус-фактора или ранее были искусственные и самопроизвольные аборты, внематочная беременность, оперативное родоразрешение (кесарево сечение, ручное вхождение в матку и др.). Изоиммунизация по системе АВО возможна, если мать имеет 0(1) группу крови, а плод – А (П) или В (Ш). Антитела к А - и В - антигенам всегда присутствуют в организме человека с 0(1) группой крови, поэтому предварительной сенсибилизации для их образования не нужно. Во время первой беременности антитела к А- или В-антигенам могут проникать в кровоток плода и, связываясь с его эритроцитами, приводить к гемолизу и анемии. Гемолитическая болезнь новорожденного по системе АВО не протекает так тяжело, как при несовместимости по антигенам системы резус (Rh). Это объясняется тем, что антитела А и антитела В относятся к иммуноглобулинам класса М и не проникают через плаценту, тогда как анти-резус-антитела относятся к иммуноглобулинам класса G, имеют маленькую молекулу и легко проникают через плаценту, оболочки и вызывают повреждение плода. Как я уже сказала выше, изосерологический конфликт по системе АВО может возникать у первобеременных и способен повторяться при последующих беременностях. У подавляющего большинства изосенсибилизированных женщин с каждой последующей беременностью увеличивается вероятность усиления степени тяжести поражения плода, особенно у женщин, не получавших необходимую терапию и профилактику развития изосенсибилизации. При групповой несовместимости крови матери и плода происходит внутрисосудистый лизис (растворение) эритроцитов, но это имеет место вдали от печени и селезенки, где возникает образование антител. В этом случае разрушенные (лизированные) эритроциты не являются сильными, активными антигенами. У женщин-вирусоносителей (грипп, герпес, гепатит, цитомегаловирусная (ЦМВ) инфекция и др.) и перенесших малярию, частые простудные и воспалительные заболевания, уже в первую беременность может развиться сенсибилизация к антигенам плода и наблюдаться рождение ребенка с гемолитической болезнью (ГБ). Сочетание изосенсибилизации с вирусной инфекцией значительно отягощает исход беременности для плода. Антигены системы АВО обладают выраженной антигенностью. Следует помнить, что сенсибилизация к антигенам этой системы может возникнуть и в детском возрасте как следствие прививок. Отличительной особенностью иммуноконфликта по системе АВО является более позднее появление признаков ГБ у новорожденного. Как правило, только на 3-6-й день жизни начинает появляться желтушное окрашивание кожи ребенка, что нередко констатируется как физиологическая желтуха, и только при тяжелых формах ГБ, которая наблюдается в одном случае на 200—256 родов, своевременно устанавливают правильный диагноз. Такие несвоевременно диагностируемые формы гемолитической болезни новорожденных по системе АВО нередко оставляют последствия у детей. При сочетании групповой и резус - несовместимости резус-сенсибилизации обычно не происходит в связи с разрушением эритроцитов плода (носителей резус-фактора) анти-А- и анти-В-антителами матери (конкуренция двух систем). Эритроциты плода по выходе в материнский кровоток сразу же, еще будучи в межворсинчатом пространстве, блокируются α- или β-антителами матери и иммунологический конфликт предотвращается. Дальнейшей сенсибилизации ни по одной, ни по другой системе не происходит. Сочетание групповой и резус - несовместимости крови матери и плода улучшает прогноз и исход родов. Процесс сенсибилизации — реакция строго специфическая. ГБ плода (новорожденного) относится к разряду прогнозируемых заболеваний, так как одним из условий его развития является повышенная чувствительность к антигенам эритроцитов плода (т. е. наличие сенсибилизации). При иммунологическом конфликте по системе АВО развивается только послеродовая желтушная и/или анемическая — нетяжелые формы — гемолитической болезни новорожденного. Это подтверждает положение, что α- и β - агглютинины могут проникать через плаценту только во время родов, но не во время беременности. Всего Вам доброго!

health.mail.ru

способ титрования групповых антител системы аво - патент РФ 2526820

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для титрования групповых антител системы АВО. Для определения титра естественных антител в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений сыворотки крови. Инкубируют полученные смеси 20-25 минут при температуре 21-23°C. Далее центрифугируют и определяют титр по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты. Для определения титра полных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводя ее в четыре раза. Затем прогревают сыворотку в разведении 1:4 в течение 10 минут при температуре 70°. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4. Далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси 20-25 минут при температуре 21-23°C, центрифугируют и определяют титр исследуемых антител. Для определения титра неполных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза. Затем прогревают разведенную сыворотку крови в течение 10 минут при температуре 70°C. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4. Далее в каждую колонку гелевой карты с реактивом Кумбса вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси, оставляя гелевую карту или карты с реактивом Кумбса на 20-25 минут при температуре 37°C. После чего гелевую карту или карты с реактивом Кумбса центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты. Использование ланного способа позволяет предотвращать антитело-опосредованной реакции отторжения при проведении АВО-несовместимых трансплантаций органов. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, может быть использовано для предотвращения антитело-опосредованной реакции отторжения при проведении АВО-несовместимых трансплантаций органов.

Недостаток донорских органов приводит к увеличению числа пациентов, ожидающих трансплантацию. Одним из путей, дающих возможность увеличить число доноров печени, почки, сердца, является преодоление иммунологического барьера - АВО-несовместимости. Несовместимость по АВО зачастую приводит к отказу от подходящего по другим параметрам донора. Трансплантация АВО-несовместимого органа может привести к реакции опосредованного антителами молниеносного отторжения (hyperacute rejection). В зависимости от распределения групп крови в различных популяциях исключаются около 30-35% потенциальных доноров вследствие несовместимости по АВО.

Первые АВО-несовместимые трансплантации были проведены в середине прошлого века, однако результат был негативным в связи с реакцией молниеносного отторжения.

После введения в практику специфических анти-А или анти-В иммуносорбционных колонок (Glycosorb®) и анти-CD2O моноклональных антител (rituximab) в различных терапевтических режимах, АВО-несовместимая почечная трансплантация стала обычной процедурой в европейских странах, особенно в Швеции и Германии (Tyden G, Kumlien G, Genberg H, et al. (2005) ABO-incompatible kidney transplantations without splenectomy, using antigen-specific immunoadsorption and rituximab. Am JTransplant, 5:145-148).

Разработка предоперационного протокола подготовки для достижения целевого титра анти-А/В<1:16 в последние годы дала возможность снизить и поддерживать анти-А/В титры против группы опосредованной реакции отторжения, и проводить АВО-несовместимые трансплантации от доноров.

Основным фактором выживания трансплантата в этих случаях является предотвращение молниеносной реакции отторжения и установление аккомодации. Аккомодация означает отсутствие реакции антиген-антитело несмотря на наличие «чужеродного» антигена на эндотелиальных клетках сосудов трансплантата и наличие антител в крови реципиента (Takahashi КА. (2005) New concept of accomodation in ABO-incompatible kidney transplantation. Clin Transplant 19:Suppl 14, 76-85).

Точное определение титров групповых агглютининов системы АВО позволяет выбрать адекватную схему предоперационного протокола подготовки пациентов, надежно контролировать течение послеоперационного периода со своевременным определением показаний для назначения соответствующей корригирующей терапии при проведении АВО-несовместимых трансплантаций органов.

Важно отметить, что реципиентами части печени в большинстве случаев являются дети. Известно, что у детей титры агглютининов ниже, чем у взрослых из-за несовершенства иммунной системы, которая достигает зрелости к 5-10 году жизни. В этих случаях предъявляются особые требования к точности титрования групповых агглютининов.

Известен рекомендуемый Приказом МЗ РФ № 2 от 09.01.1998 метод титрования антител в солевой среде на плоскости (Изогемагглютинирующий тест серийных разведений в солевой среде на плоскости - Приказ МЗ РФ № 2 от 09.01.1998 г. Об утверждении инструкций по иммуносерологии), который выбран нами в качестве прототипа.

Он регламентирует определение титров естественных способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 и способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 антител, полных иммунных антител системы АВО, и неполных иммунных антител системы АВО с проведением исследований на белых пластинах со смачиваемой поверхностью с использованием не менее 1 мл сыворотки крови в каждой реакции. Известный способ предполагает выполнение разведений сыворотки крови, смешивание их с 3% взвесью стандартных эритроцитов, длительную инкубацию (45-60 минут) и оценку результатов по наибольшему разведению сыворотки, в котором наступила агглютинация стандартных эритроцитов. Причем для определения титров иммунных антител требуется предварительная подготовка сыворотки в виде специального разведения и прогревания.

Как оказалось на практике, способ-прототип является не достаточно чувствительным и наглядным, что негативно сказывается на результатах АВО-несовместимых трансплантаций, требует длительного времени для проведения исследования.

Известна также микротипирующая гелевая технология, предложенная французским ученым Y. Lapierre в 1986 году. Эта технология использует комбинацию методов агглютинации и гель-фильтрации. Все реакции проводятся в пластиковых диагностических карточках - ID-гелевая система, колонки которых содержат специальный гель, к которому добавляют эритроциты и сыворотки. После центрифугирования агглютинированные эритроциты задерживаются в верхних слоях геля, в то время как неагглютинированные эритроциты, беспрепятственно пройдя через гель, образуют осадок на дне пробирок.

Однако гелевая технология предназначена для скрининга антител, другими словами - для «качественной оценки» реакции антиген-антитело (установления самого факта произошедшей реакции).

Только в одной работе, ранее опубликованной нами, содержатся сведения об использовании гелевой технологии для титрования естественных антител (способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 и способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 агглютининов системы АВО) (Готье С.В., Цирульникова О.М. и др. Опыт АВО-несовместимых трансплантаций печени. Вестник трансплантологии и искусственных органов, 2011, № 2, с.21-28).

Однако использование гелевых карт, содержащих модифицированный Sephadex с нанесенным на него IgG (кролика), C3d-компонентом системы комплимента фирмы Diamed для титрования естественных антител, не позволило получить стабильные результаты, что было подтверждено постановкой параллельных реакций солевым методом на плоскости. Результаты титрования были противоречивыми, надежную методику титрования отработать не удалось.

Нами поставлена задача - создать лабораторный метод, позволяющий точно, надежно и наглядно производить титрование групповых антител системы АВО, в том числе у пациентов с низкой исходной концентрацией агглютининов в крови; более экономный в плане расходования сыворотки крови, требующий меньших временных затрат.

Технический результат, достигаемый при осуществлении предлагаемого способа, заключается в повышении точности, чувствительности титрования естественных, полных и неполных иммунных антител системы АВО, обеспечении его наглядности, снижении травматичности за счет использования микродоз крови обследуемого, что особенно важно в педиатрии, а также в упрощении способа за счет сокращения времени проведения исследования.

Разработанный нами способ позволяет точнее на 1-3 разведения сыворотки крови, по сравнению с прототипом, определять титр исследуемых антител; выявлять появление сенсибилизации пациента на более ранних стадиях ее развития. Он является более наглядным, поскольку исключает трудно интерпретируемые результаты за счет возможности проведения визуальной оценки реакции агглютинации в толще колонки гелевой карты; требует меньше времени для проведения исследования за счет сокращения времени инкубации реагентов. При этом результаты могут быть сохранены для сравнения с результатами дальнейших исследований, что невозможно при титровании по способу-прототипу.

Нами эмпирически подобраны режимы, обеспечивающие возможность титрования агглютининов системы АВО с помощью гелевых карт, то есть возможность «количественной оценки» реакции антиген-антитело при больших разведениях сыворотки крови, как это необходимо при подготовке больных к АВО-несовместимым трансплантациям.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Предложен способ титрования групповых антител системы АВО, при котором определяют титры естественных антител, полных иммунных антител, неполных иммунных антител.

Для определения титра естественных антител используют 200-400 мкл сыворотки крови. Готовят ее разведения. Далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси, оставляя нейтральную гелевую карту или карты на 20-25 минут при температуре 21-23°C. После чего нейтральную гелевую карту или карты центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты.

Для определения титра полных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови. Разводят ее в четыре раза. Затем прогревают сыворотку в разведении 1:4 в течение 10 минут при температуре 70°C. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки, разведенной 1:4. Далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси, оставляя нейтральную гелевую карту или карты на 20-25 минут при температуре 21-23°C. После чего нейтральную гелевую карту или карты центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты.

Для определения титра неполных иммунных антител используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза. Затем прогревают разведенную сыворотку крови в течение 10 минут при температуре 70°C. Готовят последующие разведения прогретой сыворотки, разведенной 1:4. Далее в каждую колонку гелевой карты с реактивом Кумбса вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений. Инкубируют полученные смеси, оставляя гелевую карту или карты с реактивом Кумбса на 20-25 минут при температуре 37°C. После чего гелевую карту или карты с реактивом Кумбса центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты.

Способ осуществляется следующим образом.

Перед АВО-несовместимой трансплантацией для определения схемы предоперационной подготовки, а также в послеоперационном периоде для своевременного назначения адекватного лечения с учетом титров групповых антител системы АВО проводят определение этих титров.

Производят забор крови у пациента, методом центрифугирования отделяют сыворотку крови, в которой определяют титр естественных (нормальных) и иммунных (полных и неполных) антител системы АВО.

Для определения титра естественных и полных иммунных антител могут быть использованы, например, нейтральные гелевые карты Bio-Rad ID-Card способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 NaCl, Enzyme Test and Cold Agglutininsспособ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 , для определения неполных иммунных антител - карты LISS/Coombs Anti-IgG+C3d.

Для проведения исследования могут быть использованы следующие реагенты и оборудование:

- стандартные эритроциты группы A1 (II) и В (III) ID-DiaCell АВ0 0,8% Bio-Rad или Grifols SerigrupDiana A1 /B,

- изотонический 0,9% раствор NaCl

- культуральный планшет для разведения сыворотки (вместо него можно использовать пробирки типа эппендорф, планшет для ИФА),

- термостат 37°C,

- центрифуга для гелевых карт ID-Centrifuge 12 SII для колоночных карт,

- термостат на 70°C,

- дозаторы с переменным объемом от 25 до 200 мкл.

Для определения способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 и способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 естественных антител класса Ig M сыворотку, полученную в результате центрифугирования крови пациента, последовательно разводят в планшете от 1:1 до 1:1024.

1. Начиная со второй лунки в каждую лунку планшета вносят 200 мкл изотонического раствора NaCl.

2. В первую и во вторую лунку вносят по 200 мкл неразведенной сыворотки.

Во второй лунке сыворотку перемешивают пипетированием с раствором NaCl, затем 200 мкл разведенной сыворотки переносят в третью лунку, где перемешивают и переносят в четвертую лунку и так далее до последней лунки, где получают разведение 1024.

3. Подписывают гелевую нейтральную карту - Ф.И.О. пациента, дата исследования, разведение сыворотки.

4. В каждую колонку гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов A1, если определяют титр способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 изоагглютининов, или 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов В, если определяют титр способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 изоагглютининов. При необходимости определения одновременно титра способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 и способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 антител количество колонок удваивается.

5. В первую колонку вносят 25 мкл неразведенной сыворотки, во вторую и последующие колонки вносят по 25 мкл сыворотки каждого разведения.

6. Карты оставляют на 20-25 минут при комнатной температуре для реакции агглютинации.

7. Затем карты центрифугируют при стандартном режиме в центрифуге для карт 10 минут и оценивают результаты.

Титром считается последнее разведение, при котором в толще колонки гелевой карты будут наблюдаться сагглютинированные эритроциты (следующая колонка, в которой все эритроциты осели на дно, уже считается отрицательной).

Определение иммунных антител системы АВО (анти-А и анти-В) проводят следующим образом.

Исследуемую сыворотку в пробирке эппендорф разводят в четыре раза изотоническим 0,9% раствором NaCl (например, 100 мкл сыворотки+300 мкл NaCl), затем прогревают в течение 10 минут при 70°C. Таким образом получают прогретую сыворотку с разведением 1:4.

Далее, для определения полных иммунных антител титруют прогретую сыворотку по методике определения титра естественных групповых антител, описанной нами выше, с применением нейтральных гелевых карт. Сыворотку, полученную в результате центрифугирования крови пациента, разведенную 1/4, прогретую, последовательно разводят в планшете от 1:4 до 1:1024.

1. Начиная со второй лунки в каждую лунку планшета вносят 200 мкл изотонического раствора NaCl.

2. В первую и во вторую лунку вносят по 200 мкл прогретой разведенной 1:4 сыворотки.

Во второй лунке сыворотку перемешивают пипетированием с раствором NaCl, затем 200 мкл разведенной сыворотки переносят в третью лунку, где перемешивают и переносят в четвертую лунку и так далее до последней лунки, где получают разведение 1:1024.

3. Подписывают гелевую нейтральную карту - Ф.И.О. пациента, дата исследования, разведение сыворотки.

4. В каждую колонку гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов A1, если определяют титр - Анти-А, и 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов В, если определяют титр Анти-В. При необходимости определения одновременно титра анти-А и анти-В антител количество колонок удваивается.

5. В первую колонку вносят 25 мкл разведенной 1:4 сыворотки, во вторую и последующие колонки вносят по 25 мкл сыворотки каждого разведения.

6. Карты оставляют на 20-25 минут при комнатной температуре для реакции агглютинации.

7. Затем карты центрифугируют при стандартном режиме в центрифуге для карт 10 минут и оценивают результаты.

Титром считается последнее разведение, при котором в толще колонки гелевой карты будут наблюдаться сагглютинированные эритроциты (следующая колонка, в которой все эритроциты осели на дно, уже считается отрицательной).

Для выявления неполных иммунных IgG антител (анти-А и анти-В), выполняют следующие операции.

Сыворотку, полученную в результате центрифугирования крови пациента, разведенную 1/4, прогретую, последовательно разводят в планшете от 1:4 до 1:1024.

1. Определение неполных иммунных антител начинают последующим разведением прогретой сыворотки изотоническим раствором NaCl в культуральном планшете, как для естественных изоагглютининов. Начиная со второй лунки, в каждую лунку вносят 200 мкл изотонического раствора NaCl.

2. В первую и во вторую лунку вносят по 200 мкл прогретой сыворотки с разведением 1/4. Во второй лунке сыворотку перемешивают с раствором NaCl, используя пипетку, затем 200 мкл разведенной сыворотки переносят в третью лунку, где перемешивают, и 200 мкл переносят в четвертую лунку и так далее до последней лунки, где получается разведение 1/4096. Если сыворотка титруется второй раз и известен ее последний титр, то достаточно внести в карточку последнее известное разведение+2 разведения.

3. Подписывают гелевые карты LISS/Coombs Anti-IgG+C3d (Ф.И.О. пациента, дата исследования, разведение сыворотки).

4. Затем в каждую колонку гелевой карты Liss/Coombs вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов A1, если определяем титр анти-А, и эритроцитов В, если определяем титр анти-В. При необходимости определения одновременно титра Анти-А и Анти-В антител количество колонок удваивается.

5. В первую колонку вносят 25 мкл сыворотки с разведения 1/4, во вторую и последующие колонки вносят по 25 мкл последовательно разведенных сывороток в соответствующие колонки.

6. Карты оставляют на 20-25 минут при 37°C для реакции агглютинации.

7. Затем карты откручивают в центрифуге при стандартном режиме для карт 10 минут.

Оценивают результаты: титром антител считается последнее разведение, при котором в толще колонки гелевой карты будут наблюдаться сагглютинированные эритроциты (следующая колонка, в которой все эритроциты осели на дно, уже считается отрицательной.).

В результате исследования выявляются естественные антитела - агглютинины способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 и способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 (термолабильные) и иммунные полные и неполные анти-А и анти-В антитела (термостабильные).

Высокий титр естественных агглютининов (способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 выше чем 1:256 и способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 выше чем 1:128) при отсутствии иммунных антител в момент исследования отражает состояние повышенной сенсибилизации организма, что позволяет сделать предположение о бывшем в прошлом поступления антигена, несовместимого по АВО системе.

Выявление иммунных антител свидетельствует об имевшем место поступлении в организм человека антигена, несовместимого по АВО системе.

Отсутствие иммунных термостабильных антител при титре естественных изоагглютининов способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 не выше чем 1:256 и способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 не выше чем 1:128 говорит об отсутствии у человека изоиммунизации групповыми факторами системы АВО.

Для доказательства возможности осуществления заявленного изобретения с достижением указанного назначения и технического результата приводим следующие данные.

Нами проведено титрование изоагглютининов по предложенному способу при 38 разногруппных трансплантациях. Для одного пациента, в среднем, проводилось от 2 до 5 титрований до операции и от 5 до 30 титрований после операции (АВО-несовместимой трансплантации). Всего было выполнено 680 титрований. Во всех исследованиях получены результаты, в зависимости от которых проводилась предоперационная подготовка пациентов и их ведение в послеоперационном периоде.

110 титрований были поставлены в параллели с общепринятым солевым методом на плоскости. В 90% случаев разница с солевым методом (способ-прототип) составляла от 1 до 3 разведений. Причем агглютинация была выявлена при проведении заявляемого способа при большем разведении сыворотки.

Клинический пример.

Пациент М., 03.10.2011 г. рождения. Диагноз: цирроз печени в исходе болезни Caroli. Группа крови 0(I) Rh-фактор положительный.

18.06.2012 г. пациенту была проведена операция трансплантации части печени от донора-родственника - группа крови А(II), Rh-фактор положительный.

При исследовании сыворотки крови пациента до операции методом серийных разведений в солевой среде на плоскости определился титр естественных способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 -антител 1/16, титр иммунных полных антител 0, неполных антител 1/16. При таких исходных показателях предоперационная подготовка с целью снижения титра антител не требуется.

Одновременно проводилось титрование тех же проб сывороток по предложенному способу, титры антител соответственно были равны 1/64; 0; 1/64, что потребовало предоперационной подготовки в виде введения мабтеры, проведения пяти процедур плазмафереза с 8.06.2012 по 17.06.2012 с целью уменьшения титра естественных и неполных иммунных антител в крови пациента. В результате, ко дню операции, титр естественных способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 -антител снизился до 1/1 в геле и до 0 - в солевом методе, титр иммунных неполных анти-А в геле снизился до 1/4. В послеоперационном периоде естественные и полные иммунные групповые антитела не определялись в обоих методах титрования, титр неполных антител в солевом методе не определялся, в предлагаемом методе - постепенно снижался с 1:4 до 0. На фоне проводимой терапии в настоящее время антитела у пациента не определяются.

Таким образом, разница в результатах двух методов была в 1-3 разведения, более чувствительным был предлагаемый способ титрования.

Клинический пример

Пациент Л., 19 лет. Диагноз: Врожденная аномалия развития мочевыделительной системы. Аплазия правой почки. Состояние после пластики гидронефроза слева. ХПН, терминальная стадия. Нефрогенная анемия. Группа крови 0(I), Rh-фактор положительный.

01.03.2012 г. пациенту была проведена операция родственной аллотрансплантации почки справа от донора- родственника - группа крови А(II), Rh-фактор положительный.

При исследовании сыворотки крови пациента до операции методом серийных разведений в солевой среде на плоскости определился титр естественных способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 -антител 1/32, титр иммунных полных антител 1/8, неполных антител 1/4.

Одновременно проводилось титрование тех же проб сывороток по предложенному способу, титры антител соответственно были равны 1/128; 1/16; 1/16, что потребовало предоперационной подготовки в виде введения мабтеры 15.02.2012 г. и проведения четырех процедур анти-А иммуносорбции с 22.02.2012 по 29.02.2012 г. с целью уменьшения титра естественных, полных и неполных иммунных антител в крови пациента. В результате, ко дню операции, титр естественных способ титрования групповых антител системы аво, патент № 2526820 -антител снизился до 1/8 в геле и до 0 - в солевом методе, титр иммунных полных анти-А снизился до 1/8 (в солевом методе 1:4) и титр полных антител до 1/16 в геле (в солевом 1:4).В послеоперационном периоде титр естественных антител в геле был 1:4 (в солевом методе антитела не определялись), полные иммунные групповые антитела не определялись в обоих методах титрования, титр неполных антител в солевом методе не определялся, в предлагаемом методе - 1/8 постепенно снижался до 1/4. На фоне проводимой терапии в настоящее время антитела у пациента не определяются.

Таким образом, разница в результатах двух методов была в 1-3 разведения, более чувствительным был предлагаемый способ титрования

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ титрования групповых антител системы АВО, при котором определяют титр естественных антител, для чего используют 200-400 мкл сыворотки крови, готовят ее разведения, далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений, инкубируют полученные смеси, оставляя нейтральную гелевую карту или карты на 20-25 минут при температуре 21-23°C, после чего нейтральную гелевую карту или карты центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты; определяют титр полных иммунных антител, для чего используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза, затем прогревают в течение 10 минут при температуре 70°C, готовят разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4, далее в каждую колонку нейтральной гелевой карты вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений, инкубируют полученные смеси, оставляя нейтральную гелевую карту или карты на 20-25 минут при температуре 21-23°C, после чего нейтральную гелевую карту или карты центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты; определяют титр неполных иммунных антител, для чего используют 100-200 мкл сыворотки крови, разводят ее в четыре раза, затем прогревают в течение 10 минут при температуре 70°C, готовят разведения прогретой сыворотки с разведением 1:4, далее в каждую колонку гелевой карты с реактивом Кумбса вносят 50 мкл 0,8% взвеси стандартных эритроцитов и 25 мкл одного из приготовленных разведений, инкубируют полученные смеси, оставляя гелевую карту или карты с реактивом Кумбса на 20-25 минут при температуре 37°C, после чего гелевую карту или карты с реактивом Кумбса центрифугируют и определяют титр исследуемых антител по предельному разведению, при котором выявляется видимая агглютинация в толще колонки гелевой карты.

www.freepatent.ru


Смотрите также