Методики определения резус-нринадлежности крови. Антитела системы резус


Характеристика анти-а, анти-в антител

Естественные антитела анти-А, анти-В принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Выработанные в процессе иммунизации А или В антигеном анти-А, анти-В антитела являются иммунными и принадлежат к иммуноглобулинам класса G. Они вырабатываются в результате полигенного воздействия группоспецифических субстанций А и В на организм человека: инфекционные заболевания, медицинские профилактические прививки, потребление продуктов животного и растительного происхождения, гетероспецифическая беременность, гемотрансфузии иногруппной крови. Анти-А, анти-В антитела в сыворотках большинства людей представляют собой смесь естественных и иммунных антител (смесь иммуноглобулинов классов М и G).

Вследствие структурных особенностей иммуноглобулинов класса М (пентамерное образование с десятью активными центрами), естественные анти-А, анти-В антитела способны связывать большое количество эритроцитов и вызывать прямую агглютинацию в солевой среде. Это свойство естественных антител используется при приготовлении типирующих стандартов для выявления антигенов эритроцитов системы АВ0.

Кроме того, высокая активность анти-А, анти-В антител определяет клиническую значимость указанных антител в развитии посттрансфузионных реакций при трансфузиях несовместимой по антигенам АВО крови.

Доноры группы крови 0, имеющие Ig G анти-А, анти-В антитела, являются «опасными универсальными донорами», т.к. трансфузия их эритроцитов, содержащих даже небольшое количество плазмы, реципиентам А, В, АВ может приводить к посттрансфузионным осложнениям.

Гипопластический тип крови

Тип крови, при котором могут отсутствовать агглютинины α и/или β относится к гипопластическому типу крови. Этот феномен встречается:

  1. В результате генетического выпадения при наследовании группы крови.

  2. При различных заболеваниях, связанных с выраженной гипопротеинемией (сепсис, вирусные и бактериальные инфекции, ожоговая болезнь, туберкулезная интоксикация, онкологические и гематологические заболевания)

  3. У детей до 1 года жизни и у пожилых людей как вариант нормы.

Гипопластический тип крови выявляется при перекрестном способе определения групповой принадлежности крови. Он выражается в отсутствии агглютинации со стандартными эритроцитами А(II) и/или B(III) группы.

Рекомендации при переливании компонентов крови:

Переливать эритромассу одногруппную, плазму АВ(IV).

Экстраагглютинины

Landsteiner с сотрудниками (1926 г.) обнаружили, что сыворотки некоторых людей групп А2(II) и A2B(IV) содержат особый экстраагглютинин–α1,который может быть использован для выделения антигена А1. У некоторых лиц, принадлежащих к группе А1(II) или A1B(IV), в сыворотке может содержаться экстраагглютинин α2.

Обнаруживаемые в сыворотке человека такого рода агглютинины назвали «иррегулярными», т.е. непостоянными.

Экстраагглютинины чаще всего встречаются при системных заболеваниях, беременности, сепсисе.

Частота встречаемости экстраагглютининов α1 и α2 среди лиц А(II) и AB(IV) групп:

- α1в А(II) - 1 - 2 % случаев

- α1 в AB(IV) - 26 % случаев

- α2в А(II) и AB(IV) - 0,1 % случаев

Экстраагглютинины α1 и α2 выявляются при перекрестном способе определения групповой принадлежности крови.

Экстраагглютинин α1определяется в виде агглютинации со стандартными эритроцитами А(II) группы.

Экстраагтлютинин α2 (анти - Н) определяется в виде агглютинации состандартными эритроцитами 0(I) группы.

Экстраагглютинины могут быть:

- холодовыми - активны при комнатной температуре и неактивны при температуре человеческого тела; при добавлении теплого физ.раствора агглютинация исчезает;

-тепловыми - активны при температуре человеческого тела; при добавлении теплого физиологического раствора агглютинация не исчезает или даже усиливается.

Экстраагглютинины могут послужить причиной осложнений после переливания совместимой в групповом отношении крови.

Рекомендации при переливании компонентов крови:

- A2(II) с экстраагглютином α1 - переливать эритромассу 0(I) группы, плазму А(II) группы.

- A2B(1V) с экстраагглютинином - переливать эритромассу В(III) группы, плазму AB(IV) группы.

- А(II) с экстраагглютинином α2- переливать эритромассу с индивидуальным подбором, плазму А(II) группы.

- AB(IV) с экстраагтлютинином α2- переливать эритромассу В(III) группы, плазму AB(IV) группы.

studfiles.net

РЕЗУС-ФАКТОР — Большая Медицинская Энциклопедия

РЕЗУС-ФАКТОР (rhesus — по названию вида обезьян Macacus rhesus) — система аллогенных антигенов крови человека, независимая от факторов, обусловливающих группы крови (система AB0), и других генетических маркеров.

Р.-ф. человека был открыт в 1940 г. К. Ландштейнером и А. Винером. Название «резус-фактор» система антигенов получила в связи с тем, что ее антиген был обнаружен у человека с помощью сыворотки кролика, иммунизированного эритроцитами обезьяны вида Macacus rhesus. Р.-ф. в наибольшей степени выражен в эритроцитах. Менее четко он представлен в лейкоцитах и тромбоцитах. В плазме крови Р.-ф. не обнаружен.

Насчитывается шесть основных антигенов Р.-ф. Длй обозначения этой системы антигенов в равной мере используют две номенклатуры: номенклатуру Винера и номенклатуру Фишера — Рейса. Согласно первой — антигены Р.-ф. обозначают символами Rh0, rh', rh", Hr0, hr', hr"; согласно второй — используют буквенные обозначения: D, С, Е, d, с, е. Нередко пользуются двумя номенклатурами одновременно. В этом случае символы одного из обозначений помещают в скобки. Большое число вариантов антигенов в Р.-ф. позволило Роузенфилду (R. Е. Rosenfield) с соавт. в 1962 году предложить новую цифровую номенклатуру обозначения Р.-ф. Она включала резус-антигены от Rh 1 до Rh 35.

Синтез антигенов Р.-ф. контролируется генами первой пары хромосом. Наличие в эритроцитах Р.-ф. кодируется шестью генами, сцепленными по три на одной хромосоме. Аллельными являются пары генов, контролирующие антигены D—d, С—С и Е—е, т. к. каждый индивидуум содержит шесть генов, контролирующих синтез Р.-ф. Однако фенотипически может обнаруживаться меньшее число антигенов (пять, четыре, три), что зависит от числа томозиготных локусов у индивидуума.

Антиген (фактор) Rh0(D) — основной антиген в Р.-ф., имёюгций наибольшее практическое значение. Он содержится в эритроцитах 85% людей, проживающих в Европе. Антиген Rh0(D) не является однородным, он включает в себя ряд более мелких субъединиц — RhA, RhB, RhC, RhD, вследствие различия к-рых иногда развивается гемолитическая болезнь новорожденных (см.) у резус-положительных матерей.

На основании наличия в эритроцитах антигена Rh0(D) выделяют резус-положительную кровь. Кровь людей, эритроциты к-рых лишены этого антигена, относят к резус-отрицательному типу. Иначе подходят к донорам с кровью резус-отрицательного типа. Их эритроциты не должны содержать ни одного из трех антигенов — Rh0(D), rh'(C), rh"(E). Такой подход к оценке резус-принадлежности доноров позволяет исключить возможность сенсибилизации реципиента к этим антигенам и в значительной степени снизить опасность посттрансфузионных осложнений. Антиген Rh0(D) в 1,5% случаев встречается в слабо выраженном генетически обусловленном варианте — разновидности Du. Антиген Rh0(D) неравномерно распространен среди представителей отдельных рас. По мере продвижения с запада на восток частота его наличия существенно изменяется. У европейского населения частота встречаемости лиц с резус-отрицательным типом крови составляет 15%, а у монголоидных рас — ок. 0,5%. Подавляющее число жителей Азии являются носителями антигена Rh0(D), поэтому среди беременных женщин иммунологические конфликты по Р.-ф., встречаются реже, чем среди беременных женщин европейского населения.

Аллельным к гену антигена Rh0(D) является ген антигена Hr0(d). Существование антигена Hr0(d) не доказано, так как к нему не получена соответствующая антисыворотка. Ожидаемая частота встречаемости этого антигена среди европейского населения составляет ок. 63% .

Ко второй паре антигенов, контролируемых аллельными генами, относятся антигены rh'(C) и hr'(c). Антиген rh'(С) был открыт А. Винером в 1941 г. с помощью сыворотки крови, полученной от больного с гемолитической реакцией, возникшей после переливания крови. Частота встречаемости его составляет около 70%. Имеется несколько вариантов этого антигена (Cw, Сх), отличающихся по степени выраженности. Редкая встречаемость этих вариантов (Cw — 2,5, Сх — 0,001%) определяет их малую значимость. Антиген hr'(с) был открыт двумя годами' позже с помощью сыворотки крови резус-положительной женщины, к-рая родила ребенка с гемолитической желтухой. Частота встречаемости hr'(c) составляет ок. 80%.

Третью пару антигенов, синтез к-рых контролируется аллельными генами, составляют антигены rh"(E) и hr"(e). Антиген rh" (Е) был открыт А. Винером в 1943 году. Частота встречаемости антигена составляет ок. 30% среди европейского населения. Антиген hr"(e) был открыт Мурантом (A. E. Mourant) в 1945 г. Частота встречаемости -этого антигена ок. 97%. М. А. Умнова (1976) отмечает следующую частоту встречаемости антигенов Р.-ф. среди русских: Rh0(D)—85,03%, rh'(C) — 70,75% „ rh"(E) — 31,03% , hr'(c) -84,04% , hr"(e) — 96,76% .

Очень редко кровь человека не дает положительных результатов ни с одной сывороткой крови против антигенов Р».-ф. Эритроциты такой крови обозначают Rh null. Эритроциты Rh null напоминают тип крови Бомбей, лишенный всех антигенов системы AB0 (см. Группы крови). Принято считать, что лица с эритроцитами Rh null имеют ген Xr0 в гомозиготной форме, к-рый репрессирует выработку антигенов Р.-ф. Такие лица могут передавать детям антигены Р.-ф., сами фенотипически не проявляя этих признаков. Наличие гена Хг0указывает на патологию, Поскольку у лиц с эритроцитами Rh null часто наблюдаются нарушения мембраны эритроцитов, обусловливающие быстрое их разрушение.

Одной из разновидностей Р.-ф. является антиген LW, обозначенный так по фамилии исследователей К. Ландгйтейнера и А. Винера, открывших его. Антиген LW выявляется в основном гетероиммунными сыворотками крови, полученными от морских свинок, против эритроцитов обезьян Macacus rhesus. Антиген содержится у 99% людей независима от их резус-принадлежности. Антиген LW включает в себя антиген Rh0(D). Поэтому сыворотки анти-LW после адсорбции резус-отрицательными эритроцитами приобретают специфичность анти-Rh0(D).

Антитела против Р.-ф. (см. Антитела), как правило, иммунные. Определение антител анти-резус производят методом гемагглютинации(см.). В реакции используют эритроциты человека известной принадлежности по Р.-ф. Это дает возможность определить также специфичность антител. Кроме того, количественную характеристику антител устанавливают по титру исследуемой сыворотки крови. Для этого определяют последнее разведение исследуемой сыворотки крови, к-рое показывает еще положительный результат. Основной причиной образования антител анти-резус является алло- реже аутосенсибилизация (см. Аутоаллергия). Наиболее часто образуются антитела анти-D, анти-С, анти-Е.

Различают два вида резус-антител: полные и неполные. Полные антитела анти-резус обладают способностью склеивать резус-положительные эритроциты. Они не проходят через неповрежденную плаценту, относятся преимущественно к IgM, встречаются реже неполных и в силу этого имеют меньшее значение в медицине. Неполные антитела анти-резус обладают способностью агглютинировать резус-положительные эритроциты только в присутствии коллоидных р-ров (веществ с большой молекулярной массой), после обработки протеолитиче-скими ферментами или при добавлении специально приготовленной антиглобулиновой сыворотки (см. Кумбса реакция).Они встречаются чаще, чем полные антитела. Их молекулярная масса значительно меньше, благодаря чему они легче проникают через плацентарный барьер и поэтому являются более агрессивными. Неполные антитела анти-резус принадлежат в основном к IgG. Аутоиммунные антитела являются, как правило, неполными антителами против Rh0, hr" и других антигенов Р.-ф.; относятся в основном к IgG.

Методы определения

Р.-ф. определяют методом гемагглютинации при помощи тестовых сывороток анти-резус, приготавливаемых из крови резус-отрицательных лиц, сенсибилизированных к Р.-ф. многократным переливанием крови или при беременности, а также из крови лиц, подвергнутых искусственной иммунизации. Различают две основные группы методов. К первой группе относят метод агглютинации в солевой среде, при к-ром используют сыворотки, содержащие полные резус-антитела. При определении Р.-ф. этим методом эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом р-ре хлорида натрия соединяют в маленьких пробирках (высотой 2—2,5 см с внутренним диам. 0,5—0,6 см) с разведенной пополам сывороткой анти-резус. Пробирки помещают на 1 час в термостат при t° 37°, после чего рассматривают в проходящем свете при помощи лупы и по форме осадка эритроцитов (агглютинации эритроцитов) на дне пробирки учитывают результат. При положительном результате — осадок с неровными краями, в виде отдельных нитей или зернистости. При отрицательном результате — осадок располагается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга. Указанный метод имеет ограниченное применение, поскольку сыворотки с полными антителами анти-резус встречаются редко.

Ко второй группе относят методы, основанные на использовании сывороток анти-резус с неполными антителами, к-рые в пробирках или на плоскости агглютинируют эритроциты после обработки их протеолитическими ферментами (трипсином, папаином, протелином, фицином, бромелином) или после добавления веществ, способствующих агглютинации эритроцитов (альбумина, желатина, полиглюкина, поливинил-пирролидола).

Среди методов определения Р.-ф. широкое распространение получил метод Фиска — Мак-Ги. Его проводят в центрифужных пробирках, в к-рые помещают по 0,1 мл осадка эритроцитов, сыворотки анти-резус и 10% желатины. Пробирки инкубируют на водяной бане при t 46—48°, после чего добавляют 8—-10 мл изотонического р-ра хлорида натрия. Пробирки 2—3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинатов, видимых невооруженным глазом.

Применяют также метод определения Р.-ф. на чашках Петри. При этом используют 5—10% взвесь эритроцитов в аутологичной сыворотке. Эритроциты и сыворотку анти-резус наносят на чашку Петри, к-рую помещают на 10 мин. на водяную баню при t° 46—48°, после чего учитывают результат исследования. Получили распространение также экспресс-методы определения антигенов Р.-ф. Эти методы основаны на применении сыворотки анти-резус после добавления к ней определенного количества 20—30% р-ра альбумина человека или 30—33% р-ра полиглюкина. Исследования проводят на белой фарфоровой пластинке или в пробирке.

Основные шесть антигенов Р.-ф. могут встречаться в комбинации CDE — 15,85% , CDe — 53,2%, cDE - 14,58%, ede — 12,36%. Среди перечисленных антигенов Р.-ф. не все имеют одинаковое значение. Наиболее важными из них являются три антигена Р.-ф.: Rh0(D), rh'(C), rh"(E), обладающие наибольшей иммуногенной активностью. У резус-отрицательных лиц в результате переливания крови или повторной беременности могут появиться аллоиммунные резус-антитела. По данным Даймонда (L. К. Diamond, 1947), на одну трансфузию 400 мл резус-положи-тельной крови 50% реципиентов с резус-отрицательной кровью отвечают образованием антител анти-резус. При переливании резус-положительной крови лицам с антителами анти-резус возникают тяжелые осложнения, обусловленные бурным разрушением перелитых эритроцитов и развитием гемотрансфузионного осложнения. Антиген Rh0(D) обладает более выраженным иммунизаторным свойством, чем две другие его разновидности. С ним связано большинство посттрансфузионных осложнений, обусловленных резус-несовместимостью. В повседневной практике переливания крови ограничиваются определением у реципиента только антигена Rh0(D). Это связано с тем, что два других антигена — rh'(C) и rh"(E) присутствуют в эритроцитах в отдельности очень редко. Антиген rh'(C) встречается в 1,36% случаев, rh"(E) — в 0,26%. В тех случаях, когда резус-принадлежность крови реципиента установить не удается, ему переливают резус-отрицательную кровь. Иммуногенность резус-положительной крови была показана в отношении лиц, положительных по фактору Du, а также в отношении больного с резус-отрицательной кровью, к-рому переливали Неположительную кровь. Наличие Du-антигена позволяет отнести реципиента к резус-отрицательному типу. Донора носителя Du считают резус-положительным.

Значение

Различия людей по Р.-ф. могут приводить к иммунологически конфликтной беременности (см. Беременность, Несовместимость иммунологическая). В основе сенсибилизации лежит попадание в организм резус-отрицательной женщины резус-положительных эритроцитов плода, гл. обр. через сосуды плаценты.

Механизм развития резус-конфликтной беременности представляется следующим образом. Иммунные антитела, образующиеся в организме резус-отрицательной женщины, беременной резус-положительным плодом, будучи преимущественно неполными IgG, проникают через плаценту в организм плода, вызывая гемолиз эритроцитов новорожденного и повреждение его жизненно важных органов (кроветворной ткани, печени, головного мозга). Симптоматика иммунологического поражения ребенка получила название гемолитической болезни новорожденных. Вследствие обширного разрушения эритроцитов наблюдается увеличение количества билирубина, выраженная анемия с выходом в кровь большого количества эритробластов, положительная прямая проба Кумбса в результате наличия на эритроцитах плода аллоиммунных антител. Основные лечебные мероприятия по борьбе с гемолитической болезнью новорожденных сводятся к быстрейшему выведению из организма ребенка продуктов разрушения эритроцитов. Они включают в первую очередь обменные переливания резус-отрицательной крови. Развиваются и другие пути в борьбе с гемолитической болезнью новорожденных — профилактика противорезусной сенсибилизации резус-отрицательных женщин при первой беременности путем введения противорезусного гамма-глобулина.

Противорезусный гамма-глобулин приготавливают из сыворотки крови иммунного лица, содержащего антитела анти-D(DC) в титре не ниже 1 : 128—256. Введение противорезусного гамма-глобулина в дозе около 300 мг в первые 48—72 часа с момента родоразрешения предупреждает развитие сенсибилизации при следующей беременности к Р.-ф. в 90—100% случаев. Меньшую дозу противорезусного гамма-глобулина (100 мг) используют при осуществлении искусственного прерывания беременности у резус-отрицательной женщины. Механизм иммуносупрессивного действия противорезусного гамма-глобулина до конца не выяснен. Известно, что пассивное наведение у резус-отрицательной женщины противорезусного иммунитета сокращает время циркуляции в крови и разрушение макрофагами и другими клетками резус-положптельных эритроцитов плода. По-видимому, антигены Р.-ф. после соединения с антителами анти-резус теряют свою иммунизирующую активность или происходит активация Т-супрессоров (см. Иммунокомпетентные клетки).

Антигены Р.-ф. имеют важное значение в судебной медицине при проведении экспертизы по исключению отцовства (см. Отцовство спорное).

Библиография: Аграненко В. А. и Скачилова H. Н. Гемотрансфузи-онные реакции и осложнения, М., 1979; Гаврилов О. К. Пособие по транс-фузиологии, с. ИЗ, М., 1980; Доссе Ш. Иммуногематология, пер. с франц., М., 1959; Зотиков Е. А. Антигенные системы человека и гомеостаз, М., 1982; Косяков П. Н. Изоантигены и изоантитела человека в норме и патологии, М., 1974; Руководство по общей и клинической трансфузиологии, под ред. Б. В. Петровского, с. 114, 216, М., 1979; Руководство по применению крови и кровезаменителей, под ред. А. Н. Филатова, с. 86 и др., Л., 1973; Соловьева Т. Г. Резус-фактор и его значение в клинической практике, Л., 1963; Туманов А. К. и Томилин В. В. Наследственный полиморфизм изоантигенов и ферментов крови в норме и патологии человека, М., 1969; Умнова М. А. и др. Изоиммунология и вопросы гемотрансфузионных осложнений, М., 1979; Allen F. H. a. R о-s e n f i e 1 d R. F. Review of Rh serology, Haematologica, v. 6, p. 113, 1972; American hospital supply corporation, Dade division, Blood group immunology, theoretical and practical aspects, p. 47, Miami, 1976; G i b-1 e t t E. H. Genetic markers in human blood, Philadelphia, 1969; I s s i t t P. D., Pavone B. G. a. Shapiro M. Anti-Rh49 — a «new» specificity Rh system antibody, Transfusion, v. 19, p. 389, 1979; Landsteiner K. a. Wiener A.S. Agglutinable factor in human blood recognized by immune sera for rhesus blood, Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.), v. 43, p. 223, 1940; M о 1 1 i s о n P. L. Blood transfusion in clinical medicine, Oxford, 1979; Race R. R. a. Sanger R. Blood groups in man, Oxford, 1975; Rosen-field R. E. a. o. A review of Rh serology and presentation of a new terminology, Transfusion, v. 2, p. 287, 1962; Z m i e v s k i j С. M. Immunohematology, N. Y., 1978.

E. А. Зотиков.

xn--90aw5c.xn--c1avg

Химическая структура антигенов системы резус

Резус-полипептиды представляют собой семейство негликозилированных 30-32 кДа трансмембранных протеинов. Характерной особенностью является отсутствие терминальных углеводов.

Современные представления о мембранной топологии резус-полипептидов приведена на рисунке(цитировано по P. Agre, J.Р. Cartron,1991).

Модель топологии Rh полипептидов в мембране эритроцита

Как показано на рисунке, высоко гидрофобные протеины этой системы вставлены в фосфолипидный бислой мембраны эритроцита и имеют 5-6 внеклеточно расположенных гидрофильных петель. Антигенные свойства пептидов могут быть связаны с этими петлями. Предполагается также, что антигенные свойства зависят кроме того от мембранных фосфолипидов, определенным образом ориентирующих полипептидные петли. Антигенная активность полипептидов, как было показано еще ранними исследованиями, утрачивалась при действии растворителей жиров и восстанавливалась при добавлении экзогенного фосфатидилхолина. К частичной утрате антигенных свойств приводит также действие фосфолипазы А2, изменение соотношения мембранного холестерола и фосфолипидов. Эти находки предполагают сильные связи между Rh антигенами и липидами, хотя биохимический механизм связи остается не ясным.

Функциональная роль антигенов системы резус остается не известной. Предполагается их участие в поддержании мембранной целостности.

Иммуногенность антигенов системы резус представлена следующим образом: D>c>E>C>e.

Разновидность антигена d системы резус

Характерной чертой антигенов системы Резус является полиморфизм, что обуславливает наличие большого количества разновидностей антигенов.

Согласно современному представлению наибольшей иммуногенностью обладает антиген D (имеет белковую природу, локализован на мембране эритроцитов), у которого выделяют следующие варианты в зависимости от выраженность антигенных и иммуногенных свойств:

- нормально выраженный антиген D.

- D слабый (weak) - снижено количество антигенных детерминант

- D вариантный (partial)- количество антигенных детерминант не снижено, но они отличаются качественно.

Частота встречаемости слабых вариантов антигена D составляет около 1%.

Для удобства в повседневной работе иммуносерологических лабораторий слабые варианты антигена D объединяют в группу Du.

Ранее не существовало возможности дифференцировать D слабый и D вариантные антигены друг от друга, поэтому они обозначались общим термином DU . Но в настоящее время, благодаря использованию моноклональных антител, это стало возможно. Поэтому за рубежом термин Du больше не используется.

Для выявления слабой разновидности антигена D- Du- используют Цоликлон анти-D, созданный на основе полных антител класса IgM и Цоликлон анти-D, содержащий неполные антитела класса IgG.

Результат Duвыдается, если Цоликлон анти-D дает положительный или сомнительный результат, с Цоликлоном анти-D Супер - реакция отрицательная.

Доноры с антигеном Duквалифицируются как резус-положительные.

Реципиенты, содержащие антиген Du, относятся к резус-отрицательным Им может быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать образование иммунных антител анти-D.

Рекомендации при переливании компонентов крови:

Выявлена слабая разновидность антигена D- Du- переливать только rh-(отрицательную) кровь.

Резус – отрицательными донорами считаются лица, кровь которых не содержит антигенов D, С, Е.

studfiles.net

Методики определения резус-нринадлежности крови

Для определения резус-принадлежности крови необходимо иметь стандартные высокоактивные реактивы. В настоящее время применяют реактивы двух видов: приготовленные из сыворотки крови лиц, иммунизированных к антигенам системы Резус, и реактивы на основе моноклональных антител.

Для практического применения выпускают моноклональные антитела (получают с помощью биотехнологии гибридом) следующей специфичности: анти- D и анти-С, анти-Е, анти-с, анти-е.

Цоликлон анти-D-Супер содержит полные (IgM) анти-D АТ.

Стандартные диагностические сыворотки для определения резус-принадлежности получают из крови резус-отрицательных лиц, сенсибилизированных резус-АГ в результате гемотрансфузии или при беременности.

Определение резус-принадлежности крови на плоскости без подогрева с моноклональными антителами IgM анти-d

Оснащение:

- моноклональные антитела IgM анти-D;

- белая смачиваемая поверхность;

- раствор натрия хлорида 0,9%;

- стеклянная палочка.

Порядок проведения исследования:

1. На белой пластине со смачиваемой поверхностью написать Ф.И.О. исследуемого лица.

2. На левом краю пластины надписать серию реактива анти-D, используемого для исследования. Рядом сделать надпись: контроль.

3. Соответственно надписям поместить под ними по одной капле реактива IgM анти-D и одну каплю контрольного реактива (если контрольный реактив входит в комплект и поставляется производителем).

4. Во все капли добавить по маленькой капле исследуемых эритроцитов и перемешать стеклянной палочкой до образования капли диаметром 1,5 см. Палочку каждый раз вымыть и тщательно вытереть досуха. Перемешивание начинают с контроля.

5. Пластину покачивать в течение 5 минут, затем в каждую каплю добавить 5-6 капель раствора натрия хлорида 0,9% для снятия возможной неспецифической агглютинации. После чего пластину покачивать еще 5 минут.

Трактовка результатов:

Результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации невооруженным глазом.

Наличие агглютинации в капле с реактивом анти-D свидетельствует о положительной реакции и указывает на резус-положительную принадлежность.

Отсутствие агглютинации с реактивом анти-D свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности.

Результат считается истинным при отсутствии агглютинации в капле с контрольным реактивом.

IgM анти-D (цоликон анти-D-супер)не взаимодействуют с некоторыми образцами D слабого и D вариантного антигенов, поэтому при исследовании резус-принадлежности крови доноров все отрицательные результаты необходимо исследовать с реактивами анти-D, содержащими IgG.

Проба Кумбса для определения неполных анти-резус антител

При постановке непрямой пробы Кумбса материалом для исследования служит сыворотка пациента, в которой следует определить присутствие неполных антител.

Непрямая проба Кумбса состоит из двух этапов, первый из которых заключатся в создании условий для фиксации неполных антител предположительно присутствующих в испытуемой сыворотке, на поверхности стандартных эритроцитов с известной антигенной специфичностью. Второй этап реакции - выявление фиксированных антител на поверхности стандартных эритроцитов с помощью антиглобулиновой сыворотки.

- При проведении реакции в штатив устанавливают пробирки по числу образцов эритроцитов, с которыми проводится испытание сыворотки и во все пробирки вносят по 0,15 мл (3 капли) испытуемой сыворотки.

- Затем вносят по 0,01 мл (очень маленькая капля из тонкой пастеровской пипетки) из отмытых стандартных эритроцитов со дна пробирки в соответствии с обозначениями и нумерацией пробирок.

- Содержимое пробирок тщательно перемешивают и инкубируют при 370С

30 минут, что необходимо для фиксации неполных антител на поверхности стандартных эритроцитов.

- После извлечения пробирок из термостата в них добавляют до верха изотонический раствор NaCl, содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют и проводят такое отмывание трижды.

- Затем к отмытым эритроцитам в каждую пробирку добавляют 4-7 капель физиологического раствора для получения 5% взвеси

- Каплю взвеси (0,05 мл) эритроцитов из каждой пробирки переносят на плоскость белого цвета со смачиваемой поверхностью и добавляют к ним по капле (0,05 мл) антиглобулиновой сыворотки (АГС).

- Эритроциты и АГС перемешивают стеклянной палочкой учитывают реакцию, наблюдая за нею при покачивании пластины

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд однако наблюдение продолжают до 20 минут, т.к. при низких титрах анти - резус антител реакция может наступать замедленно.

Интерпретация результатов

При наличии агглютинации исследуемой сыворотки с образцами стандартных резус-положительных эритроцитов и отсутствии реакции с резус-отрицательными образцами и собственными эритроцитами можно делать вывод о наличии в сыворотке обследуемого неполных резус - антител.

Отсутствие агглютинации со всеми образцами стандартных и аутоэритроцитов свидетельствует об отсутствии анти - резус неполных антител.

studfiles.net

1. Антигенная система резус-фактора

В 1940 г. К. Ландштейнер и А. С. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а 15% лиц этого фактора не содержат.

Система антигенов резус-фактора представлена 6 основными антигенами. Образование резус-антигенов контролируется тремя парами ал-лельных генов: Dd, Сс, Ее, которые расположены на двух хромосомах. Каждая из хромосом способна нести только 3 гена из 6, причем лишь 1 ген из каждой пары — D или d, С или с, Е или е. Гены D и d, Си с, Еие являются по отношению к друг другу аллельными.

В последнее время было доказано, что аллельного гена d не существует.

Эта номенклатура была предложена Р. Фишером и Р. Рейсом.

Другая номенклатура (Rh-Hr) была введена А. Винером. Он обозначил 6 резус-антигенов следующим образом: Rh0(D), rh'(C), rh"(E), Hr0(d), hr'(c), hr"(e).

Наиболее активным из всех антигенов является Rh0(D). В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh-Ь) или резус-отрицательную (Rh-).

Указанные 6 антигенов резус встречаются в эритроцитах в виде одного из 18 возможных сочетаний (табл. 6.5). Фенотипически каждый человек содержит 5, 4 или 3 антигена резус в зависимости от количества генов, по которым он гомозиготен. Однако генотипическая формула изображается шестью буквами, например cDE/CDe, обозначающими 3 гена резус, унаследованных с хромосомой одного из родителей, 3-е хромосомой другого.

Таблица 6.5

Резус-отрицательные группы (Rh-)

Антигенные группы системы резус-фактор (по М.А. Умновои, 1983)

сочетание

частота

обозна чение

обозна- | сонета | фенотип ; частота HueAg \ чение

Ag

Резус-положительные группы (Rh+)

15,85%

0,09%

0,17%

крайне

редко

фенотип

Rh.

rh

ceddee

12,36%

(CDE) 16,11%

I (cde) 12,36%

CcDEe CCDEe CcDEE CCDEE

Антигены резус относят к липопротеидам. Они являются очень активными и способны вызывать образование иммунных антител. Резус-антитела, являясь иммунными (неполными, моновалентными, блокирующими), характеризуются способностью фиксироваться к резус-положительным эритроцитам, не вызывая их склеивания. Они агглютинируют эритроциты только в присутствии коллоидных растворов, протеолитических ферментов или под действием специально приготовленной антиглобулиновой преципитирующей сыворотки. Неполные антитела относят к классу иммуноглобулинов IgG.

Наличие резус-антигена выявляется у человеческого плода начиная с 5-8 недели и хорошо выражено у 3-4-месячного эмбриона. Существование антигенов системы резус в эритроцитах человека является физиологическим, антител к этим антигенам в организме нет. Образование иммунных антител происходит при поступлении в организм человека чужеродного ему изоантигена. У сенсибилизированных людей антитела анти-Rh содержатся не только в крови, но и в экссудате, транссудате, моче, слезе и других средах.

2. Способы определения резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.

AB(IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген — антитело» и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем одно-двукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).

Оценка результатов

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидг кости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.

б) Экспресс метод определения Rh-фактора на плоскости без подогрева

Методика проведения реакции

На белой пластинке со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делают надпись «сыворотка - антирезус», на правом — «контрольная сыворотка». Последней служит разведенная альбумином сыворотка группы АВ (IV), не содержащая антител анти-резус. Соответственно надписям на пластинке помещают по 1-2 капли (0,05-0,1 мл) реактива антирезус и контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с реактивом сухой стеклянной палочкой, размазывая на пластинке до образования капли диаметром 1,5 см. Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 минуты для снятия возможной неспецифической агглютинации к каждой капле добавляют 5-6 капель физиологического раствора. Затем пластинку покачивают в течение 5 минут.

Оценка результатов

Результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации невооруженным глазом.

Наличие хорошо выраженной агглютинации в капле слева указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации в этой капле (гомогенная окраска) говорит о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови (Rh-). Результат считается истинным лишь при отсутствии признаков агглютинации в правой (контрольной) капле.

(2) ЛАБОРАТОРНЫЕ СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА

Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода.

а) Метод агглютинации в солевой среде

Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.

б) Метод коиглютинации с желатином

В пробирку помещают равные объемы исследуемых эритроцитов, антирезусной сыворотки и 10% раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45-48°С, после чего добавляют десятикратный объем физиологического раствора. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.

в) Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса)

Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС).

При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.

В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты; помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации является показателем того, что исследуемый образец крови резус-положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь — резус-отрицательная.

г) Реакция с анти-П-моноклональнымн антителами

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-В-монокло-нальных антител (МКА) и маленькую каплю (0,01мл) исследуемой крови.

За реакцией наблюдают в течение 2,5 мин. При смешивании анти-D-MKA с образцами резус-положительных эритроцитов отмечается быстро наступающая лепестковая агглютинация. Если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует.

studfiles.net

Химическая структура антигенов системы резус

Химическая структура антигенов системы резусРезус-полипептиды представляют собой семейство негликозилированных 30-32 кДа трансмембранных протеинов. Характерной особенностью является отсутствие терминальных углеводов.

Современные представления о мембранной топологии резус-полипептидов приведена на рисунке(цитировано по P. Agre, J.Р. Cartron,1991).

Модель топологии Rhполипептидов в мембране эритроцитаКак показано на рисунке, высоко гидрофобные протеины этой системы вставлены в фосфолипидный бислой мембраны эритроцита и имеют 5-6 внеклеточно расположенных гидрофильных петель. Антигенные свойства пептидов могут быть связаны с этими петлями. Предполагается также, что антигенные свойства зависят кроме того от мембранных фосфолипидов, определенным образом ориентирующих полипептидные петли. Антигенная активность полипептидов, как было показано еще ранними исследованиями, утрачивалась при действии растворителей жиров и восстанавливалась при добавлении экзогенного фосфатидилхолина. К частичной утрате антигенных свойств приводит также действие фосфолипазы А2, изменение соотношения мембранного холестерола и фосфолипидов. Эти находки предполагают сильные связи между Rh антигенами и липидами, хотя биохимический механизм связи остается не ясным.

Функциональная роль антигенов системы резус остается не известной. Предполагается их участие в поддержании мембранной целостности.Иммуногенность антигенов системы резус представлена следующим образом: D>c>E>C>e.

Разновидность антигена D системы резусХарактерной чертой антигенов системы Резус является полиморфизм, что обуславливает наличие большого количества разновидностей антигенов.

Согласно современному представлению наибольшей иммуногенностью обладает антиген D (имеет белковую природу, локализован на мембране эритроцитов), у которого выделяют следующие варианты в зависимости от выраженность антигенных и иммуногенных свойств:

- нормально выраженный антиген D.

- D слабый (weak) - снижено количество антигенных детерминант

- D вариантный (partial)- количество антигенных детерминант не снижено, но они отличаются качественно.

Частота встречаемости слабых вариантов антигена D составляет около 1%.

Для удобства в повседневной работе иммуносерологических лабораторий слабые варианты антигена D объединяют в группу Du.

Ранее не существовало возможности дифференцировать D слабый и D вариантные антигены друг от друга, поэтому они обозначались общим термином DU . Но в настоящее время, благодаря использованию моноклональных антител, это стало возможно. Поэтому за рубежом термин Du больше не используется.

Для выявления слабой разновидности антигена D- Du- используют Цоликлон анти-D, созданный на основе полных антител класса IgM и Цоликлон анти-D, содержащий неполные антитела класса IgG.

Результат Duвыдается, если Цоликлон анти-D дает положительный или сомнительный результат, с Цоликлоном анти-D Супер - реакция отрицательная.

Доноры с антигеном Duквалифицируются как резус-положительные.

Реципиенты, содержащие антиген Du, относятся к резус-отрицательным Им может быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать образование иммунных антител анти-D.Рекомендации при переливании компонентов крови:

Выявлена слабая разновидность антигена D- Du- переливать только rh-(отрицательную) кровь.Резус – отрицательными донорами считаются лица, кровь которых не содержит антигенов D, С, Е.Антитела системы резусАнтитела в системе резус, как уже отмечалось, обычно иммунного происхождения, относятся к классу иммуноглобулинов G, подклассам G1 и G3.Гораздо реже могут наблюдаться антитела из классов иммуноглобулинов М и А. Во многих случаях эти антитела хорошо выявляются при 37°С при инкубации в коллоидной среде, почти все антитела этой системы определяются в антиглобулиновой технике. Реактивность антител может быть усилена путем использования для их выявления эритроцитов, обработанных ферментами.

Иммунные антитела в системе резус появляются после перелива-ния резус-несовместимой крови в результате сенсибилизации реципиента, чаще появляются в результате иммунокомфликтной беременности. Человек, однажды сенсибилизированный к резус - антигенам, может иметь определимые в циркуляции анти- D антитела пожизненно, а при повторной экспозиции с этими антигенами способен давать быстрый и сильный анамнестический ответ.

Антитела в системе резус отличаются по своим характеристикам от антител в системе АВО по происхождению. Эти антитела являются иммунными, а не естественными, т.е. они образуются не от рождения, а при иммунизации в результате переливания резус- отрицательным реципиентам несовместимой (резус-положительной) крови или при иммуноконфликтной беременности (беременность резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом).

Резус антитела чаще бывают неполными и представлены иммуноглобулинами вторичного иммунного ответа (IgG), которые не вызывают агглютинации стандартных эритроцитов в солевой среде, хотя и прикрепляются к ним. Реакция внешне ничем не проявляется, для ее выявления необходимо проведение реакции агглютинации со стандартными эритроцитами в присутствии различных усилителей коллоидного характера, либо проведение непрямой реакции Кумбса.

Неполные антитела являются по своим характеристикам тепловыми, т.е. для их обнаружения требуется температура, близкая к температуре тела (37°-48°С), в то время как полные антитела реагируют лучше при комнатной температуре, либо на холоду.

Среди резус - антител могут быть и полные антитела, относящиеся к иммуноглобулинам первичного иммунного ответа (IgM) и вызывающие агглютинацию стандартных эритроцитов в обычной солевой среде. Это делает необходимым при тестировании сывороток постановку обеих реакций : для выявления полных и неполных резус антител.Человеческий иммуноглобулин G (анти - D) используется для приготовления резус - иммуноглобулина, который используется для профилактики сенсибилизации к D антигену у Rh - отрицательных женщин после рождения у них Rh - позитивного плода. Этот иммуноглобулин может быть также введен, если Rh негативному пациенту ошибочно перелили Rh+ эритроциты или большое количество тромбоцитов, контаминированных Rh+ эритроцитами от Rh+ доноров. Один флакон, содержащий 300 мг анти - D иммуноглобулина G, рекомендуется вводить на каждые 15мл D+ эритроцитов (не цельной крови), введенных в организм. Иммуноглобулин назначают в течение 72 часов после попадания D+ крови, что позволяет предупредить активную иммунизацию пациента и быстро удалить иногруппные эритроциты из организма.МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯРЕЗУС-НРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИДля определения резус-принадлежности крови необходимо иметь стандартные высокоактивные реактивы. В настоящее время применяют реактивы двух видов: приготовленные из сыворотки крови лиц, иммунизированных к антигенам системы Резус, и реактивы на основе моноклональных антител.

Для практического применения выпускают моноклональные антитела (получают с помощью биотехнологии гибридом) следующей специфичности: анти- D и анти-С, анти-Е, анти-с, анти-е.

Цоликлон анти-D-Супер содержит полные (IgM) анти-D АТ.

Стандартные диагностические сыворотки для определения резус-принадлежности получают из крови резус-отрицательных лиц, сенсибилизированных резус-АГ в результате гемотрансфузии или при беременности.Определение резус-принадлежности крови на плоскости без подогревас моноклональными антителами IgMанти-DОснащение:

- моноклональные антитела IgM анти-D;

- белая смачиваемая поверхность;

- раствор натрия хлорида 0,9%;

- стеклянная палочка.Порядок проведения исследования:

1. На белой пластине со смачиваемой поверхностью написать Ф.И.О. исследуемого лица.

2. На левом краю пластины надписать серию реактива анти-D, используемого для исследования. Рядом сделать надпись: контроль.

3. Соответственно надписям поместить под ними по одной капле реактива IgM анти-D и одну каплю контрольного реактива (если контрольный реактив входит в комплект и поставляется производителем).

4. Во все капли добавить по маленькой капле исследуемых эритроцитов и перемешать стеклянной палочкой до образования капли диаметром 1,5 см. Палочку каждый раз вымыть и тщательно вытереть досуха. Перемешивание начинают с контроля.

5. Пластину покачивать в течение 5 минут, затем в каждую каплю добавить 5-6 капель раствора натрия хлорида 0,9% для снятия возможной неспецифической агглютинации. После чего пластину покачивать еще 5 минут.Трактовка результатов:

Результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации невооруженным глазом.

Наличие агглютинации в капле с реактивом анти-D свидетельствует о положительной реакции и указывает на резус-положительную принадлежность.

Отсутствие агглютинации с реактивом анти-D свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности.

Результат считается истинным при отсутствии агглютинации в капле с контрольным реактивом.IgM анти-D (цоликон анти-D-супер)не взаимодействуют с некоторыми образцами D слабого и D вариантного антигенов, поэтому при исследовании резус-принадлежности крови доноров все отрицательные результаты необходимо исследовать с реактивами анти-D, содержащими IgG.

Проба Кумбса для определения неполных анти-резус антителПри постановке непрямой пробы Кумбса материалом для исследования служит сыворотка пациента, в которой следует определить присутствие неполных антител.

Непрямая проба Кумбса состоит из двух этапов, первый из которых заключатся в создании условий для фиксации неполных антител предположительно присутствующих в испытуемой сыворотке, на поверхности стандартных эритроцитов с известной антигенной специфичностью. Второй этап реакции - выявление фиксированных антител на поверхности стандартных эритроцитов с помощью антиглобулиновой сыворотки.

- При проведении реакции в штатив устанавливают пробирки по числу образцов эритроцитов, с которыми проводится испытание сыворотки и во все пробирки вносят по 0,15 мл (3 капли) испытуемой сыворотки.

- Затем вносят по 0,01 мл (очень маленькая капля из тонкой пастеровской пипетки) из отмытых стандартных эритроцитов со дна пробирки в соответствии с обозначениями и нумерацией пробирок.

- Содержимое пробирок тщательно перемешивают и инкубируют при 370С

30 минут, что необходимо для фиксации неполных антител на поверхности стандартных эритроцитов.

- После извлечения пробирок из термостата в них добавляют до верха изотонический раствор NaCl, содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют и проводят такое отмывание трижды.

- Затем к отмытым эритроцитам в каждую пробирку добавляют 4-7 капель физиологического раствора для получения 5% взвеси

- Каплю взвеси (0,05 мл) эритроцитов из каждой пробирки переносят на плоскость белого цвета со смачиваемой поверхностью и добавляют к ним по капле (0,05 мл) антиглобулиновой сыворотки (АГС).

- Эритроциты и АГС перемешивают стеклянной палочкой учитывают реакцию, наблюдая за нею при покачивании пластины

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд однако наблюдение продолжают до 20 минут, т.к. при низких титрах анти - резус антител реакция может наступать замедленно.Интерпретация результатов

При наличии агглютинации исследуемой сыворотки с образцами стандартных резус-положительных эритроцитов и отсутствии реакции с резус-отрицательными образцами и собственными эритроцитами можно делать вывод о наличии в сыворотке обследуемого неполных резус - антител.

Отсутствие агглютинации со всеми образцами стандартных и аутоэритроцитов свидетельствует об отсутствии анти - резус неполных антител.Ложноотрицательные результаты при определении резус-принадлежности крови• наличие D вариантного и D слабого антигенов.

• ослабление антигенов при заболеваниях.

• недостаточное качество реактивов (низкая активность антител; узкий спектр антител, выявляющих не все варианты антигенов).

• нарушение методики исследования резус-принадлежности (неправильное соотношение реактивов, несоблюдение температуры и времени).ДЕЙСТВИЯ ВРАЧА ПЕРЕД ГЕМОТРАНСФУЗИЕЙ, ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ НЕСОВМЕСТИМОСТИ ПРИ ПЕРЕЛИВАНИИ КРОВИАлгоритм проведения мероприятий строго регламентирован:

- Перед назначением переливания крови врач, проводящий трансфузию, должен внимательно собрать анамнез больного для выявления возможных в прошлом посттрансфузионных осложнений у больного, а у женщин наличия в прошлом иммуноконфликтной беременности.

- У больного обязательно проводят общий анализ крови и мочи (не ранее, чем за 3 дня до процедуры переливания крови).

- Врач записывает в историю болезни предтрансфузионный эпикриз, включающий показания для переливания компонентов крови, ее группу АВО и Rh, дозу и способ переливания.

- На основе знания группы крови больного, записанной в предтрансфузионном эпикризе врач должен правильно выбрать кровь для трансфузии: одногруппную по системе АВО и резус - принадлежности.

Переливание крови «универсального донора» -0(I) группы, реципиентам с другой группой крови допускается лишь в исключительных случаях. Только в порядке исключения допускается «универсальному реципиенту», т.е. носителю АВ (IV) группы крови, переливать кровь другой группы. Количество переливаемой цельной крови в этих исключительных случаях должно быть небольшим. Особенно осторожно следует проводить такое переливание больным после острой кровопотери, недопустимо такое переливание детям.

В случае необходимости можно переливать тщательно отмытые от плазмы эритроциты 0(I) группы, в этом случае при переливании эритроцитарной массы отсутствуют антитела аир, способные повредить эритроциты реципиента.

Врач должен также правильно выбрать кровь в отношении резус – фактора. При этом следует помнить, что резус-отрицательным реципиентам (Rh-) может быть перелита только резус-отрицательная кровь для предупреждения посттрансфузионного осложнения.

- В день переливания крови, непосредственно перед гемотрансфузией у больного берут 5 мл крови в пробирку для проведения контрольных исследований, предупреждающих возможную несовместимость крови донора и реципиента. На пробирке врач подписывает ФИО больного, группу крови.

- Параллельно врач проводит контрольные исследования донорской крови, в этом случае кровь из флакона, или флаконов, если используются несколько флаконов (даже от одного и того же донора), забирают в пробирки, подписывая на них ФИО донорагруппу крови и номер флакона.

- Флакон с остатками трансфузионной жидкости и пробирку с сывороткой крови больного, взятой до переливания крови для контрольных исследований, следует сохранять в холодильнике в течение 48 часов, т е срок в течение которого реализуются возможные посттрансфузионные иммунологические или бактериологические осложнения, для последующего анализа которых необходимы эти пробы.

Несовместимость крови донора для реципиента определяется присутствием в сыворотке последнего антител к переливаемым эритроцитам в результате действия которых эти эритроциты могут быть разрушены Для предупреждения возможной несовместимости перед проведением процедуры гемотрансфузии необходимо обязательное проведение целого ряда проб на совместимость крови донора и сыворотки реципиента, которые делает врач, осуществляющий гемотрансфузию.

Для того, чтобы не допустить переливания несовместимой крови, необходимо выполнять следующий алгоритм действий:

1. Врач должен тщательно проверить всю документацию, имеющую отношение к переливанию крови у пациента, т.е.

- сравнить запись в истории болезни по определению группы крови АВО у пациента с данными на этикетке флакона с кровью донора, убедиться, что кровь донора и реципиента совместимы по системе АВО.

- проверить запись в истории болезни о резус - принадлежности реципиента, если кровь больного резус-отрицательная, то убедиться, что на флаконе с кровью указано, что кровь донора резус-отрицательная.

2. Провести контрольные исследования, включающие все пробы

на совместимость. Контрольные исследования обязательны вне зависимости от ранее проведенных и зафиксированных в истории болезни результатов и включают следующие этапы:

а) Определение групповой принадлежности крови больного по системе АВО и сопоставление полученных данных с записями о групповой принадлежности крови больного в истории болезни, а также с обозначением группы крови донора, указанным на флаконе.

б) Определение группы крови донора, взятой из флакона, по системе АВО проводится аналогично, результат сопоставляется с обозначением группы крови, указанном на флаконе.

в) Проведение пробы на индивидуальную АВО совместимость эритроцитов донора и сыворотки реципиента.

г) Проведение пробы на индивидуальную резус – совместимость эритроцитов донора и сыворотки реципиента.

д) После проведения вышеуказанных этапов и при полной совместимости крови донора и реципиента перед самым переливанием крови проводят также биологическую пробу.ПРОБЫ НА СОВМЕСТИМОСТЬ ПЕРЕЛИВАЕМОЙ КРОВИДля проведения проб на совместимость переливаемой крови по системе АВО и резус используют сыворотку (не плазму) крови реципиента и консервированную кровь донора (причем ее исследуют из каждого флакона, из которого будет переливаться кровь донора, даже если она получена от одного и того же донора).

Сыворотка реципиента должна быть получена и исследована в тот же день, либо накануне, но при условии хранении крови при температуре 4-60 С. Для получения сыворотки у больного кровь берут в количестве 4-5 мл без консерванта, на пробирке пишут фамилию, инициалы больного, группу крови и дату. Врач, осуществляющий гемотрансфузию должен лично убедиться в том, что надписи на пробирке сделаны правильно и относятся к тому больному, у которого взята кровь. Сыворотку для исследования забирают после ретракции сгустка и отстаивания жидкой части крови, для ускорения процесса можно провести центрифугирование при 1500 оборотах в минуту - 5 минут.

Кровь донора получают из флакона, для чего из него спускают кровь через иглу в количестве 5-10 капель на борт пластины, где будет проведена проба.

topuch.ru

История открытия системы резус

Система эритроцитарных антигенов резус (Rh), имеющая не менее важное значение в практической трансфузиологии, чем система АВ0, была открыта в 1940 году Ландштейнером и Винером в результате опытов по иммунизации кроликов и морских свинок эритроцитами макаки резус. Оказалось, что полученная иммунная сыворотка агглютинирует не только эритроциты макаки, но и эритроциты 85% жителей Нью-Йорка белой расы. Выявленный на эритроцитах человека антиген, совпадавший по специфичности с антигенами эритроцитов макаки резус, был обозначен Rh (резус). Эритроциты, содержащие этот антиген, были обозначены как Rh+, а не содержащие его, соответственно как Rh-. Спустя 20 лет оказалось, что антитела иммунной сыворотки, полученной от экспериментальных животных путем их иммунизации эритроцитами макаки резус, а также антитела, полученные путем иммунизации животных эритроцитами человека, реагируют с разными антигенами. Однако историческое наименование антигена осталось, хотя Levine предлагал антитела анти - Rh, полученные от животных, иммунизированных эритроцитами макаки, обозначить как анти - LW в честь Landsteiner и Wiener.

В 1940 году Винер и соавторы обнаружили антитела анти – Rh в сыворотках реципиентов, полностью совместимых с донорами по АВ0 системе, но имевших посттрансфузионные осложнения при переливании крови. Тогда же Левином им Стетсоном было сделано предположение о связи иммуноконфликтной беременности, закончившейся смертью плода, с наличием у матери антител к антигенам, экспрессированным на тканях плода, предположительно отнесенных к анти Rh - антителам, т.к. AB0, MN и Р - совместимость у женщины и плода была доказана.

К 1943 году стало ясно, что система резус является сложной по своему составу. A. Wiener с помощью 5 основных антисывороток (анти - D, анти - С, анти - Е, анти - с и анти - е) установил 5 различных антигенных факторов этой системы. Сегодня Rh - система является одной из наиболее сложных групповых систем крови, насчитывающей около 50 антигенов, множество фенотипических вариантов, и имеющей сложные серологические отношения.

Классификации антигенов эритроцитов системы резус

Классификация Винера основана на предположении, что в Rh хромосоме имеется только одно место, которое может быть занято одним из восьми аллелеморфных генов. Каждый ген кодирует продукцию агглютиногена, состоящего из комплекса антигенов. Антигены можно выявить с помощью антисывороток. Обозначение антигенов по Винеру сложное и широко не используется в иммуногематологии. Исключение составляет обозначение специфичности антител в иммуноглобулине антирезус «Rh0(D)», которое применяется на практике.

Классификация Фишера-Рейса основана на предположении наличия в Rh хромосоме трех мест для трех генов. В настоящее время обозначение антигенов по Фишеру-Рейсу рекомендовано экспертным комитетом по биологическим стандартам ВОЗ для широкого применения во всем мире. Эта номенклатура легко запоминается и позволяет сразу увидеть, как данный образец эритроцитов будет реагировать с моноспецифической антисывороткой. Так, например, сыворотка анти-с реагирует с эритроцитами cde/cDE, но не взаимодействует с эритроцитами CDE/CDe.

Исследованиями последних десятилетий установлено существование двух генов: RHD и RHCE, отвечающих за продукцию всех антигенов эритроцитов системы Резус. Наличие большого количества антигенов системы Резус объясняется мутациями в генах.

Ген RHD контролирует продукцию антигена D, ген RHCE антигенов С, с, Е, е. Не подтверждено существование антигена d, т.к. не имеется гена, отвечающего за синтез указанного антигена. Несмотря па это, символ d применяется в иммуногематологии для обозначения факта отсутствия антигена D на эритроцитах при описании фенотипов. Лица с резус-положительной принадлежностью крови имеют два гена: RHD и RHCE, лица с резус-отрицательной принадлежностью крови имеют один ген RHCE.

Антигены эритроцитов системы Резус могут быть выявлены при добавлении к ним антисывороток соответствующей специфичности, что проявляется в реакции агглютинации и характеризует определенный фенотип антигенов.

Гены.контролирующие синтез АГ системы резус, картированы в 1 хромосоме, на ее коротком плече в участке Р36-р34. Rh гены контролируются набором из 2 тесно связанных генов, расположенных на одной хромосоме. В гаплотип входит ген D и ген CcEe.

У родителей, имеющих резус-положительную принадлежность эритроцитов, может родиться ребенок, имеющий резус-отрицательную принадлежность.

studfiles.net


Смотрите также