Фактор роста нервов, симпатическая система. Антитела к фрн


Аутоиммунный синдром

Аутоиммунный синдром

У меня 2-ая беременность - сейчас 18-19 недель. 1-ая беременность была в 2000 году - неразвивающаяся. Затем после лечения хломидий,эрозии и т.д. долго не могла забеременеть. Сейчас обнаружен АФс, гемостаз в норме, волчанка отрицательная, стероидный профиль мочи в 10 недель в норме. Врач назначила сначала метипред 1 таб., сейчас дексаметозон 1/2 таб. утром и 1/4 в 16 часов вечера. К кому обратиться за советом насколько оправдан прием этих препаратов? После прочтения статьи на Вашем сайте очень сильно переживаю за ребенка. Как Вы уже поняли, врачи нашего центра стараются не использовать вышеуказанные препараты без показаний при беременности. Наличие антифосфолипидных антител не является абсолютным показанием, по нашему мнению, для их назначения. Существуют иные методы для контроля за ситуацией: антиагрегантная терапия и пр. В зависимости от вида повышенных антител, мы подбираем адекватную терапию, которая не несет в себе риска развития осложнений у ребенка. Во многих статьях на нашем сайте эти варианты обсуждаются. Более подробную/конкретную информацию Вы сможете получить из личной беседы с врачом, поскольку, согласитесь, нельзя пременять единую схему для всех.

Кардиолипин: lgM - слабоположительн., lgG - слабоположительн. Фософатидилсерин: lgM - слабоположит., lgG - слабоположит. Фосфатидилэтаноламин: lgM - отрицат., lgG - отрицат. Фосфатидихолин: lgM - слабоположит., lgG - отрицат.

ПОнимаете, дело в том, что я потеряла ребенка на сроке 38 недель. Пока причиной считается Остановка сердца (еще нет официального заключения от патанатомов). Предварительно сказали, что никаких видимых патологий у плода не было, плацента тоже в полном порядке. Да и беременность протекала практически без осложнений, постоянно был контроль узи, раз в неделю кардиомонитор. Воды - светлые. Вот так, на ровном месте взял и умер ребенок. Скажите, это могло быть следствием АФС? В дальнейшем, планируя беременность как-то направлять свои усилия на борьбу с этим состоянием? Конечно. Поскольку самый большой процент среди причин патологического течения беременности сейчас отводится на тромбофилические нарушения. При подготовке к очередной беременности необходимо будет пройти полное дообследование и на эти факторы, и на дополнительные. Также обязательно дождаться заключения патологоанатома (для исключения органической патологии у ребенка). Помимо антифосфолипидных антител нарушать процесс свертывания крови могут высокие цифры гомоцистеина, наличие наследственных мутаций системы гемостаза, высокие титры антител к бетта2гликопротеину. Возможно и более расширенное обследование (иимунология, генетические факторы). Особенностью АФС является возможность катастрофического нарастания симптомов, а не только его "хроническое" течение. Поэтому в вашей ситуации тщательная подготовка к следующей беременности просто необходима.

Может у кого-то из девушек антифосфолипидные антитела положительны как у меня?! У меня по антифосфолипидным антителам (люпус антикоагулянт)результат - положительный - 40'' Норма - 26). Врач сказала что с такими показателями антифосфолипидных антител я 100% не забеременею и возможно не выношу. Эти антитела отторгают плод вроде бы. Неужели с такими показателями антифосфолипидных антител как у меня не беременеют и не вынашивают без антифосфолипидного лечения?! Другие врачи говорят что они только уменьшают процент вынашиваемости, а не процент зачатия не влияют. Я хочу провести ЭКО. Какое дечение мне предпринять при моих показателях? Какие дозы метипреда? И когда до или во время ЭКО, в какие дни? Слышала о аллоимунных лейкоцитах. Где их можно купить и по чем? Они принимаются до или во время ЭКО, в какие дни? Наличие повышенных или высоких титров антифосфолипидных антител оказывает влияние на процессы вынашивания беременности с самых ранних сроков беременности. Клиническими проявлениями этих нарушения являются самопроизвольное прерывание беременности и другая патология течения беременности (гестозы, синдром внутриутробной задержки развития плода, плацентарная недостаточность, преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты и пр). Поэтому высокие концентрации антифосфолипидных антителотносятся к фактору риска развития вышеперечисленной патологии. При обнаружении отклонений рекомендуется назначение коррегирующей терапии. Важным условием достижения хороших результатов является начало терапии еще до отмены контрацепции, а не по факту наступления беременности. Так как нарушения, ведущие к неблагоприятным последствиям, закладываются очень рано. О методах терапии, практикуемых врачами нашего центра, Вы можете узнать из статей на нашем сайте или лично при беседе с одним из докторов. Препараты группы глюкокортикоидов в терапии антифосфолипидного синдрома врачами нашего центра при беременности не используются. Подробнее о данных препаратах и их применении во время беременности читайте на нашем сайте в разделе Беременность.

После двух неудачных беременностей (внематочная и неразвивающаяся) врачи поставили диагноз - антифосфолипидный синдром. 2 года назад все-таки родила девочку. Принимала во время беременности дюфастон (до 20 нед.)и метипред (до 37 нед.). В 20 недель накладывали швы на шейку матки. Роды - кесарево. Мне 34 года. Планирую второго ребенка. Очень не хочется заново проходить все обследования. Сдала анализ на инфекции, сделала УЗИ, побывала у гинеколога и получила "добро" на беременность. Скажите, мне придется опять принимать гормональные препараты по той же схеме и "зашиваться", или можно будет обойтись без этого?

Однозначно сказать "да" или "нет" мы не можем, поскольку ситуация обрисована очень кратко: нет данных о титрах антител к фосфолипидам, данных о уровнях других факторов, которые могут провоцировать повышенное тромбообразование. И вообще - как протекала беременность (гемостазиограммы, УЗИ и пр). Действительно ли существует истмико-цервикальная недостаточность - это тоже важный вопрос. Если Вы читали статьи на нашем сайте по применению глюкокортикоидов при беременности, то, наверное, поняли, что центр не ведет беременности по схеме - дексаметазон/метипред/дюфастон. У нас свои взгляды и способы борьбы с повышенным тромбообразованием. Хотите обсудить альтернативные варианты - приходите на прием к любому из акушеров-гинекологов Центра. С собой желательно захватить всю мед/документацию по обследованию и прошлой беременности. Всего хорошего.

Скажите пожалуйста, для чего нужны и что определяют анализы на аутоантитела к ДНК, кардиолипину и гомоцистеин Исследование уровней вышеперичисленных показателей необходимы при различной патологии: в акушерстве, кардиологии, хирургии, ревматологии и др. Поскольку эти факторы провоцируют гиперфункцию свертывающей системы крови - заставляют кровь постоянно свертываться без явных макропричин (например, таких, как порезы или травмы сосудов). Образование аутоиммунных антител и нарушение обмена гомоцистеина отрицательно влияет на эндотелий сосудов - микротравмирует его. А любая травма сосудистой стенки (макро или микро) является стимулом для активизации факторов свертывания и формирования в месте травмы тромба. Акушеры связывают такое гипертромбообразование с нарушением кровоснабжения плода на протяжении всей беременности (в невынашивании ее, осложненном течении (нарушение функции плаценты, низкая масса тела плода и пр)). Кардиологи видят в ней причину развития атеросклероза сосудов, инфарктов миокарда, гипертонической болезни и пр Хирурги - развитие послеоперационных осложнений - тромбозов и др. Помимо приобретенных факторов, повышающих свертываемость крови, существуют еще и группа врожденных - мутации системы гемостаза. Такие исследования также возможны и проводятся.

У меня Антифосфолипидные антитела первый раз когда сдавала анализы были 44 (норма-24), потом понизились в течении 2х месяцев до 27, без никакого лечения. Сразу после этого с помощью медицинских технологий, забеременела. С самого начала беременности начала принимать метипред 0,5 таб утром и Аспирин 100мг в день..На 8-9 нед перешла на 1/4. Потом отменила. Через 2 недели сдала Антифосфолипидные антитела- 35 (норма-24). Гемостазиограма сейчас и раньше нормальная. Врач говорит надо опять Метипред уторм принимать по 1/2 таб. Она бы назначила 1т таб утром. Или реополюглюкин. Или имуноцитотерапию кровью мужа. (Но у мужа хронический Гепатит Б) Жалоб вроде нет. ТТТ*3. Это первая беременность (Первично смешанное бесплодие). 39 лет. Имуноглобулинов от Антифосфолипидных антител в нашем городе и по близости нет. Я несколько раз до беременности сдавала на тестостерон в крови- всегда была норма. Другие гормоны, тоже без особых изменений. Интересно сколько мне Метипред надо принимать, в каких дозах и надо ли его вообще продолжать принимать?!! А то мой врач назначает. (Я бы промолчала если бы это был другой препарат, но он же совсем не безвредный) И вообще какая дальнейшая тактика и лечение с этими антителами на протяжении моей беременности? Я также поняла что на западе Глюкокортикоиды при таком диагнозе уже не назначают, особенно когда титр этих антител не намного превышают норму. Также, я поняла что и Ваша клиника держится такого же мнения?! А что Ваша клиника назначает в таких случаях. Если метипред не назначать?! Объясните по возможности по внятней. Так как нам до Москвы 2000 км и я не знаю если мы сможем доехать. Я зная, что лечение по интернету не делается. Но все напишите хоть какие препараты Вы в этих случаях используете без дозировки. (Аспирин я пью) Гамма-глобулинов по близости нет. Так кто же прав? Какова должна быть тактика в моем случае?! P.S. Как часто надо здавать на Антифосфолипидные антитела при беременности (раз в сколько недель, месяцев)? Титры аутоиммунных антител постоянно изменяются (без лекарственного воздействия). Снизить их выработку мы можем только с помощью иммунносупрессорных препаратов (к ним и относятся глюкокортикоиды). Как Вы правильно поняли, в нашей практике мы не используем данные препараты (только в особых случаях - наличие у пациентки доказанных аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, системная красная волчанка с тяжелым течением и пр). При повышении титров аутоиммунных антител тактика подготовки и ведения беременности строится по разному, в зависимости от вида антител с высокими титрами. Подавление отрицательного эффекта высоких титров антикардиолипиновых антител проводится с помощью антиагрегантной терапии (тромбоАсс, гепарин и пр) под контролем гемостазиограммы, допплеровских исследований кровотока, уровня Д-димера. Снижение количества антител к ДНК достигается с помощью внутривенных введений иммуноглобулина нормального человеческого. Коррекция титров антител к тканям щитовидной железы проводится с учетом результатов дообследования (гормональный профиль и пр). Все эти методы являются безопасными как для плода, так и для мамы (при отсутствии противопоказаний со стороны других органов). Помимо определения титров антифосфолипидных антител в динамике (один раз в 1-1,5 месяца), желательно исследование крови на другие тромбофилические факторы, которые могут провоцировать выработку высоких титро антифосфолипидных антител (гипергомоцистеинемия и пр). И коррекция при необходимости. Иммунизацию лимфоцитами мужа/донора есть смысл проводить или накануне зачатия, или в ранние сроки беременности (до 7-8 недели). Иммуноглобулины нормальные человеческие являются довольно распространенным препаратом. В наших аптеках они продаются свободно. Мы используем нижегородские. Возможно также использование импортных серий (Октагам и пр). На вопрос о продолжении использования метипреда и о его дозировке отвечать не буду по вполне понятной причине.

У меня год назад была замершая беременность. Я сделала анализ на АФЛ (г. Казань). Результат следующий: АТ к ХЧГ - 29, ф/л - 24, ДНК - 48, Fc - 28, ANCA - 12, Кол. - 43. Норма для всех результатов до +10. Не могли бы Вы указать, есть ли здесь антитела к кардиолипину и волчаночный антикоагулянт. Кроме того у меня АТ к ТГ 439,5 при норме 0-65. Врач в г. Казани назначила курантил по 1т. 2раза в день и имунноглобулин в/в 3 раза ч/з день до беременности. Врач, у которой я наблюдаюсь по месту жительства (г. Елабуга), настаивает на преднизолоне + аспирин и гепарин. Стоит ли применять преднизолон в моем случае?

Перечисленные Вами показатели относятся к диагностике антифосфолипидного синдрома. Наиболее "важными" считаются антитела к фосфолипидам (ф/л), ДНК, Fc, ANCI. Определение наличия волчаночного антикоагулянта производится при гемостазиологическом исследовании крови (гемостазиограмма). Поскольку уже обнаружены повышения титров к вышеперечисленным антителам, необходимо проведение мероприятий по их снижению. В нашем центре мы рекомендуем в таких ситуациях антиагрегантную (понижение активности тромбоцитов) и антикоагулянтную терапию и снижение титров антител (капельное введение иммуноглобулинов) по индивидуальным схемам (перед беременностью и на ее протяжении). Препараты глюкокортикоидных гормонов мы не используем (читайте статьи о глюкокортикоидных гормонах при беременности на нашем сайте). Кроме антифосфолипидных антител к прерыванию беременности могут приводить гипергомоцистеинемия (повышение уровня гомоцистеина, нарушения работы иммунной системы, аллоиммунные факторы (совпадение между супругами по антигенам тканевой гистосовместимости - HLA-антигенам). Если подобная диагностика проводится в Вашем городе, желательно обследование дополнить, чтобы максимально подготовиться к следующей беременности. Всего хорошего.

У меня обнаружили АТ к ФРН, в анамнезе 2-е неразвивающееся беременности(7-8 нед), во время второй прокапали иммуноглобулин (3 фл) - анализы - почти ни каких измемнений. Скажите, как вообще их можно убрать или снизить и что вообще можно сделать??? Лечение повышения антител к ФРН - терапия иммуноглобулинами. Возможно, что у вас есть дополнительные факторы невынашивания беременности. Рекомендуем пройти совместно с супругом исследование HLA 2 класса и исследование смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ), а также сдать иммунограмму. Эти исследования Вы можете пройти у нас в центре.

Я беременна(13 недель), принимаю метипред(3 мг) из-за повыш. тестостерона(5 при норме до 3,5). Подскажите, надо ли прерывать прием метипреда, чтобы проверить антитела к днк, фосфолипидам, гомоцестеин. Или достаточно не принимать таблетку перед сдачей анализа. Поскольку образование антител к фосфолипидам и ДНК - процесс аутоиммунный (нарушение работы иммунной системы в виде образования антител к своим собственным тканям), а метипред является сильным иммунносупрессором, то он подавляет скорость синтеза этих антител (теоретически, а практически не всегда). Поэтому сдавать подобные анализы необходимо после отмены препарата. Более того, действие препарата не заканчивается сразу после отмены - оно может сохраняться в течение нескольких недель. Поэтому Вы должны посоветоваться со своим лечащим врачом - когда отменять, как отменять и через какое время сдавать анализы. На уровень гомоцистеина препарат оказывает на такое сильное влияние.

Я сегодня получила анализы, пожалуйста, прокомментируйте, по возможности... 1 Антикардиолипин IgM (mPL)-1,5, 2 Антикардиолипин IgG (gPL)-3,5 , 3 Антитела к денатурированной ДНК (ss) 2,1, 4 Антитела к нативной ДНК (DS) 2.5 , 5 Антитела к микросомальному тиреоидному антигену-55.7, 6 Антитела к тиреоглобулину-39.8, 7Общий гомоцистеин плазмы крови, мкг/л-18.41 По данным обследования обнаружено повышение уровня общего гомоцистеина в плазме крови. Известно отрицательное влияние высоких цифр этого компонента крови на состояние эндотелия. Вызываемые им микротравмы внутренней стенки сосудов являются стимулом к тромбообразованию в сосудах. А повреждение фосфолипидного компонента стенки сосуда служит стимулом к образованию антител (антифосфолипидные антитела). Поэтому необходима коррекция. За назначениями обратитесь к своему лечащему врачу.

Являются ли обязательными эти анализы - волчаночный антикоагулянт и аутоантитела к ХГЧ - во время беременности (беременность 15 недель), и возможна ли терапия при плохих показателях, на что они влияют. Во время беременности связь между организмом матери и плода осуществляется благодаря плаценте. Через сосуды плаценты к ребенку поступают необходимые питательные вещества и кислород. "Плохая работа" плаценты может приводить к отставанию плода в развитии (несоотвествие размеров плода сроку беременности), к гибели плода и прерыванию беременности. Формирование плаценты начинается с самых ранних сроков беременности. Скоррегировать ("вылечить") уже развившиеся нарушения сложно, поэтому важное значение имеет своевременная диагностика факторов риска в работе плаценты и своевременная профилактическая терапия. Перечисленные анализы относятся именно к факторам риска плацентарной недостаточности, а также ряда других осложнений беременности (например, повышение АД у беременной женщины). Проведение анализов является обязательным, если - данная беременность протекает с осложнениями (например, уроза выкидыша) - были осложнения в предыдущих беременностях - в семье среди родственников распространены сердечно-сосудистые заболевания, у матери или у сестер наблюдались осложнения беременности.

www.cironline.ru

Фактор роста нервов, симпатическая система

В 40-50-х годах в Америке работал эмбриолог Виктор Хамбургер. Он одним одним из первых заинтересовался вопросом о том, как связаны между собой развитие органа и иннервирующего его центра. Опыты ставились на куриных эмбрионах. Хамбургер либо удалял закладку задней конечности эмбриона, либо подсаживал дополнительную рядом с  его собственной. Поскольку на ранних этапах развития тканевой несовместимости нет, конечность приживалась. Удаление конечности сопровожда лось уменьшением размеров всех частей спинального нервного аппарата, имеющего отношение к  иннервации данной конечности, то есть передних и задних рогов спинного мозга, спинальных и симпатических ганглиев. Подсадка дополнительной конечности приводила к обратному явлению - увеличению размеров этих нервных центров. Изменение объема нервной ткани было связано с увеличением  количества клеток и их размеров. Решающие эксперименты были поставлены Леве-Монтальчини. В ее опытах вместо дополнительной конечности подсаживались клетки опухоли саркомы. Конечно, такой эмбрион нежизнеспособен, он рано или поздно погибнет, но те явления, которые наблюдаются после трансплантации, представляют первостепенный интерес. На саркому реагируют только два типа клеток — клетки спинальных и симпатических ганглиев. И те, и другие начинают интенсивно делиться, происходит также бурный рост их аксонов. Периферия оказывается насыщенной их чувстельными и, главным образом, симпатическими окончаниями. Пучки симпатических волокон прободают кожу и образуют кисточки в среде, наружной по отношению к эмбриону. Симпатическая иннервация обнаруживается в тканях, где она обычно отсутствует.

Для выяснения механизма влияния саркомы на клетки ганглиев спинальный ганглий, взятый у эмбриона на 7 - 9-й день  развития, инкубировали в культуре рядом с кусочком саркомной ткани. При этом наблюдается интенсивный рост аксонов ганглия уже через 18 часов инкубации. В контрольном развитии аксонов практически не наблюдалось. Стало ясно, что эффект роста обусловлен каким-то веществом, выделяемым клетками опухоли. Одно из предложений состояло в том, что это вещество – нуклеопротеид, и поэтому решили исследовать действие змеиного яда на эффект роста, поскольку змеиный яд содержит фермент, ращепляющий нуклеопротеиды. Результат оказался неожиданным: змеиный яд сам по себе вызвал интенсивный рост аксонов в культуре. Этот эффект свойствен яду многих видов змей. Поскольку ядовитая железа змей является гомологом подчелюстной слюнной железы теплокровных, было исследовано действие гомогенната подчелюстной слюнной железы мышей на рост аксонов в культуре. Оказалось, что подчелюстные железы мышей являются еще более богатым источником вещества, вызывающего рост аксонов. Вещество это было названо фактором роста нервов (ФРН). Интересно отметить роль случайности в этих интереснейших открытиях. Случайно был открыт ФРН в змеином яде. Отсюда был сделан вывод о возможном наличии его в подчелюстных слюнных железах мышей, которые являются гомологом ядовитой железы змей. Оказалось, что исследователям необычайно повезло: мышь - единственный известный вид, у которого содержание ФРН в слюнных железах столь высоко. У других видов его в сотни и тысячи раз меньше.

Симпатическая системаСимпатическая система

ФРН выделили. Оказалось, что это белок. В слюнной железе мышей он состоит из пяти субъединиц: две - альфа, одна - бета и две - гамма. Ответственна за эффект роста аксонов только бета-субъединица. Функциональное значение альфа- и гамма-субъединиц неясно. ФРН из змеиного яда содержит только бета-субъединицу, сходную по строению, но не идентичную аналогичной молекуле из слюнной железы. Расшифрована последовательность аминокислот в субъединицах ФРН. Оказалось, что в бета-субъединице 50% аминокислот стоят в тех же положениях, что и в молекуле инсулина, что указывает на генетическое родство этих двух молекул.

Сейчас известно, что слюнные железы — наиболее богатый, но отнюдь не единственный источник ФРН в организме. Исследование синтеза ФРН, его наличие в данной клетке, ведется на уровне отдельных клеток методами генной инженерии. Участок генома, ответственный за синтез ФРН, выделяется из клеток железы и встраивается в геном бактерии Eschtricha coli (кишечной палочки). Это позволяет не только получать сам ФРН в больших количествах, но и дает материал для выделения фрагмента ДНК, ответственного за синтез этого белка. Фрагмент ДНК метится и вводится в исследуемую клетку. Если клетка синтезирует ФРН, то с рибосомами связаны нити мРНК, ответственной за синтез этого белка. Введенная в клетку меченая ДНК комплементарно присоединяется к мРНК, проходящей через рибосому. Рибосомы связаны с шероховатым эн-доплазматическим ретикулумом, поэтому наличие в достаточно большом количестве метки на ретикулуме служит критерием синтеза белка в данной клетке.

ФРН ускоряет рост аксонов, причем этот рост направленный, поскольку аксоны симпатических клеток обладают хемотаксисом, что было продемонстрировано на индивидуальном аксоне в культуре. Направление роста аксона в течение короткого времени удавалось изменить, перемещая пипетку, из которой поступал раствор ФРН. Таким образом, иннервация данной ткани симпатической системой зависит от того, способна ли эта ткань синтезировать и выделять ФРН. ФРН является указателем для роста симпатических аксонов, определяющим наличие или отсутствие симпатической иннервации данной ткани. В свете этих данных становится понятным необычное распределение симпатических волокон после трансплантации саркомы. Поскольку опухоль выделяет ФРН, организм оказывается насыщенным этим белком, исчезают существующие в норме градиенты и определяемая ими направленность роста аксонов.

ФРН выделяется и клетками центральной нервной системы (ЦНС). Наиболее интенсивный его синтез происходит в гиппокампе, хотя клетки и многих других отделов ЦНС способны его синтезировать и выделять. В ЦНС на ФРН реагируют клетки не адренергической природы, а клетки, выделяющие другие медиаторы, в частности ацетилхолин. Впервые это было продемонстрировано, когда в желудочки мозга ввели пипетку, из которой в небольших количествах постоянно поступал раствор ФРН. При этом аксоны клеток симпатических ганглиев начинали расти не по направлению к периферии, а по направлению к спинному мозгу, а затем в составебоковых столбов спинного мозга начинали растивверх. Причина роста — градиент концентрацииФРН от головного мозга к спинному, который вос-принимается аксонами клеток симпатических ганг-лиев. То же наблюдается при пересечении всех аф-ферентных путей к одной из структур мозга —гиппокампу, осуществляемом с помощью специальной операции. Причина этого явления состоит втом, что клетки гиппокампа в большом количестве выделяют ФРН. В норме выделяющийся клетками гиппокампа ФРН поглощается аксонами клеток некоторых областей коры и подкорковых структур,образующих синаптические контакты с клетками гиппокампа. Поглощаемый ФРН транспортируется в тело клетки. Перерезка аксонов, подходящих к гиппокампу, ведет к исчезновению "потребителей"ФРН и накоплению его в значительном количестве в области гиппокампа. Позже было обнаружено,что синтез и выделение ФРН, хотя и в меньшем количестве, чем в гиппокампе, осуществляются и многими другими (но не всеми) структурами центральной нервной системы. Таким образом, внутри центральной нервной системы ФРН является также одним из факторов, определяющих топографию связей между разными отделами.

Как регулируется выделение ФРН клетками,способными его синтезировать? Идет ли это выделение постоянно и равномерно или существуют стимулы, способные ускорить или замедлить его выделение? Вопрос недостаточно изучен, и полной

картины регуляции выделения этого белка не существует. Однако Леви-Монтальчини и ее соавторы сообщили об одном крайне интересном факте. Существует линия мышей, склонных под влиянием внешних воздействий проявлять бурно выраженную агрессивную реакцию. Оказалось, что во время приступа ярости в крови у таких животных значительно повышается содержание ФРН. Эти результаты ставят много интересных вопросов. Влияет ли и как влияет избыток ФРН на клетки-потребители этого белка? Существуют ли другие факторы, способные влиять на концентрацию ФРН в крови?

В свете этих данных не выглядит чрезмерно смелым предположение, что не только особенности структуры и функции центральной нервной системы определяют поведение, но и поведенческие акты, в свою очередь, способны оказывать существенное влияние на особенности структуры и функции центрального аппарата, реагирующего на нервные воздействия.

ФРН — компонент, необходимый для жизнедеятельности симпатических нервных клеток. Клетки в культуре (то есть выращиваемые вне организма)не могут существовать, если в среду не внесен ФРН. Более того, оказалось, что введение животному (мыши, крысе) антител к ФРН в течение нескольких недель, начиная с рождения, ведет к гибели большей части нервных клеток в симпатических ганглиях.

Иммунохимическая и химическая десимпатизация

При введении новорожденному крысенку антител к ФРН, начиная с первого дня рождения, в течение двух недель в симпатических ганглиях гибнет более 90% нервных клеток. Животное оказывается почти полностью лишенным симпатической иннервации. На этом основан метод иммунохимической десимпатизации. Причины гибели клеток неясны. Морфологически в клетке при действии антител зарегистрирован лизис ядерной оболочки и некоторые другие изменения. При отсутствии ФРН (действии антител) наблюдается гибель значительной части клеток не только у новорожденного, но и у взрослого животного. Эти результаты открывают широкие возможности дальнейших исследований. Одним из важнейших результатов, полученных с помощью ФРН, является открытие механизма направленного роста, своего рода "адрес", в соответствии с которым происходит (или не происходит) иннервация тех или иных тканей симпатической системой.

Постоянная потребность клеток симпатической системы в ФРН свидетельствует еще об одной важной функции этого белка. ФРН — не только фактор морфогенеза, то есть анатомической структуры и связей, раз и навсегда установленного в начальном периоде развития. Источник ФРН и потребитель этого белка — динамическая система, функционирующая в течение всей жизни организма, поскольку недостаток ФРН ведет к морфологическим перестройкам и у взрослого животного.

Антитела к фактору роста - первый из открытых, но не единственный способ избирательного разрушения клеток в симпатических ганглиях. Транцер и Тоенен обнаружили, что избирательное разрушение клеток симпатических ганглиев вызывает 6-оксидофамин, аналог предшественника норадреналина дофамина, с дополнительной ОН-группой у шестого углеродного атома в бензольном кольце. При внутривенном введении взрослым животным 6-оксидофамин накапливается в окончаниях симпатических нервов. Благодаря отличию в структуре от дофамина, фермент, превращающий дофамин в норадреналин, не может "работать" с 6-оксидофамином. Накапливаясь в болыцих количествах и обладая значительной окислительной способностью, 6-оксидофамин приводит к гибели симпатических окончаний. Тело клетки при этом не повреждается значительно, поскольку синтез норадреналина и его захват из внешней среды у вполне развившегося, "взрослого" нейрона происходит только в нервных окончаниях. Через несколько недель разрушенные нервные окончания вырастают вновь и иннервация восстанавливается. введении 6-оксидофамина новорожденным животным происходит необратимая десимпатизация — гибель клеточных тел в ганглиях.

Другим веществом, вызывающим необратимую десимпатизацию, то есть гибель клеток симпатической системы, является гуанетидин - вещество, истощающее запасы катехоламинов в клетках, используемое в малых дозах как антигипертензивное средство. При введении животным гуанетидина в течение трех недель со дня рождения можно получить животных, у которых в симпатических ганглиях остается менее 1% нервных клеток, то есть наблюдается практически полная десимпатизация. Механизм действия гуанетидина, причины гибели нервных клеток при действии этого вещества неясны. Известно лишь, что при действии этого вещества наблюдается набухание митохондрий, однако аналогичное явление возникает и при действии других веществ, не ведущих к разрушению клеток.

Иммунохимическую и химическую десимпатизацию можно осуществлять на мелких лабораторных животных (крысах и мышах) и получать десимпати-зированных животных в достаточно большом количестве, что открывает большие возможности для исследования функций симпатической системы.

Зачем нужна симпатическая нервная система?

Избирательное разрушение клеток симпатических ганглиев с помощью антител к ФРН, а также методы десимпатизации 6-оксидофамином и гуане-тидином открывают новые возможности исследования роли симпатической системы в организме. Исследование роли симпатической системы началось задолго до создания этих методов. Еще в 1927 году Уолтер Кеннон осуществил хирургическое удаление симпатической системы. Эти эксперименты дали важные результаты для понимания функции симпатической системы как целого. Однако хирургическое удаление симпатической системы — это сложная операция, которая осуществима только на крупных животных (кошки, собаки) и очень трудоемка. Симпатические цепочки расположены вблизи позвоночника, вдоль всего тела. Во время операции доступ к цепочкам осуществляется со спины (это менее травматично). Сначала удаляется одна цепочка, после заживления раны — другая.

Удивительный факт, обнаруженный Кенноном с соавторами и другими авторами, повторившими этот эксперимент, состоял в том, что десимпатизи-рованное животное на первый взгляд не отличалось от контрольного. Оперированные животные ели, пили, у них поддерживали уровень артериального давления и температуру тела близкими к нормальным, и они даже были способны размножаться. Однако уже в первой работе Кеннон, а вслед за ним и другие исследователи, повторившие эту операцию, обнаружили отличия между оперированными и контрольными животными. Десимпатизированные животные оказались значительно менее выносливыми в стрессовых ситуациях, независимо от того, какой причиной был вызван стресс. Интенсивная физическая нагрузка, голод и жажда, охлаждение или перегрев, минимальные шоковые дозы инсулина - по отношению ко всем этим воздействиям де-симпатизированные животные оказались значительно менее выносливыми, чем контрольные. На основании этих данных был сделан вывод, что симпатическая система — это система, расширяющая диапазон выносливости организма при экстремальных воздействиях.

Иммунохимическая и химическая десимпатизация открывает дополнительные возможности для исследований, поскольку экспериментатор не ограничен ни размерами исследуемых объектов, ни их количеством. Один из интересных вопросов - исследование реакции десимпатизированных животных на возбуждение внешними стимулами, которые сами по себе не влияют на параметры внутренней среды организма. Изменение этих параметров возникает лишь как ответ самого организма на внешние воздействия.

В качестве объекта исследования использовали крыс линии КМ, выведенной на Биологическом факультете МГУ Л.В. Крушинским и сотрудниками. Эти животные при действии сильного звука развивают бурную двигательную активность, которая заканчивается эпилептиформным судорожным приступом. При кратковременном действии звука (в течение нескольких минут) лишь в редких случаях наблюдается нарушение движений, вызванное кровоизлиянием в мозг. Десимпатизированные животные оказались очень чувствительными к действию звонка: 80% их гибли уже в первые минуты действия звука. Никаких признаков кровоизлияния в мозг у этих животных обнаружено не было. Причина гибели оказалась совсем иной — свертывание крови в полостях сердца. Причины свертывания и именно такой его локализации неясны. Однако если причиной гибели является свертывание, его легко предотвратить: достаточно ввести животному перед опытом антикоагулянт - вещество, предотвращающее свертывание крови. У таких животных, как и следовало ожидать, образования тромбов не наблюдалось. Однако это не исключило гибели животных при действии звука. Причина гибели была другой -обширное кровоизлияние в легкие. Эти данные дают возможность заключить, что у животных, лишенных симпатической нервной системы, ослаблены регуляторные механизмы, функционирующие не только при непосредственных влияниях на параметры внутренней среды организма (изменение температуры, кровопотеря и др.), но и при стрессовых ситуациях, вызванных, например, такими воздействиями, как громкий звук.

Снижение выносливости к стрессу после разрушения симпатической системы можно наблюдать и при воздействиях, более близких к естественной ситуации. При объединении мышей в одной клетке у животных также возникает стрессовая ситуация. Это связано с установлением иерархии в группе животных. Примерно через сутки устанавливаются иерархические отношения: выделяется доминант, который занимает наиболее удобное место в клетке. Прочие члены сообщества уступают ему место при кормлении и т.д. Если в клетку подсаживается "чужак", доминант кидается на него первым. Представлялось интересным посмотреть, как будут устанавливаться иерархические отношения в сообществе десимпатизированных животных. Десимпатизацию проводили с помощью 6-оксидофамина, который вводили за неделю до эксперимента. Как отмечалось выше, 6-оксидофамин разрушает симпатические окончания. При объединении в группу десимпатизированных этим методом мышей уже в первые сутки наблюдалась гибель одной трети животных. Причины гибели в этом случае остались неясными. Такие результаты получены на животных, десимпатизированных 6-оксидофамином во взрослом состоянии, то есть с уже сформировавшимся стереотипом поведения. При десимпатизации с рождения при использовании гуанетидина в качестве действующего вещества результаты получаются иные. Такие животные, будучи объединены в группу, в возрасте 4-6 недель отказываются от борьбы за доминирующее положение. Не возникает конфликтов, не выделяется доминант в группе. Происходит перестройка поведения, соответствующая возможностям организма таких животных.

Таким образом, описанные методы десимпатизации дают возможность судить о роли симпатической системы в регуляции функций организма. Исследования Кеннона и соавторов показали, что симпатическая система играет большую роль в регуляции постоянства внутренней среды организма при значительных отклонениях ее от нормы. Исследования с помощью иммунохимической и химической десимпатизации показали, что стрессовые состояния, вызванные афферентными воздействиями, могут привести к смертельному исходу, если регуляторные влияния симпатической нервной системы ограничены или отсутствуют.

Открытие фактора роста нервов и механизмов его действия - одно из фундаментальных открытий последних десятилетий. Это открытие дает начало исследованию одной из сложнейших проблем эмбриологии и нейрофизиологии — механизмов установления нервных связей между управляющими центрами и эффекторами в пределах нервной системы и на периферии. Получаемые в результате действия фактора роста нервов, антител к нему, других веществ, подавляющих развитие симпатической системы, уникальные модели открывают широкие возможности как для исследования функций симпатической системы, так и для анализа ряда нарушений регуляции, существенных для клинической практики. Количество работ, публикуемых по этим проблемам ежегодно, исчисляется многими сотнями. Исследование действия ФРН и десимпатизации связано с множеством проблем. Так, по отношению к ФРН обнаружено два типа рецепторов, выполняющих разные функции в клетке. Одни необходимы для проведения сигнала в нервную клетку, а другие ускоряют миграцию Шванновских клеток, окутывающих нервное волокно, то есть играют существенную роль при росте аксонов. ФРН участвует в регуляции выделения гормонов гипофиза. ФРН предотвращает токсическое действие антиканцерогенных препаратов на сенсорные нейроны, играет роль в пластичности нервных клеток при перестройке зрительного восприятия.



biofile.ru

Аутоантитела к фактору роста нервов в крови детей, больных шизофренией + "

Автореферат диссертации по теме "Аутоантитела к фактору роста нервов в крови детей, больных шизофренией"



ч£> На правах рукописи

ТУРКОВА Ирина Львовна

АУТОАНТИТЕЛА К ФАКТОРУ РОСТА НЕРВОВ В КРОВИ ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ.

03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1998

Работа выполнена в лаборатории молекулярной биохимии Научного центра психического здоровья РАМН

Научные руководители:

доктор медицинских наук доктор медицинских наук

Т.П. Клюшник, И.А. Козлова.

Официальные оппоненты: Член-корр. РАМН, доктор биологических наук доктор медицинских наук

В.Б. Спиричев, М.Г. Узбеков.

Ведущая организация:

Российский Государственный Медицинский Университет им. Н.И. Пирогова

Защита диссертации состоится " ¿Р^Р '1998 г. в ^часов на заседании Диссертационного совета Д 001. 02. 01 при Институте Питания РАМН по адресу:

г. Москва, 109240, Устьинский проезд, д. 2 / 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Питания РАМН.

Автореферат разослан " ¿^¿Р " а 1998 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

кандидат медицинских наук В.М. Жмкпченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы.

До настоящего времени шизофрения остается заболеванием с неясной этиологией и патогенезом. В последние годы все больше исследователей, работающих в этой области, рассматривают шизофрению как болезнь развития мозга [Waddington J.L., 1993; Weinberger D.R., 1995]. Накоплены данные, которые свидетельствуют о том, что мозг больного шизофренией имеет целый ряд не только функциональных, но и структурных аномалий, многие из которых, как полагают, формируются на ранних стадиях нейроонтогенеза [Орловская Д.Д. и Уранова H.A., 1990; BogertsB., 1993].

Установлено, что процессы нейроонтогенеза, в свою очередь, находятся под контролем нейротрофинов (НТ) - полифункциональных регуляторов белковой природы, играющих существенную роль на всех этапах нейронального развития (особенно на стадиях миграции, созревания и дифференцировки нейронов) [Крыжановский Г.Н. и Луценко В. К., 1995; Korsching S., 1993; Snider W.D., 1994]. Одним из наиболее изученных представителей семейства нейротрофинов является фактор роста нервов (ФРН). ФРН оказывает воздействие на нейроны, поддерживая и регулируя интенсивность и направление роста аксонов и дендритов, контролируя выживание нейронов и образование нейрональных контактов [Levi-Montalchini R., 1987; Hamburger V., 1993]. Представляется вероятным, что наблюдаемые при шизофрении признаки нарушения нейронального развития (изменение формы, размеров и ориентации нейронов, их элиминация без заместительного глиоза), в определенной степени, могут быть обусловлены изменениями в системе нейротрофинов, в частности, ФРН.

Эчи нарушения могут быть связаны с уменьшением количества или снижением функциональной активности ФРН, что, в свою очередь, может быть следствием увеличения количества аутоантител к нему. Действительно, в ряде экспериментов было показано, что введение антител к ФРН в организм экспериментальных животных на ранних этапах нейроонтогенеза приводит к возникновению различных аномалий развития нервной системы [Johnson Е.М. et al., 1980; Aloe L. and Cozzari С., 1981].

С другой стороны, многочисленными исследователями были отмечены изменения в системе аутоиммунитета при шизофрении. Так, в периферической крови больных шизофренией обнаружены антитела к некоторым нейроспецифическим антигенам, таким как астроцитарный белок S-100, мембранные белки нервной ткани и др. [Вартанян М.Е. и Коляскинн Г.П., 1974; Коляекина Г.И. и Ьурбаева Г.Ш., 1979; Sirota Р., 1990; Henneberg А.Е. et al., 1994]. Однако, мы не встретили данных, касающихся изучения аутоантител к ФРН (ААТ к ФРН) при шизофрении.

При рассмотрении шизофрении как болезни развития мозга, особый интерес представляют исследования шизофрении детского возраста. До настоящего времени вопросы патогенеза детской шизофрении относятся к наименее изученым в психиатрии. Клинически выраженные формы детской шизофрении приводят к значительным нарушениям как психического, так и физического развития в наиболее восприимчивом периоде постнатального онтогенеза, что находит свое отражение в специфичности и уникальности основных шизофренических расстройств, особенностях течения шизофренического процесса и тесно связанного с этими факторами прогноза [Снежневский A.B., 1983].

Все вышесказанное определяет актуальность исследования природы и уровня ААТ к ФРН в крови детей, больных шизофренией.

Цель исследования:

Изучить возможное участие ААТ к ФРН в патогенезе шизофрении.

Задачи исследования:

1. Разработать вариант твердофазного иммуноферментного анализа, позволяющий количественно определять уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови обследуемых.

2. Провести препаративное выделение ААТ к ФРН для выяснения их иммунохимической природы.

3. Определить уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови у здоровых детей.

4. Определить уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, в двух возрастных группах:

а) в возрасте от 5 до 10 лет (детская группа)

б) в возрасте от 11 до 15 лет (препубертатная и пубертатная группа).

5. Сопоставить уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния.

6. Определить иммунореактивность (ИР) сыворотки крови детей, больных шизофренией, к другим нейроспецифическим антигенам (астроцитарному белку 8-100, глиальному фибриллярному кислому протеину (ГФКП) и мембранному белку нервных клеток из семейства интегринов МП-65) и сопоставить с уровнем ААТ к ФРН.

Научная новнзна результатов исследования.

Разработан авторский (в соавторстве с д.м.н. Т.П. Клюшник и к.м.н. Е.В. Даниловской) вариант твердофазного иммуноферментного анализа

для количественного определения уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови человека.

Впервые проведено определение количественного содержания ААТ к ФРН в сыворотке крови детей и отмечено достоверное возрастание (р<0.01) данного показателя у детей, больных шизофренией, по сравнению со здоровыми детьми.

Впервые выявлена взаимосвязь уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния (формой течения заболевания и остротой патологического процесса).

Впервые проведено комплексное изучение иммунореактивности к ФРН и трем другим нейроспецифическим антигенам (Б-100, ГФКП и МП-65) сыворотки крови детей, больных шизофренией и выявлено наиболее выраженное (по сравнению с другими антигенами) повышение уровня ААТ к ФРН.

Результаты проведенного исследования расширяют и дополняют существующие представления о шизофрении как о болезни, возникающей на ранних этапах развития и имеющей в своем патогенезе аутоиммунный компонент. Показано, что этот компонент выражен в виде повышения уровня ААТ к ФРН (по сравнению с другими нейроспецифическими антигенами).

Научно-практическая значимость работы.

Выявленная в работе взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, и особенностями их клинического состояния является основой для использования показателя уровня ААТ к ФРН в качестве объективного биологического критерия

для уючнения формы течения шизофрении, степени прогредиентности и осI роты патологического процесса.

Полученные результаты могут служить основой также для разработки новых подходов к поискам средств лечения и предотвращения развития болезни.

Апробация работы и публикации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на международном симпозиуме "Физиологические и биохимические основы активности мозга" (Санкт-Петербург, 1994), XII Российской конференции "Гуморальные и клеточные факторы иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1995), X конгрессе по психиатрии (Мадрид, Испания, 1996), межлабораторной конференции НЦПЗ РАМН (Москва, 1997). По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы (233 источника). Работа изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 11 рисунков и 7 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Определение уровня ААТ к ФРН проводили в сыворотках крови обследуемых детей.

Характеристика обследованных. В исследование включены нацисты с верифицированным диагнозом шизофрения, госшпализированные или выявленные амбулаторно в отделении детской психиатрии НЦПЗ РАМН в период с 1992 по 1997 год (Руководитель отделения - д.м.н. Козлова H.A.).

Всею обследовано 161 больной не старше 15 лет (106 мальчиков и 55 девочек). Возраст больных к моменту первичного обследования варьировал от 5 до 15 лет.

Наряду с общими закономерностями течения шизофрении у детей отмечают влияние возраста на клинику и течение заболевания, так называемый "возрастной патоморфоз" [Снежневский A.B., 1983]. В результате клинического анализа были выделены две группы детей, больных шизофренией, в зависимости от возраста на момент обследования: и возрасте от 5 до 10 лег и в возрасте от 11 до 15 лет. Первую группу составили 65 детей (54 мальчика и 11 девочек), вторую -96 (52 мальчика и 44 девочки).

Каждую из возрастных групп изучали с позиций дебюта заболевания, степени прогредиентности, длительности заболевания. Основное внимание уделялось формам течения шизофрении и остроте процесса. Выделены три формы детской шизофрении, различающиеся по степени прогредиентности: со злокачественным течением, прогредиентным и малопрогредиентным. В каждой из возрастных групп обследованных больных рассматривали именно эти формы шизофрении.

В первую возрастную группу включены: 13 больных со злокачественным течением шизофрении, 34 больных с прогредиентным течением и 8 больных с малопрогредиентным течением шизофрении.

Во вторую возрасшую группу включены: 10 больных со злокачественным течением шизофрении, 20 больных с прогредиентным течением и 66 больных с малопрогредиентным течением шизофрении.

Контрольные группы были отобраны по возрастному принципу соответственно группам обследованных больных. Первую контрольную группу составили 139 здоровых детей в возрасте от 5 до 10 лет (73 мальчика и 66 девочек), вторую - 117 здоровых детей в возрасте от 11 до 15 лет (62 мальчика и 55 девочек). Взятие крови осуществляли при диспансерном обследовании, проводимом в детской поликлинике № 103. Критерием для отбора здоровых обследуемых служило отсутствие признаков психической и неврологической симптоматики, а также инфекционных заболеваний в течение 2-х месяцев, предшествующих обследованию.

Метод иммуноферментного анализа. Для определения уровня ААТ к ФРН в сыворотках крови разработан вариант твердофазного иммуноферментного анализа, для постановки которого в качестве антигена использован ФРН, выделенный из семенной плазмы быка [Нагрег G.P., et al., 1982]. Детекцию связавшихся с ФРН компонентов сыворотки крови проводили с использованием антител к гамма-фракции, позволяющих суммарно определять IgG и IgM человека. Уровень ААТ к ФРН определяли в единицах оптической плотности (О.Д.).

Для определения уровня ААТ к нейроспецифическим антигенам: S-100, ГФКП и МП-65 был использован вариант твердофазного иммуноферментного анализа, разработанный в Центре "Чернобыль-Тест" [Poletaev А.В., et al., 1996]. Тест-антигены были любезно предоставлены д.м.н. А.Б. Полетаевым - руководителем фонда "Чернобыль-Тест".

Метод иммуноаффинной хроматографии. Препаративное выделение ААТ к ФРН из сыворотки крови осуществляли методом иммуноаффинной

хроматографии. Иммуносорбент был приготовлен на основе BrCN-сефарозы ("Pharmacia", Швеция), конъюгированной с ФРН, выделенным из семенной плазмы быка. Конъюгирование ФРН с BrCN-сефарозой осуществляли по методике фирмы-производителя.

Электрофорез в полиакриламидном геле. Для анализа степени чистоты выделенных ААТ использовали метод электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия по Леммли [L.aemmli U.K., 1970].

Метод иммуноэлектроблоттинга. Специфичность выделенных ААТ к ФРН определяли методом иммуноэлектроблоттинга [Towbin Н., et al., 1979|.

Метод перекрестного иммуноэлектрофореза. Для определения класса выделенных на иммуноаффинной колонке ААТ, связывающих ФРН, использовали метод перекрестного иммуноэлектрофореза в агарозиом геле [Clarke Y., and Freeman Т., 1968].

Статистическая_обработка_данных. Для обработки

экспериментальных данных была использована программа Statgraf. В обследуемых группах здоровых и больных детей вычисляли значения среднего уровня ААТ к ФРН (М) и среднего квадратичного отклонения (ст). Достоверность отличия средних величин в обследованных группах определяли с использованием t-критерия Стыодента [Митропольский А.К., 1971]. Достоверность изменения исследуемых параметров в динамике определяли с помощью V-критерия Вилкоксона [Гублер Е.В. и Генкин A.A., 1973]. Закон распределения параметров устанавливали, используя ^.-критерий Колмогорова-Смирнова [Митропольский А.К., 1971].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Иммунохимическая характеристика ААТ к ФРН, определяемых в сыворотке крови обследованных детей.

С помощью предложенного в настоящей работе варианта твердофазного иммуноферментного анализа, было выявлено присутствие ААТ к ФРН в сыворотке крови всех обследованных детей.

Для изучения иммунохимической природы выявленных ААТ, с помощью иммуноаффинной хроматографии была выделена белковая фракция сыворотки крови, которая связывается с ФРН, и проведен ее электрофоретический и иммунохимический анализ.

Электрофореграмма фракции сыворотки крови, связавшейся с ФРН на иммуноаффинной колонке, приведена на рис.1.

Рис. 1. ЗОБ - электрофорез аффинных ААТ к ФРН, выделенных из сыворотки крови человека.

+

й- н- вела 1$М Н- цепь

Ь-цепь

1- стандарты молекулярной массы от "-" к "+": 94, 67, 43, 30, 20 кД

2- фракция, специфически связавшаяся с ВгСЫ - сефарозой, конъюгированной с ФРН.

('вязавшаяся с ФРН фракция представлена тремя белковыми зонами с молекулярным весом 70 кД, 56 кД и 23 кД, соответствующими по молекулярной массе тяжелой цепи ^М, тяжелой цепи и легкой цепи, одинаковой для иммуноглобулинов обоих классов.

11ммупо_)лекф(>форез связавшихся с ФРН белков, и последующая их преципитация в геле антителами к и ^М человека, приведенные на рис.2, показали, что связавшиеся с ФРН белки представляют собой иммуноглобулины класса ^С и 1цМ.

Рис. 2. Иммуноэлектрофорез аутоантител к ФРН, выделенных из сыворотки крови человека.

.....

1 2

1- преципитация с кроличьими антителами к человека.

2- преципитация с кроличьими антителами к ^М человека.

С помощью иммуноэлектроблоттинга показано, также, что эти иммуноглобулины не связываются с другими белками семенной плазмы. Анализ электрофореграммы, приведенный на рис.3, свидетельствует, что выделенные аффинные антитела окрашивают только зону, соответствующую фактору роста нервов.

Рис. 3. БОБ - электрофорез семенной плазмы быка и иммуноблоттинг с использованием аффинных ААТ к ФРН, выделенных из сыворотки крови человека.

1 2

1- БОЬ - электрофорез семенной плазмы быка.

2- иммуноблоттинг семенной плазмы быка с использованием аффинных ААТ к ФРН из сыворотки крови человека.

Таким образом, иммунохимический и электрофоретический анализ выявленных в крови ААТ показал, что они представляют собой иммуноглобулины класса и 1§М и не связываются с другими белками семенной плазмы, которые могут присутствовать в используемых препаратах ФРН в качестве примесей.

Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови здоровых детей и детей, больных шизофренией.

ААТ к ФРН обнаружены в крови всех обследованных детей, как здоровых, так и больных шизофренией (таблица I).

Таблица 1. Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови обследованных детей. _ _

Обследованные группы Контроль Шизофрения

5-10 лет 0.8010.19 п= 139 1.1010.28 п = 65

11-15 лет 0.7810.21 п= 117 1.0710.25 п = 96

Из представленных данных видно, что у здоровых детей от 5 до 15 лет в крови присутствует определенное количество ААТ к ФРН, и этот показатель не зависит от возраста. У больных шизофренией, по сравнению со здоровыми детьми, наблюдается достоверное повышение (р<0.01) уровня ААТ к ФРН.

Достоверных огличий между показателями уровня ААТ к ФРН при сравнении первой и второй возрастных групп детей, больных шизофренией, не выявлено. Таким образом, наблюдаемое влияние возраста на клинические особенности шизофрении у детей, так наэывамый "возрастной патоморфоз", не отражается на величине такого аутоиммунного показателя, как уровень ААТ к ФРН.

На следующем этапе работы изучали наличие взаимосвязи уровня ААТ к ФРН с формой течения и стадией заболевания.

Взаимосвязь уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния.

При изучении взаимосвязи между уровнем ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, и особенностями их клинического состояния основное внимание уделялось формам течения шизофрении и стадии заболевания на момент обследования.

Область значений показателя уровня ААТ к ФРН для удобства сопоставления была подразделена на интервалы. Поскольку параметры распределения уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови здоровых детей не противоречат гипотезе о нормальном законе распределения, то можно ожидать, что в интервале М)д ± 51Л находится большая часть значений этого показателя («68%) [Митропольский А.К., 1971]. Поэтому уровень ААТ к ФРН, значения которого попадают в данный интервал (Мэд ± 81д) и расположены между величинами 0.6 и 1.0, условно был назван "нормальным". Такой уровень ААТ к ФРН был выявлен у 70% детей в контрольных группах и лишь у 41% детей, больных шизофренией. У 17% здоровых детей содержание ААТ к ФРН в сыворотке крови было ниже 0.6, поэтому эти значения уровня ААТ к ФРН оказались вне рамок данного интервала. Больных шизофренией со столь низким содержанием ААТ к ФРН в сыворотке крови выявлено не было.

Уровень ААТ к ФРН, значения которого попадают в интервал от Мм+51Л до М,д+25зл, расположенные между величинами 1.0 и 1.2, мы назвали "повышенным". В обследованных нами группах, в этот поддиапазон входят лишь 13% здоровых детей (что совпадает с теоретическими ожиданиями), в то время как среди детей, больных шизофренией, 34% имеют такой показатель.

И, наконец, в третьем интервале, превышающем М,д+25зд, теоретически лежит меньше 3% значений показателя нормального

распределения. В обследованных нами группах ни у одного из здоровых дек-й не было столь высокого уровня ААТ к ФРН, тогда как значения данного показателя в сыворотках крови детей, больных шизофренией, оказывались в третьем интервале в 25% случаев. Поэтому уровень ААТ к ФРН, величины в котором больше чем 1.2, мы назвали "высоким", а сыворотки крови с таким содержанием ААТ к ФРН - "гиперактивными".

При изучении взаимосвязи уровня АА'Г к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с формами течения заболевания, выделяли злокачественную, прогредиенгную и малопрогредиентную шизофрению. Час го га встречаемости сывороток (%), с "высоким" и "нормальным" уровнем ААТ к ФРН при злокачественной, прогредиентной и малопрогредиентной формах течения шизофрении по сравнению с контрольной группой, представлена на рис. 4.

Рис. 4. Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови детей при разных формах течения шизофрении.

I Высокий уровень ААТк ФРН □ Нормальный уровень ААТ к ФРН

^нжачссгвениая Прогредиенгная Малопрогредиептная Контроль

Лиа.'пи представленных данных покачал, что частота встречаемости сытшроюк с "высоким" уровнем ААТ к ФРН максимальна при злокачественной форме течения шизофрении и снижается при переходе к малопрогредиентной форме. И наоборот, частота встречаемости сывороток с "нормальным" уровнем ААТ к ФРН, минимальна при злокачественной форме течения шизофрении и возрастает при переходе к малопрогредиентной форме. Таким образом, можно отметить, что уровень ЛАГ к ФРН связан со степенью прогредиентности патологического процесса, которая нарастает по мере продвижения от малопрогредиентной формы шизофрении к злокачественной ее форме.

Мри тучепии вшпмосвязи уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией, со стадией патологического процесса, рассматривали активное состояние болезни и ремиссию. Средние значения неследуемого показателя на данных стадиях заболевания, по сравнению с контролем, представлены на рис. 5.

Рис. 5. Уровень ААТ к ФРН в крови детей, больных шизофренией, в острой фазе заболевания и в ремиссии (М±о).

X

1.5

с о

1.25

Koiiipo.ii, ремиссии

острая фаза >аболевания

- отмечено достоверное отличие (р<0.01).

Средний уровень ААТ к ФРН в [руине больных, находящихся в остром состоянии, достоверно выше данного показателя в группе больных, находящихся в ремиссии (р<0.()1).

Выявленная взаимосвязь между уровнем ААТ к ФРН, с одной стороны, и оадпей заболевания - с другой, была подтверждена динамическими исследованиями ряда пациентов в период обострения и ремиссии (рис. 6).

Рис. 6. Уровень ААТ к ФРН в крови больных шизофренией в период обострения и ремиссии.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

И Острая стад« табопряашя □ Ремиссии

1-16 - обследованные больные

Данные, приведенные на рис. 6, свидетельствуют, что уровень ААТ к ФРН в крови больных детей не является постоянным: он достоверно (р<0.02) повышается при обострении заболевания и снижается при выходе процесса в стадию ремиссии.

Поскольку известно, что при шизофрении выявляется целый спектр ЛАТ к различным ЛГ" мозга, было важно сопоставить уровни этих ААТ с соответствующим уровнем для ФРН у детей (в литературе мы не обнаружили данных, касающихся определения уровня ААТ к нейросиецифическим белкам при детской шизофрении).

Мы проанализировали частоту встречаемости сывороток с высоким показателем титра ААТ, т.н. "гиперактивных" сывороток у здоровых и больных шизофренией детей по отношению к четырем исследуемым антигенам: ФРН, астроцитарному белку Б-ЮО, глиальному фибриллярному кислому протеину (ГФКП) и мембранному белку нервных клеток из семейства интегринов МП-65 (таблица 2).

Таблица 2. Частота встречаемости "гиперактивных" сывороток крови у здоровых и больных шизофренией детей по отношению к четырем нейроспецифическим антигенам.

Ашиген Кол-во обследованных, сыворотки крови которых "гиперактивны" (%).

контрольная группа дети, больные шизофренией

ФР11 1.5 32.0

Б-100 1.6 12.0

ГФКП 2.0 7.0

МП-65 1.6 14.0

Выявлено увеличенное количество гиперактивных сывороток у детей, больных шизофренией, по отношению к каждому тест-антигену.

Час К)1 а встречаемости "гиперактивных" сывороток различна для исследуемых антигенов, но наиболее она высока для ФРН.

Таким образом, 1) достоверное повышение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови детей, больных шизофренией; 2) взаимосвязь уровня этих ААТ с формой течения и стадией заболевания; 3) наиболее выраженное повышение титра ААТ к ФРН по сравнению с тремя другими нейроспецифическими антигенами, дают основание полагать, что ААТ к ФРН оказываются вовлеченными в патологический процесс при шизофрении.

Несмотря на то, что вопрос о механизмах повышения уровня ААТ к ФРН в крови больных шизофренией детей остается пока открытым, мы полагаем, что повышенный уровень ААТ к ФРН на ранних этапах развития мозга может приводить к дефициту ФРН, вследствие избыточного связывания его антителами. В свою очередь, снижение физиологической концентрации нейротрофина на ранних этапах развития мозга, может послужить причиной гибели нейронов и/или возникновению аномалий в организации нейронных сетей.

С другой стороны, учитывая данные о модулирующем влиянии ФРН на иммунокомпетентные клетки, можно предположить, что снижение уровня ФРН (вследствие связывания его антителами), может привести к каким-либо аномалиям в иммунной системе, что может также оказать влияние на развивающийся организм. Значительно более высокий уровень ААТ к ФРН, по сравнению с рядом других нейроспецифических АГ, у детей, больных шизофренией, подкрепляют это предположение.

выводы.

1. Ршрабоган вариант твердофазного иммуноферментного анализа для количественного определения уровня аутоантител к фактору роста нервов. Предложенный вариант позволил провести репрезентативные исследования содержания аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови здоровых и больных шизофренией детей.

2. Проведено препаративное выделение аутоантител к фактору роста нервов. Показано, чю они представляют собой связывающиеся с фактором роста нервов иммуноглобулины класса и 1цМ.

3. Выявлено, чю в сыворотке крови здоровых детей присутствуют аутоангитела к фактору роста нервов, уровень которых составляет 0.8 ± 0.2 единиц оптической плотности. Установлено, что в изученном возрастном интервале от 5 до 15 лет уровень аутоантител к фактору роста нервов не зависит от пола и возраста ребенка.

4. Установлено достоверное повышение (р<0.01) уровня аутоантител к фамору роста нервов в сыворотке крови детей, больных шизофренией, независимо от возрас та ребенка.

5. Выявлена взаимосвязь уровня аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови детей, больных шизофренией, с особенностями их клинического состояния. Степень повышения уровня аутоантител к фактору роста нервов зависит как от степени прогредиентности (которая нарастает по мере продвижения от малопрогредиентной формы течения шизофрении к злокачественной ее форме), так и от стадии заболевания.

6. Выявлено изменение иммунореакгивности, характеризуемое повышением частоты встречаемости "гиперактивных" сывороток крови у детей, больных шизофренией по сравнению со здоровыми детьми, для всех изученных нейроспецифических антигенов (фактору роста нервов,

ас трчцигарному белку S-100, глиальному фибриллярному кислому iipo'icniiy и мембранному белку ш семейства интегринов МП-65). Усыновлено наиболее выраженное повышение титра аутоантител к факюру роста нервов но сравнению с тремя другими антигенами.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. "The autoantibody levels to nerve growth factor in blood serum and liquor of patients with neurodegenerative disease". Turkova I.L.. Zacharova M.H., Danilovakaya E.V., Voloshchuk S.G., Zavalishin I.A., Klushnik T.P. The Intern, symposium "Physiological and Biochemical Basis of Brain Activity", St. Peterburg, Russia, p.96, 1994.

2. "Boipacnn.ie различия уровня аутоантител к фактору роста нервов в крови здоровых детей". Клюшник Т.П., Башина В.М., Горбачевская I I.JI., Даниловская П.В., Туркова ПЛ., Симашкова H.JI., Козлова И.А. Материалы XII Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, Россия, р.55, 1995.

3. "Аутоантитела к фактору роста нервов в крови детей с первазивными расстройствами", Клюшник Т.П., Козлова И.А., Даниловская 1-.В., Башина В.М., Симашкова Н.В., Туркоиа ИЛ. Материалы XII Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, Россия, р.56, 1995.

4. "Критические периоды онтогенеза и их связь с психическими расстройствами". Башина В.М., Горбачевская ПЛ., Клюшник Т.П.,

Симашкова 11.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В., Туркова И.Л.. 13 кн.: "Экопатология детского возраста", под ред. В.Н. Ярыгина и др., N1., с.283-287, 1995.

5. "Возрастной фактор в патогенезе инфантильного аутистического психоза (Биологичские маркеры критических периодов и их связь с психическими расстройствами)". Башина В.М., Горбачевская Н.Л., Клюшник Т.Н., Симашкова Н.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В., Туркова И.Л. В сб.: "Исцеление" под ред. И.А. Скворцова, вып. 2, М., с.440-444, 1995.

6. "Anti-NGF antibodies in children's sera with pervasive disorders". Kozlova I., Bashina V., Kluscnik T., Simashkova N., Danilovskaya E., Turkova I. X World Congress of Psychiatry, Madrid, August 23-28, V.2, p. 31-32, 1996.

7. "Повышение уровня аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови детей, больных шизофренией". Башина В.М., Козлова И.А.. Клюшник Т.П., Симашкова Н.В., Даниловская Е.В., Горбачевская Н.Л., Туркова И.Л., Якупова Л.П., Грачев В.В. Ж. неврол. и псих. им. С.С. Корсакова, т.97, N1, 47-51, 1997.

8. "Изменение уровня аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови больных шизофренией". Клюшник Т.П., Даниловская Е.В., Ватолкина O.E., Туркова И.Л., Цуцульковская М.Я., Орлова В.А., Каледа В.Г. Ж. неврол. и псих. им. С.С. Корсакова, т.98, N3, 32-34, 1998.

earthpapers.net


Смотрите также