Антифосфолипидный синдром в акушерской практике. Антитела к бета2 гликопротеину


Антитела к бета-2-гликопротеину

Капсулы SugaNorm – спаси себя от смерти

Антитела к бета-2-гликопротеину – аутоантитела IgG, IgM, IgA против белка, участвующего в связывании кардиолипиновых АТ с антигеном. Являются сывороточным маркером АФС, представлены классом IgA, IgG, IgM. Анализ назначается вместе с тестом на волчаночный антикоагулянт, антитела к кардиолипину, антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках. Итоговый показатель используется для диагностики антифосфолипидного синдрома. Забор крови выполняется из вены. Исследование проводится при помощи иммуноферментного анализа. В норме значения находятся в диапазоне 0-20 RU/ml. Результаты подготавливаются в течение 8 суток.

Антитела к бета-2-гликопротеину – аутоантитела IgG, IgM, IgA против белка, участвующего в связывании кардиолипиновых АТ с антигеном. Являются сывороточным маркером АФС, представлены классом IgA, IgG, IgM. Анализ назначается вместе с тестом на волчаночный антикоагулянт, антитела к кардиолипину, антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках. Итоговый показатель используется для диагностики антифосфолипидного синдрома. Забор крови выполняется из вены. Исследование проводится при помощи иммуноферментного анализа. В норме значения находятся в диапазоне 0-20 RU/ml. Результаты подготавливаются в течение 8 суток.

Бета-2-гликопротеин относится к белкам плазмы крови. Действует как антикоагулянт – препятствует образованию тромбов, при фосфолипидном синдроме выступает кофактором реакции связывания кардиолипиновых АТ с антигеном. Выработка антител к бета-2-гликопротеину запускается иммунной системой, приводит к развитию артериальных и венозных тромбозов. В клинико-лабораторной практике данные АТ рассматриваются как признак антифосфолипидного синдрома. Анализ обладает высокой специфичностью и чувствительностью, что позволяет отнести его к лабораторным критериям АФС.

Показания

Повышение уровня антител к β2-гликопротеину отражает стадию развития АФС, коррелирует с тяжестью клинических проявлений заболевания, определяет вероятность возникновения осложнений. Исследование используется для диагностики, показаниями служат:

  • Симптомы АФС у людей до 45 лет. Включают венозные и артериальные тромбозы: инфаркты, инсульты, транзиторные ишемические атаки, легочные тромбоэмболии, тромбозы сосудов сетчатки, а также характерные поражения кожи: сетчатое ливедо, язвы, псевдоваскулитные и васкулитные проявления.
  • Положительные итоговые значения тестов на АТ к кардиолипину или на волчаночный антикоагулянт. Результаты анализа повышают специфичность диагностики.
  • Самопроизвольное прерывание беременности  после девятой недели гестации. Исследование позволяет подтвердить или опровергнуть АФС как причину привычного невынашивания беременности, рецидивирующих спонтанных абортов, внутриутробной гибели плода, преэклампсии.

Для подтверждения диагноза АФС необходимо определение минимум одного клинического и одного лабораторного критерия, присутствующего на протяжении 12 недель, поэтому тест выполняется дважды (ретестирование назначается через 12 недель).

Подготовка к анализу

Кровь забирается из локтевой вены. Специальной подготовки к процедуре сдачи биоматериала не требуется. Общие рекомендации:

  1. Оптимально сдавать кровь с утра, натощак (через 4-8 часов после приема пищи).
  2. Отказаться от курения  необходимо за час до процедуры, от употребления алкоголя – за сутки.
  3. За день до исследования нужно исключить интенсивную физическую активность (занятия спортом, перенос тяжестей), за 20-30 минут отменить умеренные нагрузки (ходьбу, наклоны). Рекомендуется провести это время сидя, расслабившись.
  4. Физиотерапевтические процедуры, инструментальные обследования, назначенные в день анализа, стоит выполнять после сдачи крови.

Кровь берется методом венепункции, в герметичной пробирке доставляется в лабораторию. Процедуре ИФА  подвергается сыворотка. Подготовка результатов занимает около 8 рабочих дней.

Нормальные значения

В норме концентрация антител к бета-2-гликопротеину не превышает 20 RU/ml (отн. ед/мл). Коридор референсных значений одинаков для взрослых и детей обоих полов. Интерпретируя результат теста, необходимо учитывать, что:

  • Границы нормативных значений могут несколько отличаться у разных лабораторий, поскольку зависят от свойств реагентов и характеристик оборудования. Полученные данные нужно сравнить с показателями нормы, указанными на бланке.
  • Уровень АТ не зависит от физиологических факторов: особенностей питания, физической нагрузки, режима дня.
  • Итоговый показатель в границах нормы не исключает наличие фосфолипидного синдрома.

Повышение значения

Причиной повышения итогового значения является антифосфолипидный синдром. Концентрация антител увеличивается у 70-80% пациентов. Лабораторное обследование при подозрении на АФС состоит из трех основных тестов: АТ к β2-гликопротеину, АТ к кардиолипину и волчаночный антикоагулянт. В 10-30% случаев заболевания повышение уровня антител к β2-гликопротеину является единственным серологическим признаком. При привычном невынашивании беременности чаще обнаруживаются IgM, при системной красной волчанке  – IgM и IgG.

Лечение отклонений от нормы

Исследование антител к бета-2-гликопротеину является базовым при диагностике фосфолипидного синдрома. Повышение значений рассматривается как лабораторный критерий заболевания. С итоговым показателем теста необходимо обратиться к лечащему врачу: ревматологу, дерматологу, акушеру-гинекологу. Интерпретация производится с учетом данных анамнеза, клинической картины, результатов других лабораторных исследований. Раннее выявление АФС позволяет своевременно начать лечение и снизить риск развития осложнений.

Источник

Онлайн Запись к врачу

illnessnews.ru

Антифосфолипидный синдром в акушерской практике

Шляхтенко Т.Н., Чепанов С.В., Алябьева Е.А.

Россия, г. Санкт-Петербург, ФГБУ НИИ акушерства и гинекологии им Д.О. Отта СЗО РАМН.

Интерес к антифосфолипидному синдрому (АФС) в акушерстве сохраняется в течение более чем 30 лет. В 1983 году Graham Hughes дал описание антифосфолипидного синдрома, сопоставив клинические проявления и лабораторные данные. Критерии постановки диагноза антифосфолипидный синдром были приняты в 1998 году на съезде, посвященном антифосфолипидным антителам в Саппоро, в 2006 году в Сиднее были пересмотрены и дополнены. Это сосудистые тромбозы, репродуктивные неудачи и наличие трех типов антител: волчаночного антикоагулянта, антикардиолипиновых антител и антител к бета-2 гликопротеину-1.

Антифосфолипидный синдромПациенты с антифосфолипидным синдромом должны иметь не менее одного клинического и одного лабораторного критерия. Важную роль во взаимодействии антифосфолипидных антител с антигенами играют белковые кофакторы, такие как, протромбин, тромбомодулин, аннексин V, протеины C и S, мембранные белки эндотелиоцитов, тромбоцитов.

Патогенез антифосфолипидного синдрома до конца не изучен. Тромботические осложнения связывают с влиянием антител на все звенья системы гемостаза. В экспериментах показано непосредственное воздействие аутоантител на трофобласт, вызывающее нарушение продукции гормонов, цитокинов, Т-регуляторных клеток и т.д. Наряду с этим, для ряда исследователей патогенетическая роль антифосфолипидных антител в осложнениях беременности неоднозначна. По их мнению, возможно наличие различных популяций антифосфолипидных антител, особенно это касается антител к бета-2 гликопротеину-1, которые, в зависимости от вида домена самого плазменного белка, могут не иметь патологических свойств.[Bas de Laat 2010г.]

Целью настоящей работы было продемонстрировать результаты трудов за три года, касающихся изучения манифестации антифосфолипидного синдрома у женщин с привычным невынашиванием. Антифосфолипидные антитела определялись стандартным иммуноферментным методом или с помощью фосфолипидзависимых коагуляционных тестов. Всего за период с 2009 по 2011 г. было обследовано 3950 пациенток. Антитела к бета-2 гликопротеину-1 выявили в 21% наблюдений; антитела к кардиолипину в 3% наблюдений; волчаночный антикоагулянт – 5% наблюдений. Среди женщин с наличием антител к бета-2 гликопротеину-1 было выделено три группы по диапазону уровня антител: Iгруппа: 20-30 RU/ml, IIгруппа: 30-60 RU/ml, III группа- более 60 RU/ml. В процентном соотношении пациенты распределились следующим образом: Iгруппа -55.8%, IIгруппа – 34.8%, III группа – 9.3%. Изолированное повышение уровня антител к бета-2 гликопротеину-1 составило 74%, в 26% наблюдений, наряду с антителами к бета-2 гликопротеину-1 были выявлены антитела к кардиолипину, протромбину, аннексину-V.

Анализ сочетания антифосфолипидного синдрома с различными видами возможной патологии гемостаза продемонстрировал следующее: антифосфолипидный синдром в комбинации с гипергомоцистеинемией – 35%, АФС в сочетании с наследственными факторами риска тромбоза – 15%. Волчаночный антикоагулянт выявили у 5% женщин с репродуктивными неудачами. Наиболее серьезным на наш взгляд является состояние женщин с выявленным волчаночным антикоагулянтом, особенно в сочетании с другими видами АФА или другими нарушениями гемостаза. Несмотря на проводимую коррекцию патологического процесса у этих женщин, исход беременности представляется непредсказуемым.

Наши исследования показывают, что высокие цифры антител к фосфолипидам, как правило, в виде антител к бета-2 гликопротеину-1, встречаются в небольшом числе наблюдений, и возникновение осложнений в течение беременности, возможно, связано с сочетанной патологией гемостаза и антифосфолипидного синдрома

В качестве терапии антифосфолипидного синдрома используются общепринятые средства: эфферентные методы лечения; кортикостероиды; антиагреганты; антикоагулянты; системная энзимотерапия; внутривенные иммуноглобулины.

Основной акцент при терапии женщин с диагностированным антифосфолипидным синдромом делался на прегравидарную подготовку, когда, по возможности, устранялись все гинекологические, эндокринные, иммунные причины, приводящие к репродуктивным неудачам. Во время беременности проводился контроль параметров гемостаза и дальнейшее применение уже указанных средств. Подобный подход позволил завершить беременность срочными родами.

Поделиться ссылкой:

Автор публикации:

Врач акушер-гинеколог первой категории

Родильный дом №1 (специализированный), Городской Центр профилактики и лечения невынашивания беременности

Другая информация по теме

www.mapapama.ru

Drg® Антитела класса IgG/IgM к бета 2 гликопротеину I (eia-3584)

DRG

DRG® Антитела класса IgG/IgM к бета 2 гликопротеину I (EIA-3584)

СЕ RUO в США

Редакция 1 декабря 2009 г. (Версия 2.0)

Просьба использовать только действительную версию инструкции по применению препарата, прилагаемую к комплекту.

НАИМЕНОВАНИЕ И НАЗНАЧЕНИЕ

Тест на антитела класса IgG/IgM к бета 2 гликопротеину I является непрямым твердофазным иммуноферментным исследованием (ELISA) для количественного измерения аутоантител класса IgG/IgM к бета 2 гликопротеину I в сыворотке или плазме человека. Исследование предназначено только для лабораторного использования как средство определения повышенного риска тромбообразования у пациентов с системной красной волчанкой или волчаночноподобными заболеваняими.

^

Антитела к бета 2 гликопротеину I связаны с заболеваниями антифосфолипидного синдрома, такими как тромбообразование, тромбоцитопения или смерть плода в связи системной красной волчанкой. Комитет по науке и стандартизации Международного Общества по изучению тромбоза и гемостаза выпустило критерии согласованности действий, которые могут применяться для помощи в постановке лабораторного диагноза. Эти критерии были обновлены в 2006 году.

Бета 2-гликопротеин I (аполипопротеин Н) представляет собой бета 2-глобулин 50 кДа, присутствующий в плазме на уровне 200 мкг/мл. Было обнаружено, что бета 2-гликопротеин I (β2GPI) препятствует внутреннему каскаду коагуляции и, таким образом, участвует в регулировании свертывания крови. В живом организме β2GPI связан с отрицательно заряженными веществами, например, анионными фосфолипидами, гепарином и липопротеином. Область фосфолипидного связывания расположена в его пятом домене.

В последнее время бета 2-гликопротеин I стал известен как кофактор для аутоантител кардиолипина. Несколько исследований подтвердили его незаменимую роль в надлежащем связывании антител к кардиолипину с иммобилизованным кардиолипином. Подробные исследования природы комплекса кардиолипин - β2GPI показали, что эпитопы на пятом домене β2GPI являются истинной мишенью «антител к кардиолипину» даже в отсутствие отрицательно зряженных фосфолипидов. β2GPI не только является обязательным условием связывания антител к кардиолипину; он был также определен как первичный антиген для этих антител.

Пробы клинических пациентов с антифосфолипидным синдромом были испытаны на наличие антител к кардиолипину и β2GPI. Хорошие соотношения между значения антител к кардиолипину и β2GPI подтверждают приведенное выше утверждение. Аутоантитела к бета 2-гликопротеину I описаны для различных аутоиммунных заболеваний. Присутствие антител к β2GPI может быть связано с развитием артериального и венозного тромбоза, венозной тромбоэмболии, тромбоцитопении и смертью плода.

Антитела к бета 2 – гликопротеину I находятся в иммуноглобулинах классов IgG, IgM и IgA. Определение антител класса IgM является ценным показателем в диагностике начала аутоиммунных заболеваний, в то время как антитела класса IgG будут присутствовать на стадиях прогрессирования проявляющихся аутоиммунных нарушений. Титры антитела класса IgG к β2GPI хорошо соотносятся с клиническим состоянием пациентов при тромбозе, тромбоэмболии и повторной смерти плода, в то время как антитела класса IgM к β2GPI демонстрируют значительную связь с тромбозом и тромбоцитопенией.

Показаниями для определения присутствия антител к бета 2 – гликопротеину I являются:

- системная красная волчанка

- артериальные и венозные тромбозы

- тромбоцитопения

- смерть плода.

^

Высокоочищенный бета 2 – гликопротеин I привязывается к микролункам. Антитела к этим антигенам, если они имеются в разбавленной сыворотке или плазме, привязываются к соответствующим антигенам. При промывании микролунок удаляются неспецифичные компоненты сыворотки и плазмы. Конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) антитела к IgG и IgM иммунологически определяют связанные антитела пациента, образующие комплекс конъюгата/антитела/антигена. При промывке микролунок удаляется несвязанный конъюгат. Ферментный субстрат в присутствии связанного конъюгата гидролизируется с образованием синего цвета. Добавление кислоты останавливает реакцию с образованием желтого конечного продукта. Интенсивность этого желтого цвета измеряется фотометрически при 450 нм. Количество цвета прямо пропорционально концентрации антител класса IgG, соответственно IgM, имеющихся в первоначальной пробе.

^

1. Все реагенты данного комплекта для тестирования предназначены строго для использования только в лабораторных условиях.

2. Не заменяйте компоненты комплекта компонентами из других комплектов.

3. В результате тестирования компонентов, содержащих сыворотку человека, методами, утвержденными FDA, обнаружено, что они отрицательны к HBsAg, HCV, ВИЧ1 и ВИЧ2. Ни один тест не может гарантировать отсутствие HBsAg, HCV, ВИЧ1 и ВИЧ2, поэтому со всеми реагентами данного комплекта, основанными на сыворотке человека, необходимо обращаться так, как если бы они являлись потенциальными переносчиками инфекции.

4. Избегайте контакта с ТМБ (3,3’, 5,5’-Тетраметилбензидином). При попадании ТМБ на кожу, тщательно промойте водой с мылом.

5. Избегайте контакта со Стоп-Реагентом, который является кислотой. При его попадании на кожу тщательно промойте водой и обратитесь к врачу.

6. Некоторые компоненты комплекта (Контроли, Буфер для разбавления проб и Буферный Промывочный Раствор) содержат Азид Натрия в качестве консерванта. Азид Натрия (NaN3) в чистом виде является высокотоксичным и реактивным. При концентрациях этого продукта (0,09%) он не опасен. Несмотря на его классификацию как неопасного, настоятельно рекомендуем соблюдать осторожность в лабораторной работе (см. 8., 9., 10).

7. Некоторые компоненты комплекта содержат Проклин 300 в качестве консерванта. При утилизации реагентов, содержащих Проклин 300, промывайте стоки обильным количеством воды для разбавления компонентов до уровней ниже активных.

8. Пользуйтесь одноразовыми перчатками при работе с образцами или реагентами комплекта, после работы с ними тщательно мойте руки.

9. При введении материалов не держите пипетку во рту.

10. Не ешьте, не пейте и не курите и не пользуйтесь косметикой в местах работы с образцами или реагентами комплекта.

11. Избегайте контакта между буферным Раствором Перекиси и легко окисляемыми материалами; чрезмерно высокая температура может вызывать самовозгорание.

Соблюдайте рекомендации по выполнению контроля качества в медицинских лабораториях путем анализа контролей и/или банков сыворотки. Во время работы со всеми реагентами комплекта, контролями и пробами сыворотки соблюдайте действующие нормативы.

^

Размер упаковки 96 определений

Кол-во 1 Делимый микропланшет, состоящий из 12 модулей, каждый с 8 лунками, сенсибилизированными высокоочищенным бета 2 – гликопротеином I. Готов к использованию
6 флаконов, 1,5 мл каждый Комбинированные Калибраторы антител (А-Е) класса IgG и IgM к бета 2-гликопротеину I в сывороточной/буферной матрице (PBS, BSA, NaN3
2 флакона, 1,5 мл каждый Контроли антител к бета 2-гликопротеину в сывороточной/буферной матрице (PBS, BSA, NaN3

соответствующие концентрации см. в приложении к комплекту. Готовы к использованию

1 флакон, 20 мл Буфер для разбавления проб (Tris, NaN3
1 флакон, 15 мл Раствор ферментного конъюгата (PBS, Проклин 300
1 флакон, 15 мл Раствор субстрата ТМБ. Готов к использованию.
1 флакон, 15 мл Стоп-Реагент (содержит кислоту). Готов к использованию.
1 флакон, 20 мл Промывочный раствор (PBS, NaN3

^

1. Храните комплект при 2-8оС.

2. Храните стрипы микропланшетов запечатанными в сухом пакете с осушителями.

3. Реагенты устойчивы до истечения срока годности комплекта.

4. Не подвергайте реагенты комплекта воздействию высокой температуры, солнечного света или сильного света во время хранения и использования.

5. Разбавленный буфер для разбавления проб и промывочный буфер устойчивы в течение не менее 30 дней при хранении при 2-8оС.

^

Оборудование

- Планшет-ридер, способный проводить измерения конечных точек на 450 мн

- Многоканальный Распределитель или пипетка многократного использования на 100 мкл

- Пипетка на 10 мкл, 100 мкл и 1000 мкл

- Лабораторный таймер

- Программное обеспечение обработки данных

^

- Дистиллированная или деионизированная вода

- Градуированный цилиндр на 100 и 1000 мл

- Пластиковый контейнер для хранения промывочного раствора

^

1. Соберите образцы крови с помощью приемлемых медицинских методов во избежание гемолиза.

2. Дождитесь свертывания крови и отделите сыворотку центрифугированием.

3. Сыворотка для тестирования должна быть прозрачной и негемолизированной. Загрязнение гемолизом или липемией лучше всего избегать, хотя они и не влияют на результаты исследования.

4. Образцы могут находиться в охлажденном виде при 2-8оС до пяти дней или храниться при -20оС до шести месяцев.

5. Избегайте повторных замораживаний и оттаиваний сывороточных проб. Это может привести к различным потерям активности аутоантител.

6. Не рекомендуется тестирование деактивированных высокой температурой сывороток.

^

1. Не используйте компоненты комплекта с истекшим сроком хранения.

2. Не заменяйте компоненты комплекта компонентами из других комплектов.

3. Все материалы должны иметь комнатную температуру (20-28оС).

4. Перед началом исследования приготовьте все реагенты и пробы. Для получения самых надежных и стабильных результатов тест должен быть проведен без перерывов.

5. Осуществляйте процедуры тестирования только в предусмотренном порядке.

6. Всегда используйте свежие растворы проб.

7. Вносите все реагенты и пробы пипеткой на дно лунок.

8. Во избежание загрязнений при переносе меняйте микродозатор между пробами и различными контролями комплекта.

9. Для достижения лучших результатов важно тщательно промывать микролунки и удалять весь промывочный раствор до последней капли.

10. Все инкубационные шаги должны иметь точную продолжительность.

11. Контрольные сыворотки или банки должны регулярно исследоваться как неизвестные для проверки эффективности реагентов и исследования.

12. Не используйте повторно лунки микропланшета.

Для всех контролей соответствующие концентрации указаны на ярлыках каждого пузырька. Используя данные концентрации, можно рассчитать калибровочную кривую для считывания результатов проб исследуемого полуколичественным методом.

^

Подготовка буфера для разбавления проб

Разбавьте содержимое каждого флакона концентрата буфера для разбавления проб (5х) дистиллированной или деионизированной водой до конечного объема 100 мл перед использованием.

Храните в охлажденном виде: устойчив при 2-8оС в течение не менее 30 дней после приготовления или до даты истечения срока годности, напечатанного на ярлыке.

^

Разбавьте содержимое каждого флакона концентрата буферного промывочного раствора (50х) дистиллированной или деионизированной водой до конечного объема 1000 мл перед использованием.

Храните в охлажденном виде: устойчив при 2-8оС в течение не менее 30 дней после приготовления или до даты истечения срока годности, напечатанного на ярлыке.

^

Разбавьте все пробы пациента в соотношении 1:100 буфером для разбавления проб перед проведением анализа.

Для этого возьмите 10 мкл пробы и 990 мкл буфера для разбавления проб в полистироловой пробирке. Хорошо перемешайте.

Контроли готовы к использованию без разбавления.

^

1. Подготовьте достаточное количество микропланшетных стрипов для размещения контролей и предварительно разбавленных проб пациента.

2. Раскапайте 100 мкл калибраторов, контролей и предварительно разбавленных проб пациента в двойном экземпляре.

1 2 3 4 5 6 SA – SF: стандарты A – F

P1, P2...проба пациента 1, 2…

C1: положительный контроль

С2: отрицательный контроль

A SA SE P1 P5
B SA SE P1 P5
C SB SF P2 P..
D SB SF P2 P..
E SC C1 P3
F SC C1 P3
G SD C2 P4
H SD C2 P4

3. Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре (20 – 28оС).

4. Удалите содержимое микролунок и промойте 3 раза 300 мкл промывочного раствора.

5. Раскапайте 100 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку (антитела класса IgG или антитела класса IgM).

6. Инкубируйте в течение 15 минут при комнатной температуре.

7. Удалите содержимое микролунок и промойте 3 раза 300 мкл промывочного раствора.

8. Раскапайте 100 мкл раствора субстрата ТМБ в каждую лунку.

9. Инкубируйте в течение 15 минут при комнатной температуре.

10. Добавьте 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку модулей и инкубируйте в течение 5 минут при комнатной температуре.

11. Считайте оптическую плотность при 450 нм и рассчитайте результаты. Рекомендуется бихроматическое измерение с эталоном на 600-650 нм.

Появившийся цвет устойчив в течение не менее 30 минут. За это время считайте оптические плотности.

Автоматика

Тест на антитела класса IgG/IgM к бета 2-гликопротеину I ELISA пригоден для использования на открытых автоматизированных процессорах ELISA. Описанная выше процедура тестирования пригодна для использоваться как с автоматикой, так и без автоматики.

^

Контроль качества

Данный тест действителен только в том случае, если оптическая плотности при 450 нм для Положительного Контроля (1) и Отрицательного Контроля (2), а также для Калибратора А и F удовлетворяет соответствующему диапазону, указанному в Сертификате Контроля Качества, прилагаемом к каждому комплекту!

Если какой-либо из этих критериев не выполняется, результаты являются недействительными, и тестирование следует повторить.

Расчет результатов

Для теста на антитела класса IgG/IgM к бета 2-гликопротеину рекомендуется 4-Параметрическая Подгонка с линейно-логарифмическими координатами по оптической плотности и концентрации.

^

Сначала рассчитайте усредненные оптические плотности для каждой лунки калибратора. Воспользуйтесь линейно-логарифмической миллиметровой бумагой и постройте график усредненной оптической плотности каждого калибратора в сравнении с концентрацией. Проведите наиболее подходящую кривую, приближающуюся к маршруту всех точек калибратора. Точки калибратора также могут быть связаны прямолинейными сегментами. Концентрация неизвестных может в этом случае быть выведена по калибровочной кривой методом интерполяции.

^

Цифры ниже показывают типичные результаты для теста на антитела класса IgG/IgM к бета 2-гликопротеину ELISA. Эти данные носят только иллюстративный характер и не должны использоваться для расчета результатов другой серии.

Позиция ОП 1 ОП 2 Среднее Конц. 1 Конц. 2 Среднее Заявл.конц. CV %
STA A 1/B 1 0.124 0.122 0.123 0.001 0.001 0.001 0.001 1
STB C 1/D1 0.281 0.282 0.281 5.4 5.4 5.4 6.3 0
STC E 1/F1 0.579 0.578 0.579 12.9 12.9 12.9 12.5 0
STD G 1/H 1 0.990 0.995 0.993 25.2 25.4 25.3 25.0 1
STE A2/B 2 1.463 1.488 1.476 48.6 50.5 49.5 50.0 1
STF C2/D2 1.862 1.865 1.863 99.7 100.4 100.1 100.0 0

Интерпретация результатов

В исследовании нормального диапазона проб сыворотки от здоровых доноров крови тестом на антитела класса IgG/IgM к бета 2 – гликопротеину I установлены следующие диапазоны:

Антитела к бета 2-гликопротеину I

IgG [U/мл] IgM [U/мл]

нормальный:

промежуточный 5 – 8 5 - 8

повышенный: > 8 > 8

Положительные результаты должны проверяться относительно полного клинического состояния пациента. Также индивидуально должно приниматься каждое решение о терапии.

Каждой лаборатории рекомендуется установить собственные нормальные и патологические диапазоны антител к бета 2-гликопротеину I сыворотки. Приведенные ниже значения следует рассматривать только в качестве ориентировочных.

^

Параллелизм

В экспериментах с разбавлением сыворотки с высокими концентрациями антител класса IgG и IgM разбавлялись буфером для разбавления проб и анализировались в комплекте антител класса IgG/IgM к бета 2 - гликопротеину I.

Антитела к β2-ГП I Номер пробы Разведение Наблюдаемое (U/мл) Ожидаемое (U/мл) Отношение наблюдаемого к ожидаемому
IgG 1 1:200

1:400

1:800

1:1600

1:3200

1:6400

100.0

49.8

25.5

13.1

6.9

3.5

50.0

25.0

12.5

6.3

3.1

100%

102%

105%

110%

113%

IgG 2 1:100

1:200

1:400

1:800

1:1600

1:3200

80.9

42.0

21.1

10.7

5.6

2.8

40.5

20.2

10.1

5.1

2.5

104%

104%

106%

110%

112%

IgM 3 1:100

1:200

1:400

1:800

1:1600

1:3200

97.6

49.0

23.2

13.4

6.4

3.0

48.8

24.4

12.2

6.1

3.1

100%

95%

119%

105%

97%

IgM 4 1:200

1:400

1:800

1:1600

1:3200

70.3

33.5

18.6

10.1

5.4

35.2

17.6

8.8

4.4

95%

106%

115%

123%

Точность (Воспроизводимость)

Статистика для коэффициентов вариации (CV) рассчитывалась для каждой из трех проб по результатам 24 определений в единой серии по точности результатов одного анализа. Точность от серии к серии рассчитывалась по результатам 5 различных серий с 6 определениями каждой пробы:

Антитела к бета 2-гликопротеину I (IgG) Антитела к бета 2-гликопротеину I (IgM)
Результаты одного анализа Результаты одного анализа
Номер пробы Среднее [U/мл] CV [%] Номер пробы Среднее [U/мл] CV [%]
1 13.4 5.0 1 14.7 3.8
2 24.3 2.1 2 30.0 2.5
3 88.0 2.8 3 67.9 2.1
Результаты разных анализов Результаты разных анализов
Номер пробы Среднее [U/мл] CV [%] Номер пробы Среднее [U/мл] CV [%]
1 11.0 7.4 1 15.7 6.3
2 29.9 7.9 2 32.6 1.1
3 94.9 2.6 3 82.9 4.3

Чувствительность

Нижний предел обнаружения для антител класса IgG/IgM к бета 2-гликопротеину I был определен на 0.5 U/мл.

Специфичность

Микропланшет сенсибилизируется высокоочищенным человеческим бета 2-гликопротеином I. Комплект для тестирования является специфическим только для аутоантител к бета 2-гликопротеину I. Эндогенный бета 2-гликопротеин I и эндогенные отрицательно-заряженные фосфолипиды определяются в образцах, разбавленных в пропорции 1:100 на уровне, соответственно, приблизительно 2мкг/мл и приблизительно 1 мкг/мл. Не было замечено влияния на антитела к бета 2-гликопротеину I.

Калибрование

Вследствие отсутствия международного эталонного препарата для аутоантител к бета 2-гликопротеину I система количественного тестирования калибрована в относительно произвольных единицах. Калибрование осуществляется по международно признанным эталонным сывороткам от E.N. Harris, Луисвилл, США, IRP 97/656 и HCAL/EY2C9. Тесты этих сывороток положительны для аутоантител к бета 2-гликопротеину I.

^

Тест на антитела класса IgG/IgM к бета 2-гликопротеину I ELISA является диагностическим средством. Окончательный клинический диагноз не должен основываться на результатах единичного теста, а должен быть поставлен врачом после оценки всех клинических и лабораторных результатов.

^

В гемолитических (до 1000 мг/дл), липемических (до 3 г/дл триглицеридов) сыворотках и в сыворотках, содержащих билирубин (до 40 мг/дл), интерференции не наблюдалось.

Также интерферирующих эффектов не наблюдалось при использовании антикоагулянтов.

Из практических соображений, однако, рекомендуется избегать сильно гемолизированных или липемических проб.

ЛИТЕРАТУРА

1. Roubey, R.A.S. Review Article: Autoantibodies to phospholipid-binding plasma proteins: a new view of Lupus

Anticoagulants and other "antiphospholipid" autoantibodies. Blood 1994;Vol 84,No 9: 2854 - 2867.

2. Schousboe, I. β2-Glycoprotein I: a plasma inhibitor of the contact activation of the intrinsic blood coagulation

pathway. Blood 1985;Vol 66,No 5: 1086 - 1091.

3. Lee, N.S. et al. β2-Glycoprotein I - Molecular properties of an unusual apolipoprotein, Apolipoprotein H. J. Biol.

Chem. 1983;Vol 258,No 8: 4765 - 4770.

4. Kandiah, D.A. et al. Epitope mapping studies of antiphospholipid antibodies and β2GPI using synthetic peptides.

Lupus 1995;Vol 4, Suppl 1: S7 - S11.

5. Matsuura, E. et al. Molecular studies on phospholipid-binding sites and cryptic epitopes appearing on β2-glycoprotein

I structure recognized by anti-cardiolipin antibodies. Lupus 1995;Vol 4, Suppl 1: S13 - S17.

6. Koike, T. Anticardiolipin Antibodies and β2-Glycoprotein I. Clinical Immunology and Immunopathology 1994;Vol

72,No 2: 187 - 192.

7. Roubey, R.A.S. et al. "Anticardiolipin" autoantibodies recognise β2-Glycoprotein I in the absence of phospholipid. J.

Immunol., 1995;Vol 154: 954 - 960.

8. Wang, M.-X. et al. Epitope specificity of monoclonal anti-β2-Glycoprotein I antibodies derived from patients with

the antiphospholipid syndrome. J. Immunol., 1995; Vol 155: 1629 -1636.

9. Arvieux, J. et al. IgG2 subclass restriction of anti-β2-Glycoprotein I antibodies in autoimmune patients. Clin. Exp.

Immunol. 1994;Vol 95: 310 - 315.

10. Matsuda, J. et al.Prevalence of β2-glycoprotein I antibody in systemic lupus erythematosus patients with β2-

glycoprotein I dependent antiphospholipid antibodies. Ann. Rheum. Dis. 1995;Vol 54: 73 - 75.

11. Martinuzzo, M.E. et al. Anti β2 glycoprotein I antibodies: detection and association with thrombosis. Brit. J.

Haematol. 1995;Vol 89: 397 - 402.

12. Balestrieri, G. et al. Anti-beta2-glycoprotein I antibodies: a marker of antiphospholipid syndrome? Lupus 1995;Vol 4:

122 - 130.

13. Miyakis S, Lockshin MD, Atsumi T, Branch DW, Brey RL, Cervera R, Derksen RHWM, de Groot PG, Koike T,

Meroni PL, Reber G, Shoenfeld Y, Tincani A, Vlachoyiannopoulos PG, Krilis SA. International consensus statement

on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome (APS). J Thromb Haemost 2006; 4:

295-306.

Символы, используемые в исследованиях DRG

Символ Английский
См. инструкции по применению
Соответствие европейским стандартам
Лабораторное диагностическое устройство
Только для исследовательского использования
Номер по каталогу
Номер лота / Код партии
Содержит достаточно для тестов
Температура хранения
Срок годности
Юридический производитель
Дистрибутор
Содержимое
Объем / Кол-во
DRG International Inc., USA Факс: (908) 233 0758 Электронный адрес: [email protected]

medznate.ru


Смотрите также