Эффективность применения наружной формы интерферона при реабилитации часто болеющих детей. Интерферон эффективность


Стандартный интерферон а: эффективность

НВ J\g-cepono3HTHBHbie больные хроническим гепатитом. Клинические исследования подтвердили, что ИФН-а подавляет репликацию HBV (вирус гепатита В). Положительный ответ на терапию ИФН-а, о котором судят по исчезновению маркеров репликации (HBgAg) в сыворотке крови и снижению ДНК вируса гепатита В до подпорогового уровня, в течение 12 мес после начала лечения отмечается у 30-40% HBgAg-серопозитивных больных с повышенной активностью АлАТ (табл. 8-12). Исчезновение HB-Ag отмечается реже, лишь у 5-10% больных. Следует учесть, что частота спонтанного исчезновения HB-Ag в сыворотке крови у больных, которые не получают какой-либо терапии, колеблется от 5 до 15%. Следовательно, благоприятный эффект терапии ИФН-а проявляется лишь примерно у 20-25% больных. Несмотря на значительные колебания в показателях, приводимых разными авторами, результаты ряда метаанали-зов подтверждают эффективность терапии ИФН-а.

•    НВ Ag-серопозитивные больные с нормальной активностью АлАТ. Больные этой категории — обычно дети и лица молодого возраста, у которых HBV (вирус гепатита В)-инфекция соответствует иммунотолерантной фазе. Сероконверсия по HBgAg происходит у 10% этих больных.

•    Больные - уроженцы стран Востока. У больных - уроженцев азиатских стран с повышенной активностью АлАТ сероконверсия по HBgAg встречается примерно с такой же частотой, что и у представителей белой расы. Но среди больных азиатского происхождения чаще наблюдаются случаи нормальной активности АлАТ, поэтому, если учесть этих больных, эффективность терапии ИФН-а у них в целом оказывается более низкой.• Дети. В идеале терапию следует назначить как можно раньше, пока не развились необратимые изменения в печени. У детей с повышенной активностью АлАТ, получивших терапию ИФН-а, клиренс HBEAg отмечен в 30% по сравнению с 10% у детей контрольной группы, не получавших лечения. Однако большинство детей, особенно тех, которые заразились в перинатальном периоде, имеют нормальную активность АлАТ и менее чем у 10% из них, прошедших терапию ИФН-а, отмечено исчезновение HB^Ag в сыворотке крови.

HBjAg-серонегативные больные хроническим гепатитом. Результаты четырех рандомизированных исследований, охвативших 86 больных, получивших терапию ИФН-а, и 84 больных контрольной группы, показали, что критерии, служащие для прекращения лечения, в опытной группе достигнуты у 38-90% больных, в то время как в контрольной - у 0-37%. Серьезным недостатком терапии ИФН-а HB^g-серонегативных больных является высокая частота рецидивов. Примерно у 50% больных, у которых терапия оказывается эффективной, после ее прекращения наблюдаются рецидивы, причем они могут возникнуть даже спустя 5 лет. По данным итальянского исследования, стойкий эффект после 24-месячной терапии ИФН-а отмечен у 30% больных, что превышает частоту достижения стойкой ремиссии после 12-месячной терапии, приводимой в других исследованиях и составившей 15-20%.

ДНК HBV (вирус гепатита В)-позитивные больные с картиной цирроза печени. У больных с гистологически подтвержденным циррозом печени, но без признаков декомпенсации ее функции терапия ИФН-а столь же эффективна, как при прецирротической стадии гепатита В. Однако у больных с циррозом печени назначение ИФН-а даже в очень малых дозах (3 млн ЕД 3 раза в неделю) чаще сопровождается развитием инфекционных осложнений и приводит к обострениям, которые протекают более тяжело и могут привести к развитию печеночной недостаточности.

Больные, у которых терапия ИФН-а неэффективна. По данным большинства исследований, частота достижения эффекта при повторном назначении терапии ИФН-а HBgAg-серопозитивным больным, у которых ответ на первое лечение отсутствовал, очень низка. По данным одного исследования, охватившего 57 HBJVg-серопозитивных больных, исчезновение HBEAg после терапии ИФН-а отмечено у 33%, в отличие от 10% больных в контрольной группе, которым лечение не проводилось. Однако в это исследование входили больные, которых ранее лечили недостаточно высокими дозами ИФН-а, поэтому приводимый показатель может оказаться завышенным.

По данным отдельных сообщений, у 20-30% HBgAg-серонегативных больных, у которых ранее проведенная терапия ИФН-а оказалась неэффективной или после нее наступил рецидив, после повторной терапии ИНФ-а удается достичь стойкой ремиссии.

progepatit.ru

Эффективность применения наружной формы интерферона при реабилитации часто болеющих детей | #08/12

Система интерферона осуществляет в организме полифункциональное действие в трех основных направлениях: антивирусном, антипролиферативном, иммуномодулирующем. Несовершенство функционирования системы интерферона может явиться причиной повышения чувствительности детей к инфекционным заболеваниям и усугубления тяжести их течения.

Исследования, посвященные становлению системы интерферона в онтогенезе, позволили выявить некоторые связанные с этим возрастные особенности [1]. У новорожденных детей, по сравнению с взрослыми донорами, отмечается значительное снижение способности лейкоцитов к продукции интерферона альфа (ИФН-альфа), а также интерферона гамма (ИФН-гамма). При этом чем меньше гестационный возраст новорожденного ребенка, тем в большей степени оказываются снижены эти показатели [2]. У недоношенных новорожденных концентрация эндогенного интерферона в сыворотке крови превышает таковую у доношенных, детей раннего возраста и взрослых. Циркулирующий интерферон рассматривается в настоящее время как «ранний» интерферон, который имеет физиологическую направленность, отражая состояние системы интерферона развивающегося плода [1].

Действие «раннего» интерферона направлено не столько на защиту, сколько на развитие и дифференцировку клеток плода. Установлена взаимосвязь снижения уровня продукции «раннего» интерферона и отклонений от нормы развития плода у беременных женщин [3]. Выявлено также, что патология анте- и перинатального периодов онтогенеза, приводящая к развитию перинатальной гипоксии, фетоплацентарной недостаточности, провоцирует развитие иммунологических нарушений в системе мать–плацента–плод и отклонения в становлении иммунной системы в постнатальном онтогенезе [4].

Задачей данного исследования явилась разработка методов реабилитации часто болеющих детей (ЧБД) с использованием мази Виферон® [5] и анализ их эффективности.

Часто болеющим ребенок считался, если он переносил в течение года 4 и более острых респираторных заболеваний (ОРЗ) или если его индекс резистентности (РИ) составлял 0,33 и выше [6] — отношение числа ОРЗ, перенесенных ребенком к числу месяцев наблюдений.

В работе использовались клинические методы, исследование интерферонового статуса (сывороточный, ИФН-альфа, ИФН-гамма), по методу, предложенному С. С. Григорян и соавт. (1988), изучение клеточного звена иммунитета. Для выделенных субпопуляций Т-лимфоцитов определялось количество кислой фосфатазы методом азосочетания, по Goldberg и Вагка (1978).

Препараты интерферонов характеризуются сочетанием противовирусной, антибактериальной и иммуномодулирующей активности. В последние годы генно-инженерным методом были получены препараты интерферонов нового поколения (Реаферон, Реальдирон, а также зарубежные — Интрон А, Роферон-А), что позволяет исключить использование в качестве сырья донорской крови. Среди них следует выделить отечественный комплексный препарат Виферон®, в состав которого входят человеческий рекомбинантный интерферон альфа-2b, мембраностабилизирующие компоненты (витамины Е и С) и основа [7]. Препарат выпускается в трех лекарственных формах: ректальные суппозитории, мазь и гель. Комплексный состав Виферона обусловливает ряд новых эффектов: в сочетании с мембраностабилизирующими компонентами противовирусная активность рекомбинантного интерферона альфа-2b возрастает в 10–14 раз, усиливается его иммуномодулирующее действие на Т- и В-лимфоциты, нормализуется содержание иммуноглобулина Е, усиливается фагоцитоз, отсутствуют побочные эффекты, возникающие при парентеральном введении препаратов интерферона (гриппоподобные явления, сильные головные боли, артралгия, галлюцинации, выпадение волос, диарея). Установлено, что при длительном применении препарата Виферон® в течение 2 лет не образуются антитела, нейтрализующие антивирусную активность рекомбинантного интерферона альфа-2b.

Перечисленные свойства Виферона®, в частности интерфероно- и иммунокорригирующее действие, послужили основанием для его применения при реабилитации данной категории детей. В качестве лекарственной формы применялась мазь Виферон®, содержащая в 1 г 40 тыс. МЕ интерферона альфа-2.

Препарат использовался в трех основных направлениях: при проведении курсов иммуно- и интерферонореабилитации; в периоде адаптации к дошкольному учреждению; с профилактической целью в период подъема заболеваемости ОРВИ.

Мазь Виферон® вводилась интраназально по разработанному нами методу (патент РФ № 2214272 от 20.10.2003) 2 раза в день в суточной дозе 1 г [5]. Первые 2 нед препарат применялся ежедневно, последующие 2–4 нед — 3 раза в неделю.

Под наблюдением находились ЧБД, посещающие дошкольные учреждения и воспитывающиеся в доме ребенка. Возраст детей колебался от 3 мес до 5,5 лет. Из них более половины (61,6%) составляли дети раннего возраста. Все ЧБД имели отклонения в анте- и перинатальном периоде развития. Мазь Виферон® получили 73 ребенка (основная группа). Группу сравнения, в которой дети не получали препарат, а также другие иммуномодулирующие средства, составили 34 ребенка того же возраста, имеющие неблагоприятное течение раннего онтогенеза и страдающие частыми респираторными инфекциями. В обеих группах проводились общеоздоровительные мероприятия (массаж, витаминотерапия, лечебная физкультура и т. д.).

Анализ клинической эффективности мазевой формы Виферона® показывает его выраженное влияние на заболеваемость детей в периоде адаптации к дошкольному учреждению. Среди детей, получавших виферонопрофилактику, 41% не заболели в первые 3,5 мес после поступления в дошкольное учреждение. В группе сравнения все наблюдавшиеся дети за этот период переболели. Число дней, пропущенных по болезни, в группе получавших Виферон® оказалась в 2,2 раза ниже, чем в группе сравнения (р < 0,01), а число эпизодов ОРЗ, перенесенных одним ребенком, — почти в 2 раза ниже (р < 0,01).

Одновременно с положительным клиническим эффектом отмечалось улучшение иммунологических показателей. Это выражалось в достоверном (р < 0,01) увеличении хелперной субпопуляции Т-лимфоцитов (38,2 ± 0,45% и 41,73 ± 0,67% соответственно), в уменьшении Т-супрессоров (22,98 ± 0,52% и 21,27 ± 0,62% соответственно, р < 0,05), в нормализации иммунорегуляторного индекса (1,68 ± 0,06 и 1,96 ± 0,09 соответственно, р < 0,01). Достоверных различий в динамике иммунологических показателей у детей группы сравнения за это же время не выявлено (р > 0,05). Последующие наблюдения в течение года показали, что влияние виферонопрофилактики, проведенной в периоде адаптации к дошкольному учреждению, на заболеваемость детей постепенно со временем уменьшается. Так, если заболеваемость детей за первые 3,5 мес после приема препарата была в 2 раза ниже, чем в группе сравнения, то за 6 мес она оказалась в 1,5 раза, а за 8 мес — в 1,4 раза ниже, чем в группе детей, не получавших препарат. Это обусловливает необходимость проведения повторных курсов виферонопрофилактики у ЧБД, поступивших в дошкольные учреждения, через каждые 3–4 мес до достижения стойкого клинического эффекта.

Виферонопрофилактика, наряду со снижением заболеваемости, способствовала облегчению адаптации к дошкольному учреждению и за счет уменьшения эмоционально-поведенческих нарушений. Это связано с более длительным пребыванием детей в коллективе, возможностью осуществления психолого-педагогических воздействий.

Мазь Виферон® была включена также в комплекс реабилитации ЧБД, которая проводится обычно 2 раза в год. Клинические наблюдения, проведенные в течение года, показали, что виферонореабилитация приводит к снижению заболеваемости респираторными инфекциями в 2,0–1,7–2,1 раза. При этом наиболее выраженный эффект отмечается у детей раннего возраста.

Применение мази Виферон® способствует достоверному (р < 0,01) увеличению синтеза ИФН-гамма у ЧБД как первого года жизни, так и более старшего возраста. Отмечается достоверное снижение циркулирующего «раннего» интерферона у детей второго и третьего года жизни. Если до виферонореабилитации он определялся у 66,67% обследованных, то после ее окончания — у 28,27% ЧБД (р < 0,05). У ЧБД первого года жизни достоверного снижения циркулирующего «раннего» интерферона не происходит (р > 0,05). После курса виферонореабилитации циркуляция его сохраняется у подавляющего большинства (85,71%) детей, что указывает на необходимость более длительного применения препарата у детей данного возраста. Достоверного повышения способности к продукции ИФH-альфа не выявлялось у всех без исключения обследованных детей (р > 0,05). Можно утверждать, что параллельно с нарастанием синтеза ИФН-гамма после курса виферонореабилитации у ЧБД отмечается существенная положительная динамика показателей клеточного иммунитета; нарастает хелперная субпопуляция Т-лимфоцитов (р < 0,01), снижается число Т-супрессоров (р < 0,01), возрастает иммунорегуляторный индекс (р < 0,01). Достоверных изменений в изученных показателях клеточного иммунитета в группе детей, не получавших Виферон®, за это время не происходило (р > 0,05).

Таким образом, применение мази Виферон® с целью реабилитации нарушений в системе интерферона у ЧБД с дизонтогенетическими отклонениями в анамнезе оказывает существенное интерферонокорригирующее и иммуномодулирующее действие. Оно проявляется в стимуляции гамма-интерфероногенеза, уменьшении циркулирующего «раннего» интерферона, повышении хелперной активности клеточного звена иммунитета, нормализации соотношения субпопуляций Т-лимфоцитов. Клинически данный процесс коррелирует со снижением числа эпизодов респираторных инфекций, повышением резистентности детей, облегчением адаптационного синдрома в период привыкания к дошкольному учреждению.

Курс виферонопрофилактики проводился в весеннее время года с учетом выявленных и описанных нами ранее сезонных ритмов интерфероногенеза. Для сопоставления полученных данных анализировалась заболеваемость респираторными инфекциями за 2 мес до виферонопрофилактики и в течение 2 мес после ее окончания. Изучение клинической эффективности препарата показало ее различие у детей раннего и дошкольного возраста. У детей раннего возраста во время виферонопрофилактики не было случаев заболеваний. В течение последующих 2 мес по сравнению с тем же временным отрезком, предшествующим профилактике, отмечалось снижение заболеваемости ОРВИ в 4 раза по числу случаев и в 6,6 раза по числу дней, пропущенных одним ребенком (р < 0,01). Достоверных различий в заболеваемости детей дошкольного возраста до и после проведения виферонопрофилактики не определялось.

Более выраженная эффективность виферонопрофилактики у детей первых 3 лет жизни может быть обусловлена оптимально подобранной дозой препарата и схемой его введений, пластическими способностями организма детей раннего возраста, и в частности их иммунной системы, обусловливающими высокий иммуномодулирующий эффект.

Исследование интерферонового статуса детей до и после виферонопрофилактики показывает ее положительное влияние на состояние системы интерферона. У обследованных детей отмечается достоверное нарастание продукции ИФН-гамма (р < 0,01), уменьшение циркулирующего «раннего» интерферона (р < 0,01). Число детей, у которых выявляется «ранний» интерферон, уменьшается в 2,7 раза. В группе сравнения исследования, проведенные в те же сроки, достоверных изменений в показателях интерферонового статуса не выявили (р > 0,05).

Следует отметить отсутствие побочных эффектов, в том числе аллергических реакций, отрицательных изменений лабораторных показателей при применении мази Виферон® у всех наблюдавшихся детей.

Таким образом, использование мазевой формы отечественного препарата Виферон® у ЧБД оказывает интерферонокоррегирующее и иммуномодулирующее действие, способствуя нарастанию продукции ИФН-гамма, хелперной субпопуляции Т-лимфоцитов, уменьшению циркулирующего «раннего» интерферона, нормализации иммунорегуляторного индекса, снижению заболеваемости ОРВИ, облегчению адаптации в период привыкания к новым микросоциальным условиям.

Литература

  1. Ершов Ф. И., Киселев О. И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М.: ГЕОТАР-Медиа, 2005. 368 с.
  2. Алферов В. П., Ариненко Р. Ю., Аникин В. Б., Малиновская В. В. Система интерферона и интерферонотерапия: новые возможности и перспективы // Российский семейный врач. 1998. № 1. С. 35–41.
  3. Макарова З. С., Доскин В. А., Малиновская В. В. Эффективность применения мази виферон при реабилитации часто болеющих детей // Лечащий Врач. 2006. № 1. С. 86–87.
  4. Малиновская В. В. Новый отечественный комплексный препарат Виферон и его применение в перинатологии и и педиатрии при инфекционной патологии // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 1999. № 3. С. 36–43.
  5. Малиновская В. В., Деленян Н. В., Ариненко Р. Ю., Мешкова Е. Н. Виферон: Рук-во для врачей. М., 2006. 56 с.
  6. Любимова О. И. Патогенетическое и клиническое значение различных вариантов иммунного ответа при бронхиальной астме у детей (обзор литературы) // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2001. № 1. С. 39–42.
  7. Нестерова И. В. Низко-, средне- и высокодозовая терапия рекомбинантным интерфероном α2b (вифероном) при вторичных иммунодефицитных состояниях, сопровождающихся синдромом упорно-рецидивирующей вирусной инфекции // Аллергология и иммунология. 2000. № 3. С. 70–79.

3. С. Макарова*, доктор медицинских наук, профессорВ. А. Доскин*, доктор медицинских наук, профессорВ. В. Малиновская**, доктор биологических наук, профессорВ. В. Парфенов**, кандидат медицинских наук

*ГБОУ ДПО РМАПО Минздравсоцразвития России,**ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи Минздравсоцразвития России, Москва

Контактная информация об авторах для переписки: [email protected]

www.lvrach.ru

Разузнай! - Что такое интерферон?

Интерферон

Что такое интерферон?

Интерферон это иммуностимулирующий и противовирусный препарат.

Интерферон это одно из основных вырабатываемых в организме веществ, которые препятствуют поражению организма вирусными инфекциями.

Этот препарат применяют в виде раствора, который может закапываться в нос или использоваться для  ингаляций. В аптеках Интерферон продается в виде ампул с порошком для приготовления раствора, путем добавления  кипячёной или дистиллированной воды комнатной температуры до черты, обозначенной на ампуле, что соответствует двум миллилитрам. Далее содержимое ампулы осторожно встряхивается для полного растворения вещества. Получается раствор бесцветного или от розового до красного цвета, который может храниться в холодильнике в течение двух суток.

Для профилактического лечения ОРВИ и гриппа Интерферон закапывают в нос в каждый носовой проход в количестве 5-ти капель, что составляет 0,25 мл вещества. Интервал между закапываниями должен составлять не менее 6-ти часов. Для проведения ингаляций подойдет ингалятор любой системы. Для проведения одной процедуры в 10 мл воды растворяется содержимое 3-х ампул. Прогрев воды выше 37 градусов не рекомендуется. Препарат применяется в случае непосредственной угрозы заражения, и прием его продолжается до сохранения такой опасности.

При лечении Интерферон должен приниматься уже при первых симптомах заражения гриппом или ОРВИ, что увеличивает эффективность его действия. Для лечебных целей Интерферон также  закапывается в нос в каждый носовой проход по 5 капель, но уже через каждые 1 или 2 часа и не меньше 5-ти раз в сутки. Лечение проводится 2 – 3 дня.

Эффективен прием препарата  при вирусных заболеваниях глаз. Интерферон закапывается в глаза в количестве и кратности, которые определяет врач.

Применяется Интерферон при:

  • лечении ОРВИ и гриппа;
  • профилактики ОРВИ и гриппа;
  • применяется при комплексном лечения других заболеваний в качестве иммуномодулирующего средства.

Противопоказания при применении:

  • индивидуальная чувствительность и непереносимость препарата;
  • аллергические заболевания;
  • аутоиммунные заболевания;
  • тяжелые сердечные заболевания;
  • серьезные нарушения функции почек, печени, кроветворной системы;
  • хронический гепатит;
  • тяжелые нарушения функций центральной нервной системы.

При беременности Интерферон может применяться строго по назначению врача и только в том случае, если его применение крайне необходимо и потенциальная польза будет превышать возможный риск для плода.  Во время лактации кормление малыша в период лечения Интерфероном лучше прекратить.

Побочные эффекты при применении Интерферона:

  • симптомы, которые обычно проявляются при заболеваниях ОРВИ: лихорадка, озноб, вялость, мышечные и суставные боли, головная боль, отсутствие аппетита, потливость;
  • тошнота и рвота, боли в животе, диарея, запоры, метеоризм, сухость во рту, изжога;
  • возможно изменение вкусовых ощущений;
  • аллергические реакции;
  • сыпь на коже и зуд.

Отзывы об Интерфероне

В целом отзывы об Интерфероне положительные. Отмечается, что препарат оказывает положительное действие при лечении и профилактике вирусных заболеваний. Особенно радует его невысокая цена и продолжительное время хранения нераскрытых ампул. Некоторые для повышения эффективности действия препарата рекомендуют применять его при появлении первых  признаков заболевания через каждые 30 минут, а не через час или два, как указано в инструкции. Эффективность использования Интерферона в виде ингаляций, по отзывам пациентов, оказывается выше, чем при простом закапывании в нос.

"Отзывы!"

  • < Парацетамол
  • Удаление родинок >

razuznai.ru

Оценка эффективности интерферона альфа-2b в комбинации с антиоксидантами в отношении вируса гриппа птиц A (H7N9) in vitro | #02/16

Известно, что вирусы способны к фенотипической и генотипической изменчивости и постоянно формируют опасные для человеческой популяции варианты. Наибольшую проблему с точки зрения эпидемиологии представляет собой изменчивость вирусов гриппа [4]. Одним из механизмов формирования новых вариантов вируса гриппа является формирование реассоциатов в результате смешанного заражения. Наиболее частым источником образования новых вариантов вируса гриппа А являются водоплавающие и другие птицы [1, 4].

В настоящий момент Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) зафиксированы несколько вариантов вирусов гриппа птиц, способных инфицировать человека: штаммы вируса гриппа птиц А (H5N1) и A (H7N9) [1]. Впервые о заражении гриппом птиц A (H7N9) человека было сообщено 31 марта 2013 г. органами здравоохранения Китая, на сегодняшний день в ВОЗ поступили сообщения о 453 лабораторно подтвержденных случаях инфицирования людей вирусом птичьего гриппа A (H7N9), полученные от Национальной комиссии по здравоохранению и планированию семьи КНР, от Гонконгского Центра по охране здоровья и от Центров контроля заболеваний Тайбэя [1].

Несмотря на незначительное количество сообщений о заражении данным вирусом человека, вирус гриппа птиц A (H7N9) вызывает у врачей обеспокоенность в связи с тем, что у большинства пациентов заболевание протекало в тяжелой форме и в 175 случаях имело летальный исход [1]. Таким образом, своевременный поиск способов лечения данной инфекции является актуальной задачей.

Химиопрепараты против вируса гриппа представлены соединениями, оказывающими свое воздействие на разные стадии репликации вируса гриппа: препараты ремантадина блокируют белок М2 вируса гриппа. Препараты занамивир и осельтамивир действуют как ингибиторы нейраминидазы. В отношении препаратов группы ремантадина можно отметить их высокую токсичность и низкую эффективность, так как они активны только в отношении гриппа А, но не против гриппа В. Ингибиторы нейраминидазы являются эффективными препаратами, но, имея высокую стоимость, менее доступны для населения.

В организме человека основной системой, ответственной за борьбу с вирусными инфекциями, является система интерферона. В арсенале современной медицины имеются препараты рекомбинантного интерферона альфа-2b, широкий спектр противовирусной активности которых характеризован в многочисленных исследованиях как in vitro, так и in vivo [5].

По данным различных исследователей эффективность терапии интерфероном альфа-2b вирусных инфекций можно значительно повысить при помощи антиоксидантов [2, 3, 7, 8]. Впервые о синергизме интерферона альфа-2b и антиоксидантов в терапии вирусных инфекций сообщалось в работах В. В. Малиновской. По данным [7, 8] комбинация интерферона альфа-2b и антиоксидантов iv vitro и in vivo имеет выраженный синергидный эффект: в присутствии антиоксидантов специфическая противовирусная активность интерферона увеличивается в несколько раз, что позволяет не только повысить эффективность терапии, но и снизить возможность проявления побочных эффектов.

Целью настоящей работы явилось изучение противовирусной активности интерферона альфа-2b как противовирусного препарата в отношении вируса гриппа птиц A (H7N9) и оценка влияния антиоксидантов на течение экспериментальной инфекции in vitro.

Материалы и методы исследования

Культура клеток

Линия клеток почки зеленой мартышки Vero клон Е6, получена из лаборатории культур тканей ФГБУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского. Культуру клеток выращивали в виде монослоя в 96-луночных планшетах при 37 °С в атмосфере 5% СО2 с использованием среды Игла МЕМ с добавлением антибиотиков (100 Ед/мл пенициллина и стрептомицина 50 МЕ/мл), глутамина 150 мкг/мл и 10% сыворотки крови эмбрионов коров (ростовая среда). В качестве поддерживающей использовали среду Игла с добавлением антибиотиков (100 Ед/мл пенициллина и стрептомицина 50 МЕ/мл), глутамина 150 мкг/мл и 2% инактивированной при 56 °С сыворотки крови эмбрионов коров.

Вирус

Штамм вируса гриппа птиц A/Anhui/2013 (H7N9) получен из лаборатории Государственной коллекции вирусов ФГБУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского. Для культивирования использовали алантоисную полость 9–10-дневных куриных эмбрионов.

Препараты

  • Интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный, Р N003726/01, производства ООО «Фармапарк», Россия, активность 4 × 108 МЕ/мл. Обладает выраженной противовирусной, антипролиферативной и иммуномодулирующей активностью. В качестве референса активности интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного использовали международный стандарт активности интерферона (International Standard Interferon alpha 2b, NIBSC code: 95/566).
  • Аскорбиновая кислота (витамин С), ЛС-000420, производства «ДСМ Нутришнл Продактс (ЮК) Лимитед», Великобритания. Является высокоактивным природным антиоксидантом, нейтрализует свободные радикалы, обладает способностью восстанавливать активную форму витамина Е.
  • Аскорбат натрия, ЛС-000423, производства «ДСМ Нутришнл Продактс (ЮК) Лимитед», Великобритания. Является натриевой солью аскорбиновой кислоты, имеет аналогичную биологическую активность с аскорбиновой кислотой, но в отличие от нее обладает меньшим поверхностным раздражающим действием.
  • Альфа-токоферола ацетат (витамин E), dl-альфа-токоферола ацетат, тип CWS/F500, водорастворимая форма, производства Sigma Aldridsch, США. Является высокоактивным природным антиоксидантом и антигипоксантом, нейтрализует свободные радикалы и перекиси жирных кислот, активные формы кислорода, способен предотвращать перекисное окисление мембран клеток.
  • Мексидол (этилметилгидроксипиридина сукцинат), P N002161/01, производства ООО «НПК Фармасофт», Россия. Является высокоактивным синтетическим антиоксидантом, нейтрализует свободные радикалы.

Цитотоксичность

Оценку цитотоксичности препаратов проводили по стандартной методике [6] путем инкубации 1-суточного монослоя клеточной культуры Vero клон Е6 с различными концентрациями препаратов в течение 72 часов в 96-луночных планшетах при 37 °С в атмосфере 5% СО2. После инкубации клетки отмывали раствором Хенкса, для подсчета количества клеток использовали автоматический счетчик клеток Cauntess, производства Invitrogen, США с применением 0,4% раствора трипанового синего. За ЦД50 (50% тканевая цитопатическая доза) испытуемого образца принимали максимальную концентрацию, способствующую выживанию не менее 50% клеток по сравнению с контролем. За МПК (максимально переносимая концентрация) испытуемого образца принимали максимальную концентрацию испытуемого образца, не вызывающую видимых изменений в жизнеспособности клеток.

Антивирусная активность

Антивирусную активность оценивали по уровню подавления цитопатического действия вируса различными разведениями препаратов и комбинаций на культуре клеток Vero клон Е6. Для работы использовали 1-суточный монослой культуры, выращенный в 96-луночных планшетах. Множественность инфицирования вируса гриппа птиц A/Anhui/2013 (H7N9) составила 0,1 ТЦД50 на клетку, продолжительность инкубации 48 часов при 37 °С в атмосфере 5% СО2. За ИК50 (50% ингибирующая концентрация) принимали концентрацию испытуемого образца, при которой клеточная культура оказалась полностью защищенной от цитопатического действия вируса в 50% лунок.

Результаты и обсуждение

Изучение цитотоксического действия препаратов

Определенные максимальные переносимые концентрации препаратов, не оказывающие цитотоксического действия на культуру клеток Vero клон Е6, приведены в табл. 1.

Для работы на культуре клеток при определении антивирусной активности использовали концентрации препаратов меньше или равные МПК, указанные в табл. 1.

Изучение антивирусной активности препаратов

Определенные для препаратов ИК50 в отношении вируса гриппа птиц A/Anhui/2013 (H7N9) представлены в табл. 1. Для оценки возможной перспективы использования препарата в качестве химиотерапевтического средства в отношении вирусной инфекции использовали понятие ХТИ (химиотерапевтический индекс) — отношение максимально переносимой концентрации препарата к ИК50. Для эффективных противовирусных препаратов величина ХТИ должна быть более 3. Полученные данные в отношении антивирусной активности исследуемых препаратов показывают, что интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный может быть использован в качестве средства противовирусной терапии инфекции, вызываемой вирусом гриппа птиц A/Anhui/2013 (H7N9). Также показано, что антиоксидант Мексидол обладает слабовыраженной противовирусной активностью со значением ХТИ 4,0.

Изучение антивирусной активности комбинаций препаратов

Для изучения влияния антиоксидантов на антивирусную активность интерферона альфа-2b готовили растворы исследуемых препаратов с различной концентрацией как интерферона альфа-2b, так и антиоксидантов. Для оценки эффективности комбинации использовали понятие фракционного ингибирующего коэффициента (ФИК), значение которого вычисляли по формуле (ИД50 — 50% ингибирующая доза):

При значении ФИК 0,5 имеет место умеренный синергизм соединений, при значении ФИК, равном 1,0–1,5, имеет место аддитивный эффект комбинации, при значении ФИК более 2 имеет место антагонизм соединений [9]. Результаты оценки влияния антиоксидантов на антивирусную активность интерферона альфа-2b приведены в табл. 2.

Из представленных данных видно, что антиоксиданты оказывают стимулирующее действие на противовирусную активность интерферона альфа-2b: в присутствии разных концентраций антиоксидантов ИК50 интерферона альфа-2b снижается в 2 и более раза. Так, например, в присутствии аскорбиновой кислоты в концентрации 25 мкг/мл ИК50 интерферона альфа-2b снижается в 8 раз, при использовании концентрации 2,5 мкг/мл — в 2 раза. В присутствии аскорбата натрия в концентрации 25 мкг/мл ИК50 интерферона альфа-2b снижается в 8 раз, при использовании концентрации 2,5 мкг/мл — в 4 раза. При использовании альфа-токоферола ацетата в концентрации 25 мкг/мл и 2,5 мкг/мл ИК50 интерферона альфа-2b снижается в 8 раз. При совместном использовании с Мексидолом в концентрации 25 мкг/мл ИК50 интерферона альфа-2b снижается в 8 раз, при использовании в концентрации 2,5 мкг/мл — в 4 раза.

При анализе эффекта комбинированного применения антиоксидантов и интерферона альфа-2b путем расчета ФИК получены данные, демонстрирующие явно выраженный синергидный эффект для всех комбинаций, причем максимальный синергидный эффект наблюдали при комбинировании с альфа-токоферола ацетатом. Чуть менее выраженный синергидный эффект наблюдали при совместном применении интерферона альфа-2b и аскорбиновой кислоты, наименее выраженный синергизм наблюдали для комбинации интерферона альфа-2b и Мексидола.

Выводы

Интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный является эффективным препаратом в отношении вируса гриппа птиц A/Anhui/2013 (H7N9), значение химиотерапевтического индекса препарата равно 16. Применение интерферона альфа-2b в комбинации с антиоксидантами повышает его эффективность в отношении вируса гриппа птиц A/Anhui/2013 (H7N9) в 8 раз, до величины химиотерапевтического индекса 128.

Литература

  1. Бюллетень ВОЗ «WHO RISK ASSESSMENT. Human infections with avian influenza A (H7N9) virus» от 02.10.2014 г.
  2. Васильев А. Н. Оценка влияния антиоксидантов на специфическую противовирусную активность интерферона алфьа-2 b человеческого рекомбинантного в отношении вируса простого герпеса в культуре клеток // Антибиотики и химиотерапия. 2010. № 7. С. 20–25.
  3. Васильев А. Н., Дерябин П. Г., Галегов Г. А. Протвовирусная активность антиоксидантов и их комбинаций с интерфероном альфа-2b человеческим рекомбинантным в отношении вируса гриппа птиц А/H5N1 // Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10. № 2. С. 32–36.
  4. Грипп и другие респираторные вирусные инфекции: эпидемиология, профилактика, диагностика и терапия / Под ред. О. И. Киселева, И. Г. Маринича, А. А. Сомининой. Монография. СПб, 2003, 244 с.
  5. Ершов Ф. И., Киселев О. И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М., 2005. 368 с.
  6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р. У. Хабриева. М., 2005.
  7. Темичева Е. В., Малиновская В. В., Манахова Л. С. и др. // Вопросы вирусологии. 1986. № 1. C. 12–18.
  8. Темичева Е. В. Интерфероновый статус при рецидивирующем герпесе гениталий и коррекция его нарушений. Автореф. дисс. … канд. мед. наук. М., 1989.
  9. De Clercq E., Sakuma T., Baba M., Pauwels R., Balzarini J., Rosenberg I., Holý A. Antiviral activity of phosphonylmethoxyalkyl derivatives of purine and pyrimidines // Antiviral research. 1987. Vol. 8. № 5–6. Р. 261–272.

П. Г. Дерябин1, доктор медицинских наук, профессор, академик РАЕНГ. А. Галегов, доктор медицинских наук, профессор

ФГБУ ФНИЦЭИМ им. Н. Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва

1 Контактная информация: [email protected]

www.lvrach.ru

Пегилированный интерферон а: эффективность

HBgAg-серопозитивные больные хроническим гепатитом. При проведении II фазы одного клинического испытания 194 больных были произвольно разделены на три группы, получавшие 90,180 и 270 мкг пегилированного ИФН-а-2а 3 раза в неделю в течение 24 нед (см. табл. 8-12). Частота достижения сероконверсии по HB^Ag у больных, лечившихся пегилированным ИФН-а, была больше, чем в группе, получавшей стандартный ИФН-а (32 против 25%). Хотя в этих испытаниях доза пегилированного ИФН-а не достигала оптимальной, удобство однократного его введения явилась причиной замены им стандартного ИФН-а. В дальнейшем в 1П фазе клинических испытаний 814 больных были произвольно разделены на три группы; больные одной группы получали пегилированный ИФН-а-2а в дозе 180 мкг в неделю, больные второй группы — пегилированный ИФН-а-2а в дозе 180 мкг в неделю в сочетании с ламивудином в дозе 100 мг в сутки, больные третьей Ш ламивудин в дозе 100 мг в сутки. Длительность лечения составила 48 нед. К концу лечения наиболее выраженное подавление активности вируса было достигнуто в группе, получавшей сочетанную терапию; снижение концентрации ДНК вируса гепатита В в сыворотке крови в трех группах составило соответственно 4,51og10,7,21og10 и 5,81og10 копий/мл.

Частота достижения сероконверсии в трех группах к концу лечения составила соответственно 27; 24 и 20%, но была существенно выше в двух группах, получавших пегилированный ИФН-а при оценке результатов через 24 мес: 32; 27 и 19% соответственно. Эти данные свидетельствуют о том, что монотерапия пегилированным ИФН-а-2а более эффективна, чем монотерапия ламивудином, если оценивать по частоте сероконверсии по HBEAg, и сравнима с сочетанной терапией пегилированным ИФН-а-2а и ламивудином. Аналогичные результаты были получены в двух других исследованиях, в которых пегилированный ИФН-а-2Ь назначался в постепенно уменьшающихся дозах (с 100 до 50 мкг) в течение 52 нед или по 1,5 мкг/кг в течение 32 нед. Через 24 нед после прекращения лечения, по данным одного исследования, частота достижения сероконверсии по HBgAg составила 29%, будучи одинаковой в группе, получавшей терапию пегилированным ИФН-а-2Ь в сочетании с ламивудином и без него; по данным другого исследования, частота сероконверсии по HBgAg в группе, получавшей сочетанную терапию пегилированным ИФН-а-2Ь и ламивудином, была больше, чем в группе, получавшей только ламивудин (36% и 14% соответственно). Результаты наблюдения в отдаленном периоде за больными, вошедшими в последнее исследование, показали, что значительная разница в частоте сероконверсии по HBgAg сохранялась вплоть до 76-й нед после прекращения лечения.

HBgAg-серонегативные больные хроническим гепатитом. В единственном рандомизированном исследовании, посвященном изучению эффективности пегилированного ИФН-а у этой категории больных, сравниваются три группы (всего 552 HBgAg-серонегативных больных), получавшие только пегилированный ИФН-а-2а в дозе 180 мкг в неделю, сочетанную терапию пегилированным ИФН-а-2а в дозе 180 мкг в неделю и ламивудином в дозе 100 мг в сутки, а также монотерапию ламивудином в дозе 100 мг в сутки. Как и у HBgAg-серопозитивных больных, подавление активности вируса было более выраженным в группе, получавшей сочетанную терапию; снижение концентрации ДНК вируса гепатита В через 48 нед лечения в трех группах составило 4,llog10, 5,01og10 и 4,21og10 копий/мл соответственно. Однако в группе, получившей только пегилированный ИФН-а-2а, и в группе, где проводилась сочетанная терапия, отмечен примерно одинаковый стойкий эффект (снижение концентрации ДНК вируса гепатита В до подпорогового уровня при определении методом ПЦР и нормализация активности АлАТ через 72 нед после прекращения лечения), который превосходил эффект монотерапии ламивудином: 15; 16 и 6% соответственно.

progepatit.ru